Liofilizados de proteínas concentrados, procedimientos y usos.

Un liofilizado que comprende una proteína y manitol, en el que el manitol está compuesto por al menos 70 % de

delta manitol,

no más del 20 % de manitol hidrato y no más del 10 % de manitol amorfo, en el que el área de superficie del liofilizado es igual o superior a 1, 2 m2/g.

Liofilizados de proteínas concentrados, procedimientos y usos

Referencia a solicitudes relacionadas

Esta solicitud reivindica beneficio sobre la solicitud provisional de EE.UU. número de serie 60/702, 025 presentada el 22 de julio de 2005.

Campo de la invención

La invención se refiere a, entre otras cosas, liofilizados de elevada área de superficie que comprende al menos una proteína y que se reconstituyen rápidamente tras la adición de diluyente para proporcionar soluciones de concentraciones elevadas de proteínas, con poca formación de espuma, efervescencia, burbujas, agregados y

partículas, entre otras. Entre las composiciones preferidas y procedimientos para fabricar las mismas, se encuentran las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración a pacientes humanos para el tratamiento de enfermedades.

Antecedentes de la invención

Actualmente, los procedimientos de ADN recombinante desarrollados desde finales de la década de 1970 se usan como los principales medos para producir proteínas farmacéuticas para uso humano y veterinario. Aunque los procedimientos recombinantes han superado a muchos, si no la mayoría, de los retos de producir estas proteínas, sigue habiendo problemas que superar sobre su formulación y administración.

En general, las proteínas se degradan completamente mediante procesos digestivos y, como norma, no se pueden administra por vía oral. Asimismo, en general son demasiado grandes para la administración transdérmica. Adicionalmente, aunque se pueden preparar muchas proteínas como formulaciones líquidas, algunas a una concentración bastante elevada, son propensas, en el estado líquido, a la degradación física y/o química. En concreto, la agregación es habitual en formulaciones de proteínas líquidas a concentraciones elevadas. Las formulaciones liofilizadas suelen ser mucho más estables. No sufren la degradación o agregación que se produce en las formulaciones líquidas. O, si lo hacen, la degradación o pérdida de la actividad proteica se produce a una velocidad mucho más lenta. No obstante, ha sido difícil o no posible producir liofilizados estables de muchas proteínas terapéuticas que se pueden reconstituir en las concentraciones necesarias para eficacia terapéutica.

Los problemas asociados con la formulación de terapéuticas proteicas son especialmente exigentes cuando se desean concentraciones elevadas como, por ejemplo, en las formulaciones para administración subcutánea. De hecho, muchas proteínas no se pueden formular de forma estable en solución como concentraciones elevadas. E, incluso cuando se pueden formular las proteínas, al menos inicialmente a concentraciones elevadas, las formulaciones a menudo sufren diversas características indeseables, tales como escasa vida de almacenamiento, una reconstitución mala o poco fiable y turbidez, espumas o burbujas inaceptables tras la reconstitución. Como resultado, muchas terapéuticas proteicas que podrían administrarse de forma ventajosa por vía subcutánea tienen que administrarse por vía intravenosa en su lugar. Dichos problemas no solo son característicos de las proteínas formuladas completamente en forma líquida sino también de las proteínas que han sido liofilizadas y después deben

45 reconstituirse en una forma líquida para administración.

Claramente existe una necesidad de procedimientos para producir y formular agentes terapéuticos proteicos como liofilizados estables. En concreto existe la necesidad de liofilizados que se pueden reconstituir para proporcionar formulaciones de concentración elevada. Y, a este respecto, existe la necesidad de liofilizados que se puedan reconstituir para proporcionar formulaciones de concentración proteica elevada para inyección SC. Uno de los principales obstáculos para alcanzar dichas formulaciones es producir una composición purificada estable que se puede reconstituir en el punto de atención en las concentraciones proteicas elevadas necesarias para una dosificación eficaz mediante administración SC.

55 Los obstáculos para obtener dichas formulaciones incluyen: (i) inestabilidad proteica incontrolada e impredecible durante el procesamiento y almacenamiento, y pérdida de actividad causada de este modo; (ii) tiempos de reconstitución excesivamente prolongados; (iii) formación impredecible e incontrolada de agregados que afectan de forma perjudicial a la actividad o tienen como resultado una turbidez inaceptable; (iv) formación de espuma al reconstituir que disminuye la actividad de la unidad o que es estéticamente inaceptable para los usuarios; (v) formación de burbujas y efervescencia que produce desnaturalización y disminuye la actividad o son inaceptables para los usuarios; (v) atrapamiento de burbujas que interfieren en la dosificación adecuada; (vii) partículas residuales que reducen la recuperación y dosificación y/o que son inaceptables para los usuarios; (viii) viscosidad elevada que dificulta cargar adecuadamente las jeringas para administración; y (ix) otras alteraciones perjudiciales incontrolables en la bioactividad, biodisponibilidad, fiabilidad de la dosificación o aceptabilidad de la dosificación, que es el

65 resultado de, procedimiento de formulación y reconstitución.

