Composición acuosa líquida que comprende

Un polipéptido del factor VII (i);

Un agente tampón (ii) adecuado para mantener el pH en el intervalo de 5,5 a 9,0;

Un agente (iii) seleccionado de la lista de: una sal de calcio, una sal de magnesio, o una mezcla de las mismas; donde la concentración de (iii) es inferior a 15 mM; y

Un agente modificador de la fuerza iónica (iv);

donde la fuerza iónica de la composición es al menos 200 mM.

Composición líquida de polipéptidos del factor VII.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a composiciones líquidas acuosas que contienen polipéptidos del factor VII, y a métodos para la producción y uso de tales composiciones. Más particularmente, esta invención se refiere a composiciones líquidas estabilizadas contra la degradación física y/o química.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Una variedad de factores implicados en el proceso de coagulación de la sangre han sido identificados, incluyendo el factor VII (FVII) , una glicoproteína de plasma. La hemostasis se inicia mediante la formación de un complejo entre el factor tisular (TF) que se expone a la sangre en circulación después de producirse una herida en la pared de un vaso, y el FVIIa que está presente en la circulación en una cantidad correspondiente a aproximadamente un 1% del total de la masa de proteína del FVII. El FVII existe en el plasma principalmente como un zimógeno monocatenario, que es dividido por FXa en su forma bicatenaria activada, el FVIIa. El factora VIIa recombinante activado (rFVIIa) ha sido desarrollado como un agente prohemostático. La administración de rFVIIa ofrece una respuesta prohemostática rápida y altamente eficaz en sujetos hemofílicos con sangrados que no se pueden tratar con otros productos de factor de coagulación debido a la formación de anticuerpos. También el sangrado en sujetos con deficiencia del factor VII o sujetos con un sistema de coagulación normal pero que experimentan sangrado se pueden tratar exitosamente con FVIIa.

Es deseable tener formas de administración del factor VIIa adecuadas tanto para el almacenamiento como para la distribución. Idealmente, el producto de fármaco se almacena y administra como un líquido. Alternativamente, el producto de fármaco es liofilizado, es decir, secado por congelación, y luego reconstituido añadiendo un diluyente adecuado justo antes del uso del paciente. Idealmente, el producto de fármaco tiene una estabilidad suficiente para su almacenamiento a largo plazo, es decir, más de seis meses.

La decisión de mantener el producto de fármaco final como un líquido o liofilizarlo se basa normalmente en la estabilidad del fármaco de proteínas en dichas formas. La estabilidad de la proteína se puede ver afectada entre otras cosas por factores tales como la fuerza iónica, pH, temperatura, ciclos repetidos de congelación/descongelación, y exposiciones a esfuerzos cortantes. La proteína activa puede perderse como resultado de inestabilidades físicas, incluyendo la desnaturalización y la agregación (tanto la formación de agregados solubles como insolubles) , así como inestabilidades químicas, incluyendo, por ejemplo, hidrólisis, desamidación y oxidación, por nombrar sólo unos pocos. Para una reseña general de la estabilidad de fármacos de proteínas, véase, por ejemplo, Manning, et al., Pharmaceutical Research 6:903- 918 (1989) .

Mientras la posible incidencia de inestabilidades de proteína es muy apreciada, es imposible predecir los problemas de inestabilidad particulares de una proteína en particular. Cualquiera de estas inestabilidades pueden dar como resultado la formación de un subproducto de proteínas, o derivado, que tenga una actividad reducida, una toxicidad aumentada, y/o una inmunogenicidad aumentada. De hecho, la precipitación de proteínas puede dar lugar a una trombosis, una falta de homogeneidad de la forma y cantidad de dosificación, así como a jeringas atascadas. Además, modificaciones postraduccionales tal como, por ejemplo, la carboxilación gamma de determinados residuos de ácido glutámico en el N-terminal y la adición de cadenas laterales de carbohidratos proporcionan sitios potenciales que pueden ser susceptibles de modificación durante el almacenamiento. También, específicamente para el factor VIIa, siendo una serín proteasa, puede ocurrir una fragmentación debida a autocatálisis (degradación enzimática) . Así, la seguridad y eficacia de cualquier composición de una proteína está directamente relacionada con su estabilidad. Mantener la estabilidad en una forma líquida es generalmente diferente a una forma liofilizada debido al potencial aumentado considerablemente para el movimiento molecular y, por lo tanto, la probabilidad aumentada de interacciones moleculares. Mantener la estabilidad en una forma concentrada es también diferente debido a la propensión a la formación de agregados en concentraciones de proteína aumentadas.

