Estabilizador para una liofilizada vivos atenuados del virus de la enfermedad de Carré canino (CDV) y del virus de parainfluenza de tipo 2 canino (cPi2) composición inmunógena que comprende al menos un monosacárido reductor y al menos un compuesto antioxidante ácido,

en el que dicho al menos un compuesto antioxidante ácido comprende ácido aspártico; y en el que dicho al menos un monosacárido reductor comprende glucosa, galactosa, fructosa, manosa, sorbosa, o combinaciones de estas; y en el que dicho al menos un monosacárido reductor está presente con una concentración que va desde aproximadamente 20% a aproximadamente 50% en p/p y dicho al menos un ácido antioxidante está presente con una concentración que va desde aproximadamente 1.5% a aproximadamente 6% en p/p

Estabilizadores para vacunas liofilizadas

SECTOR DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere en general a los sectores de inmunología y tecnología de vacunas. Más específicamente, la presente invención se refiere a estabilizadores para composiciones inmunógenas y/o de vacunas vivas atenuadas liofilizadas que pueden comprender, entre otros, al paramixovirus canino. La invención se refiere también a composiciones inmunógenas y/o de vacunas vivas atenuadas liofilizadas estabilizadas, de, por ejemplo, el paramixovirus canino, que puede contener a estos estabilizadores. Otros aspectos de la invención se describen en la descripción siguiente o resultan obvias a partir de esta, y están en el ámbito de la invención.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las composiciones inmunógenas y de vacunas que comprenden ingredientes biológicos, tales como virus, bacterias, parásitos, hongos, proteínas, polipéptidos, glicoproteínas, y especialmente, microorganismos vivos atenuados, son marcadamente sensibles a las condiciones en que son preparadas, formuladas y almacenadas.

Estos ingredientes biológicos pueden modificarse y degradarse mediante reacciones químicas (por ejemplo hidrólisis, desaminación, Reacción de Maillard) , muchas de las cuales se median por agua. El agua líquida permite movimientos moleculares y puede dar como resultado la modificación de conformaciones de proteína en composiciones que comprenden ingredientes biológicos. Limitando el acceso al agua o retirándola, se reducen en un factor mayor la modificación y la degradación. Los procedimientos anteriores para conferir estabilidad a los ingredientes biológicos implicaban principalmente congelar el agua o retirar agua para liofilizar.

La liofilización, o el proceso de liofilización, es una técnica de uso común para retirar agua en la preparación de productos deshidratados. En general, "liofilizar" una composición acuosa implica tres etapas. Primero, se congela la composición acuosa en condiciones de baja temperatura. En segundo lugar, se retira el agua congelada por sublimación en condiciones de presión reducida y baja temperatura. En esta etapa, la composición suele contener aproximadamente 15% de agua. En tercer lugar, el agua residual también se retira por desorción en condiciones de presión reducida y temperaturas mayores. Al final del proceso de liofilización, se obtiene un producto liofilizado, también llamado "pastilla" o "torta". El producto liofilizado contiene muy poca agua residual (que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% peso/ peso) y un material seco con forma amorfa. Este estado específico se califica como "vítreo".

Sin embargo, se observa una sustancial pérdida de actividad inmunogénica de ingredientes biológicos durante las etapas de preparación, tales como antes de y durante la liofilización, y también durante el almacenamiento de composiciones inmunógenas y de vacuna. La integridad de los ingredientes biológicos debe salvaguardarse para asegurar que se mantienen la eficiencia de inmunización de las composiciones inmunógenas y de las vacunas. La actividad inmunogénica de los ingredientes biológicos se mide por la capacidad para inducir y estimular una respuesta inmunológica cuando se administra a un huesped o sujeto.