Shire y col. han revisado las oportunidades y retos de las formulaciones proteicas de concentración elevada en su artículo de revisión "Challenges in the Development of High Protein Concentration Formulations, " J. Pharm. Sci. 93 (6) : 1390-1402 (June 2004) . Varios trabajadores han descrito enfoques para mejorar las formulaciones proteicas altamente concentradas. Roser, en la patente de EE.UU. Nº 4.891, 319, describe el uso de 0, 05 y 25 por ciento en 5 peso de trehalosa para proteger las proteínas contra la desnaturalización durante la desecación. Aunque la trehalosa reduce la pérdida de actividad en algunos regímenes de desecación, no resuelve muchos otros de los problemas mencionados con anterioridad. Andya y col., en la patente de EE.UU. Nº 6.685.940, describen un liofilizado de anticuerpos preparado con un azúcar no reductor e histidina y una proporción molar del anticuerpo/azúcar de 100 a

600. Según se ha informado, el liofilizado podría reconstituirse en una solución isotónica que contiene de 50 a 400

mg/ml de anticuerpo. El proceso de Andya requiere solo una etapa de desecación y es posible que a menudo produzca resultados no satisfactorios. Aunque se ha demostrado que esto es aparentemente eficaz para algunos anticuerpos, no se ha probado que en general sea aplicable y no supera todos los problemas mencionados con anterioridad.

Rapp y Grandgeorge, en la publicación de solicitud de EE.UU. Nº 2004/0005310 A1, describen procedimientos para reconstituir proteínas liofilizadas a presión de gas entre 1 mbar y la presión atmosférica, que son particularmente adecuados para las proteínas de la coagulación de la sangre. Los procedimientos parecen hacer avanzar la técnica ligeramente para algunas proteínas. En concreto, la innovación no parece ser ampliamente aplicable y probablemente no sea adecuada para la autoadministración por el paciente.

El documento US 6.821.515 describe una formulación de proteínas liofilizadas que se puede reconstituir con un diluyente adecuado para generar una formulación reconstituida con concentración proteica elevada. En concreto, la formulación proteica es para usar en un procedimiento de tratar el cáncer y comprende un anticuerpo que se une a HER2.

Por tanto, a pesar de estas y otras mejoras, sigue existiendo la necesidad de procedimientos mejorados para preparar y formula proteínas altamente concentradas y para preparaciones proteicas de concentración elevada que tienen una vida de almacenamiento larga, son estables en condiciones relativamente desfavorables (que se pueden encontrar durante el envío, almacenamiento y uso) , se pueden reconstituir de forma fiable y administrar de modo

conveniente en forma y manera completamente aceptables a una amplia diversidad de usuarios. En concreto, existe la necesidad de procedimientos fiables para formular las terapéuticas proteicas de un modo que conserven la actividad, proporcionen una estabilidad adecuada para permitir el almacenamiento a largo plazo y que proporcionen una formulación fiable en el punto de atención para formulaciones proteicas de concentración elevada adecuadas para administración subcutánea.

Resumen

La... [Seguir leyendo]

1. Un liofilizado que comprende una proteína y manitol, en el que el manitol está compuesto por al menos 70 % de

delta manitol, no más del 20 % de manitol hidrato y no más del 10 % de manitol amorfo, en el que el área de 5 superficie del liofilizado es igual o superior a 1, 2 m2/g.

2. Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el manitol está compuesto por al menos 70 % de delta manitol, no más del 10 % de manitol amorfo y no más del 20 % de manitol hidrato más alfa manitol más beta manitol.

3. Un liofilizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que además comprende sacarosa.

4. Un liofilizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que además comprende un 15 tensioactivo

5. Un liofilizado de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 que además comprende uno o más de un agente espesante, un agente estabilizante, un lioprotector o un tensioactivo.

20 6. Un liofilizado de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que la proteína es un anticuerpo o una variante, derivado, fragmento o mimético del mismo.

7. Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humano o humanizado,

o una variante, derivado, fragmento o mimético del mismo. 25

8. Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humano o humanizado.

9. Un liofilizado de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que la proteína comprende una región de un

anticuerpo humano o humanizado, o una variante, derivado, fragmento o mimético del mismo. 30

10. Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 9, en el que la región es una región Fc, o una variante, derivado, fragmento o mimético de la misma.

11.Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 10, en el que la región es una región Fc.

12.Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en la que la proteína es un pepticuerpo.

13. Un liofilizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la proteína de fusión que

comprende una región Fc de un anticuerpo o una variante, derivado, fragmento o mimético de la misma, y un resto 40 de unión a TNF de un receptor de TNF, o una variante, derivado, fragmento o mimético de la misma;

14. Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 13, en el que la proteína es una proteína de fusión que comprende una región Fc de un anticuerpo humano o una variante, derivado, fragmento o mimético de la misma, y un resto de unión a TNF de un receptor de TNF alfa humano, o una variante, derivado, fragmento o mimético de un receptor de

45 TNF alfa humano.

15. Un liofilizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la proteína es una proteína de fusión que comprende una región Fc de un anticuerpo o una variante, derivado, fragmento o mimético de la misma, y un resto de unión a IL-1 de un ligando proteico de un receptor de IL-1, o una variante, derivado, fragmento

50 o mimético del mismo.

16. Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 15, en el que la proteína es una proteína de fusión que comprende una región Fc de un anticuerpo humano o una variante, derivado, fragmento o mimético del mismo, y el resto de unión al receptor de IL-1 de un ligando proteico del receptor de IL-1.

17. Un liofilizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la proteína es una proteína de fusión que comprende una región Fc de un anticuerpo humano o una variante, derivado, fragmento o mimético del mismo, y el resto de unión al receptor de IL-1 de un antagonista del receptor de IL-1.

60 18. Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 17, en el que la proteína es una proteína de fusión que comprende una región Fc de un anticuerpo humano o una variante, derivado, fragmento o mimético del mismo, y el resto de unión al receptor de IL-1 del antagonista de la proteína IL-1 ra humana del receptor de IL-1.

19. Un liofilizado de acuerdo con la reivindicación 18, en el que la proteína es región es Fc-I L-1 ra. 65