Para limitar la manipulación de sujetos y el número de administraciones, hay una gran necesidad en el estado de la técnica de disponer de composiciones inmunógenas o de vacunas multivalentes. Por definición, una composición inmunógena multivalente o composición de vacuna comprende más de un componente inmunógeno activo procedente de, o derivado de, al menos dos diferentes patógenos. Los virus de diferentes generaciones pueden variar en estabilidad durante la etapa de liofilización y el posterior período de almacenamiento, lo que resulta en una pérdida de viabilidad o infectividad. En el caso de virus tales como el paramixovirus canino, los componentes inmunógenos activos comúnmente administrados son virus vivos atenuados. Para estimular eficientemente el sistema inmune, los virus vivos atenuados se tienen que replicar en el sujeto inmunizado. La pérdida de viabilidad o infectividad puede ocurrir durante el proceso de liofilización de las composiciones inmunógenas o de vacunas multivalentes, durante el almacenamiento de las composiciones, o antes de la administración de las composiciones después de la reconstitución. Por lo tanto, se añaden estabilizadores a estas composiciones liofilizadas. Sin embargo, para obtener composiciones inmunógenas o de vacunas multivalentes que mantienen su infectividad y/o viabilidad, sería especialmente ventajoso un estabilizador común que sea capaz de preservar la viabilidad y la infectividad de diferentes patógenos vivos atenuados.

La estabilización de ingredientes biológicos en forma seca implicaba típicamente la preservación de antitoxinas, antígenos y bacterias (Flosodort y otros (1935) J. immunol. 29, 389) . Sin embargo, una limitación de este proceso incluía la desnaturalización parcial de proteínas cuando se secan a partir de un estado acuoso a temperatura ambiente. El secado a partir del estado congelado contribuye a reducir la desnaturalización y conduce a una mejor, aunque incompleta, preservación de los ingredientes biológicos incluyendo las bacterias y los virus (Stamp y otros. (1947) J. Gen. Microbiol. 1, 251; Rightsel y otros. (1967) cr y obiology 3, 423; Rowe y otros. (1971) cr y obiology 8, 251) .

Más recientemente, se han añadido azúcares tales como sacarosa, rafinosa y trehalosa en varias combinaciones como estabilizadores antes de la liofilización de los virus. Se ha verificado para un gran número de compuestos su capacidad para estabilizar diferentes vacunas que contienen ingredientes biológicos vivos atenuados, en particular virus. Estos compuestos incluyen SPGA (sacarosa, fosfato, glutamato, y albúmina; Bovarnick y otros. (1950) J. Bacteriol. 59, 509-522; La patente americana número 4, 000, 256) , albúmina de suero bovino o humano, sales de metales alcalinos de ácido glutámico, sales de aluminio, sacarosa, gelatina, almidón, lactosa, sorbitol, Tris-EDTA, hidrolizado de caseína, lactobionato de sodio y potasio, y fosfato de metal alcalino monometálico o bimetálico. Otros compuestos incluyen, por ejemplo, SPG-NZ-amina (ver por ejemplo la patente americana número 3, 783, 098) y mezclas de polivinilpirrolidona (PVP) (ver por ejemplo la patente americana número 3, 915, 794) .

Las composiciones de vacuna e inmunógenas han tenido un enorme impacto en la salud pública reduciendo la morbididad y la mortalidad causadas por una variedad de patógenos virulentos. Sin embargo, los efectos secundarios no deseados provocados por los aditivos de las composiciones inmunógenas y de vacunas siguen suponiendo un riesgo potencial que pueden superar cualquier atributo de protección y terapéutico de las composiciones inmunógenas y de vacunas.

En la forma frecuentemente utilizada en vacunas en los Estados Unidos, la gelatina puede provocar reacciones alérgicas graves entre aproximadamente 1 de 2 millones de dosis. Las reacciones alérgicas que previamente se creían originadas por la albúmina (proteína del huevo) están más probablemente causadas por la gelatina de la propia vacuna. En el caso de la albúmina del suero humano, aunque no se haya asociado enfermedad alguna a la albúmina del suero humano en vacunas, hay riesgo de transmisión de un virus a través de esta proteína, que se deriva de la sangre humana.

Los productos de origen bovino, tales como la albúmina y la gelatina bovinas, llevan consigo el riesgo de transmisión de la enfermedad Creutzfeld- Jakob (también conocida como "Enfermedad de las vacas locas") a través de la sangre y productos de tejidos conjuntivos de buey empleados en la fabricación de vacunas. Sin embargo, no se ha informado de casos donde la CJD se transmitió a través de sangre y productos de tejidos conjuntivos, no se han encontrado priones causantes de la CJD en la sangre o en tejido conjuntivo, y la utilización de productos derivados de bovino de vacas importadas de países donde son conocidos casos de Enfermedad de las vacas locas está prohibida. Sin embargo, a la vista de estos riesgos, se han realizado esfuerzos para eliminar la utilización de estos productos en composiciones inmunógenas en las que se han observado efectos inmunes no deseados.

De Rizzo (de Rizzo y otros. (1989) Bull. Pan. Am. Health Organ. 23 (3) , 299-305) informan acerca de preparaciones liofilizadas... [Seguir leyendo]

1. Estabilizador para una liofilizada vivos atenuados del virus de la enfermedad de Carré canino (CDV) y del virus de parainfluenza de tipo 2 canino (cPi2) composición inmunógena que comprende al menos un monosacárido reductor y al menos un compuesto antioxidante ácido, en el que dicho al menos un compuesto antioxidante ácido comprende ácido aspártico; y en el que dicho al menos un monosacárido reductor comprende glucosa, galactosa, fructosa, manosa, sorbosa, o combinaciones de estas; y en el que dicho al menos un monosacárido reductor está presente con una concentración que va desde aproximadamente 20% a aproximadamente 50% en p/p y dicho al menos un ácido antioxidante está presente con una concentración que va desde aproximadamente 1.5% a aproximadamente 6% en p/p.

2. El estabilizador de la reivindicación 1, que comprende además

(a) al menos un agente de carga o

(b) al menos un agente de carga en el que dicho al menos un agente de carga comprende dextrano, maltodextrina, polivinilpirrolidona, hidroxietil almidón, o combinaciones de estas o

(c) al menos un alcohol de azúcar o

(d) al menos un alcohol de azúcar en el que el alcohol de azúcar comprende sorbitol, manitol xilitol, maltitol o combinaciones de estas o

(e) al menos un oligosacárido no reductor o

(f) al menos un oligosacárido no reductor en el que dicho al menos un oligosacárido no reductor comprende trehalosa, sacarosa, rafinosa o combinaciones de estas o

(g) al menos un alcohol de azúcar y al menos un oligosacárido no reductor o

(h) al menos un alcohol de azúcar y al menos un oligosacárido no reductor en el que dicho al menos un alcohol de azúcar comprende sorbitol, manitol xilitol, maltitol o combinaciones de estas, y en el que dicho al menos un oligosacárido no reductor comprende trehalosa, sacarosa, rafinosa o combinaciones de estas.

3. Suspensión o solución inmunógena que comprende paramixovirus vivos atenuados que comprende al CDV y al cPi2, mezclados con el estabilizador de la reivindicación 1 ó 2.

4. La suspensión o solución inmunógena de la reivindicación 3, en la que la suspensión o solución inmunógena es una suspensión o solución inmunógena multivalente que comprende además al menos un componente inmunógeno activo derivado de un patógeno diferente del paramixovirus.

5. La suspensión o solución inmunógena de la reivindicación 4, en la que

(a) dicho al menos un componente inmunógeno activo es un derivado de un patógeno que comprende Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxvirididae, Rhabdoviridae, o combinaciones de estos o

(b) dicho al menos un componente inmunógeno activo comprende el adenovirus canino de tipo 2 (CAV2) vivo atenuado y el parvovirus canino (CPV) vivo atenuado o

(c) dicho al menos un componente inmunógeno activo comprende un vector vírico que comprende uno o más inmunógenos heterólogos o

(d) dicho al menos un componente inmunógeno activo comprende un vector plasmídico que comprende uno o más inmunógenos heterólogos.

6. La suspensión o solución inmunógena según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, en la que el estabilizador comprende

(a) al menos un monosacárido reductor a una concentración final que va desde aproximadamente 1% a aproximadamente 5% en p/v o aproximadamente 1.5% a aproximadamente 5% en p/v o aproximadamente 1.5% a aproximadamente 4% en p/v o aproximadamente 2.5% a aproximadamente 3% en p/v o aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.3% en p/v o

(b) al menos un compuesto antioxidante ácido a una concentración final que va desde aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.25% en p/v o de aproximadamente 0.2% en p/v o que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 7.5% en p/v o

(c) al menos un agente de carga a una concentración final que va desde aproximadamente 1.5% a aproximadamente 5% en p/v o

(d) al menos un alcohol de azúcar a una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% en p/v y al menos un monosacárido reductor, con la condición de que la concentración final de dicho al menos un monosacárido reductor y dicho al menos un alcohol de azúcar sea inferior o igual a aproximadamente 7.5% en p/v o

(e) al menos un oligosacárido no reductor cuya concentración final va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% en p/v y al menos un monosacárido reductor, con la condición de que la concentración final del monosacárido reductor y del oligosacárido no reductor sea inferior o igual a aproximadamente 7.5% en p/v o

(f) al menos un alcohol de azúcar a una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% en p/v, al menos un oligosacárido no reductor a una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% en p/v, y al menos un monosacárido reductor, con la condición de que la concentración final de monosacárido reductor, alcohol de azúcar y oligosacárido no reductor sea inferior o igual a aproximadamente 12.5% en p/v.

7. La suspensión o solución inmunógena según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, en el que el estabilizador comprende:

(a) (i) una concentración final desde aproximadamente 1% a aproximadamente 5% en p/v de una mezcla de dos monosacáridos reductores, (ii) una concentración final desde aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.3% en p/v de al menos un ácido antioxidante, y (iii) una concentración final desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 7.5%p/v de al menos un agente de carga o

(b) (i) una concentración final que va desde aproximadamente 1% a aproximadamente 5% en p/v de al menos un monosacárido reductor, (ii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% en p/v de al menos un oligosacárido no reductor, (iii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.3% en p/v de al menos un ácido antioxidante, y (iv) una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 7.5%p/v de al menos un agente de carga, con la condición de que la concentración final de (i) y (ii) sea inferior o igual a aproximadamente 7.5% en p/v o

(c) (i) una concentración final que va desde aproximadamente 1.5% a aproximadamente 4% en p/v de al menos un monosacárido reductor, (ii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 2.5% en p/v de al menos un oligosacárido no reductor, (iii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.25% en p/v de al menos un ácido antioxidante, y (iv) una concentración final que va desde aproximadamente 1.5% a aproximadamente 5% en p/v de al menos un agente de carga, con la condición de que la concentración final de (i) y (ii) sea inferior o igual a aproximadamente 5% en p/v o

(d) (i) una concentración final que va desde aproximadamente 1% a aproximadamente 5% en p/v de al menos un monosacárido reductor, (ii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% en p/v de al menos un alcohol de azúcar, (iii) una concentración final desde aproximadamente 0.1 % a aproximadamente 0.3% en p/v de al menos un ácido antioxidante, con la condición de que la concentración final de

(i) y (ii) sea inferior o igual a aproximadamente 7.5% en p/v o

(e) (i) una concentración final que va desde aproximadamente 1.5% a aproximadamente 4% en p/v de al menos un monosacárido reductor, (ii) una concentración final que va desde aproximadamente 1.5% a aproximadamente 3% en p/v de al menos un alcohol de azúcar, y (iii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.25% en p/v de al menos un ácido antioxidante, con la condición de que la concentración final de

(i) y (ii) sea inferior o igual a aproximadamente 5% en p/v o

(f) (i) una concentración final que va desde aproximadamente 1 % a aproximadamente 5% en p/v de al menos un monosacárido reductor, (ii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% en p/v de al menos un alcohol de azúcar, (iii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% en p/v de al menos un oligosacárido no reductor, y (iv) una concentración final que va desde aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.3% en p/v de al menos un ácido antioxidante, con la condición de que la concentración final de (i) , (ii) y (iii) sea inferior o igual a aproximadamente 12.5% en p/v o

(g) (i) una concentración final que va desde aproximadamente 1.5% a aproximadamente 4% en p/v de al menos un monosacárido reductor, (ii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 5% en p/v de al menos un alcohol de azúcar, (iii) una concentración final que va desde aproximadamente 0.5% a aproximadamente 2.5% en p/v de al menos un oligosacárido no reductor, y (iv) una concentración final que va desde aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.25% en p/v de al menos un ácido antioxidante, con la condición de que la concentración final de (i) , (ii) y (iii) sea inferior o igual a aproximadamente 10% en p/v.

8. La composición inmunógena estabilizada liofilizada de CDV y cPi2 vivos atenuados que comprende (i) una concentración final que va desde aproximadamente 20% a aproximadamente 50% en p/p de al menos un monosacárido reductor, (ii) una concentración final que va desde aproximadamente 1.5% a aproximadamente 6% en p/p de al menos un ácido antioxidante que comprende ácido aspártico, ácido glutámico, ácido ascórbico, o combinaciones de estos.

9. La composición inmunógena de la reivindicación 8, en la que (ii) la concentración final de al menos un ácido antioxidante que comprende ácido aspártico, ácido glutámico, ácido ascórbico, o combinaciones de estos va desde aproximadamente 2% a aproximadamente 6% en p/p de al menos un ácido antioxidante que comprende ácido aspártico, ácido glutámico, ácido ascórbico, o combinaciones de estos, y que comprende además (iii) una concentración final que va desde aproximadamente 15% a aproximadamente 70% en p/p de al menos un agente de carga.

10. La composición inmunógena de la reivindicación 8, que comprende además al menos un componente inmunógeno activo derivado de un patógeno diferente del paramixovirus.

11. La composición inmunógena de la reivindicación 10, en la que dicho al menos un componente inmunógeno activo

(a) es un derivado de un patógeno que comprende Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae, o combinaciones de estos o

(b) comprende el adenovirus canino de tipo 2 (CAV2) vivo atenuado y el parvovirus canino (CPV) vivo atenuado o

(c) comprende un vector vírico que comprende uno o más inmunógenos heterólogos o

(d) comprende un vector plasmídico que comprende uno o más inmunógenos heterólogos.

12. La composición inmunógena multivalente estabilizada liofilizada que comprende al CDV vivo atenuado, el cPi2 vivo atenuado y al menos un componente inmunógeno activo derivado de un patógeno diferente del paramixovirus, y que comprende: (i) una concentración final que va desde aproximadamente 20% a aproximadamente 50% en p/p de al menos un monosacárido reductor, (ii) una concentración final que va desde aproximadamente 2% a aproximadamente 6% en p/p de al menos un ácido antioxidante que comprende ácido aspártico, ácido glutámico, ácido ascórbico, o combinaciones de estos, y (iii) una concentración final que va desde aproximadamente 15% a aproximadamente 70% en p/p de al menos un agente de carga.

13. La composición inmunógena multivalente de la reivindicación 12, en el que dicho al menos un componente inmunógeno activo

(a) es un derivado de un patógeno que comprende Adenoviridae, Parvoviridae, Coronaviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae, o combinaciones de estos o

(b) comprende el adenovirus canino de tipo 2 (CAV2) vivo atenuado y el parvovirus canino (CPV) vivo atenuado o

(c) comprende un vector vírico que comprende uno o más inmunógeno heterólogo o

(d) comprende un vector plasmídico que comprende uno o más inmunógenos heterólogos.

14. Procedimiento de liofilización de una suspensión o solución inmunógena de CDV y cPi2 vivos atenuados, que comprende (a) poner en contacto la suspensión o solución inmunógena de CDV y cPi2 vivos atenuados con un estabilizador tal como se define en la reivindicación 1 o 2, de modo que se forma una suspensión o solución inmunógena estabilizada; (b) enfriar, a presión atmosférica, la suspensión o solución inmunógena estabilizada a una temperatura inferior a aproximadamente el valor Tg de la suspensión inmunógena estabilizada; (c) secar la suspensión o solución inmunógena estabilizada por sublimación de hielo a baja presión; y (d) retirar el exceso de agua residual reduciendo aún más la presión y aumentando la temperatura de la suspensión o solución inmunógena estabilizada.

15. Kit que comprende un primer frasco que contiene la composición inmunógena estabilizada liofilizada de CDV y cPi2 vivos atenuados tal como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11 o la composición inmunógena multivalente liofilizada tal como se define en la reivindicación 12, y un segundo frasco que contiene un disolvente.