Al desarrollar una composición líquida, se tienen en cuenta muchos factores. A corto plazo, es decir, menos de seis meses, la estabilidad líquida generalmente depende de evitar grandes cambios estructurales, tal como la desnaturalización y agregación. Estos procesos son descritos en la bibliografía para varias proteínas, y existen muchos ejemplos de agentes estabilizantes. Es bien conocido que un agente eficaz para estabilizar una proteína actúa en realidad para desestabilizar otra. Una vez la proteína ha sido estabilizada contra grandes cambios estructurales, desarrollar una composición líquida para una estabilidad a largo plazo (p. ej., de más de seis meses) depende de estabilizar adicionalmente la proteína a partir de tipos de degradación específicos para dicha proteína. Tipos más específicos de degradación pueden incluir, por ejemplo, la aleatorización de enlace de disulfuro, oxidación de determinados residuos, desamidación, ciclización. Aunque no siempre es posible precisar los tipos de degradación individual, se han desarrollado ensayos para controlar cambios imperceptibles para controlar la capacidad de excipientes específicos para estabilizar únicamente la proteína de interés.

Además de las consideraciones de estabilidad, se seleccionan generalmente excipientes, que están aprobados por varias agencias médicas reguladoras a nivel mundial. Es deseable que el pH de la composición esté en un intervalo fisiológicamente adecuado en una inyección/infusión, de lo contrario el paciente puede experimentar dolor y molestias.

Para una reseña general de composiciones de proteína, véase, por ejemplo, Cleland et al.:The development of stable protein compositions: A closer look at protein aggregation, deamidation and oxidation, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 1993, 10 (4) : 307-377 ; y Wang et al., Parenteral compositions of proteins and peptides: Stability and stabilizers, Journal of Parenteral Science and Technology 1988 (suplemento) , 42 (2S) .

Otras publicaciones de interés con relación a la estabilización de proteínas son de la siguiente manera. El documento U.S. 20010031721 A1 (American Home Products) se refiere a composiciones altamente concentradas, liofilizadas, y líquidas del factor IX. El documento U.S. 5, 770, 700 (Genetics Institute) se refiere a composiciones líquidas del factor IX. El documento WO 97/19687 (American Red Cross) se refiere a composiciones líquidas de proteínas plasmáticas, en particular factor VIII y factor IX. El documento U.S. 4, 297, 344 divulga la estabilización de factores de coagulación II y VIII, antitrombina III, y plasminógeno contra el calor añadiendo aminoácidos seleccionados tales como glicina, alanina, hidroxiprolina, glutamina, y ácido aminobutírico, y un carbohidrato tal como un monosacárido, un oligosacárido, o un alcohol de azúcar.

El documento US6310183 divulga una composición que consiste en rFVIIa, cloruro de sodio (2, 92 mg/ml) , glicilglicina, polisorbato 80, cloruro de calcio (1, 47 mg/ml) y manitol a un pH de 5, 5.

El factor VIIa experimenta varias vías de degradación, especialmente agregación (dimerización) , oxidación, y escisión autolítica (recorte del esqueleto peptídico) . Además, la precipitación puede ocurrir. Muchas de estas reacciones se pueden ralentizar significativamente mediante la eliminación del agua de la proteína. No obstante, el desarrollo de una composición acuosa para el factor VIIa tiene las ventajas de eliminar errores de reconstitución, aumentando así la exactitud de dosificación, así como simplificar el uso del producto clínicamente, aumentando así la adaptabilidad del paciente. Idealmente, las composiciones de factor VIIa deberían ser estables durante más de 6 meses en un intervalo amplio de concentraciones de proteína. Esto permite flexibilidad en los métodos de administración. Generalmente, formas más altamente concentradas permiten la administración de volúmenes inferiores, lo que es altamente deseable desde el punto de vista de los pacientes. Composiciones líquidas pueden tener muchas... [Seguir leyendo]

1. Composición acuosa líquida que comprende Un polipéptido del factor VII (i) ; Un agente tampón (ii) adecuado para mantener el pH en el intervalo de 5, 5 a 9, 0; Un agente (iii) seleccionado de la lista de: una sal de calcio, una sal de magnesio, o una mezcla de las mismas; donde la concentración de (iii) es inferior a 15 mM; y Un agente modificador de la fuerza iónica (iv) ; donde la fuerza iónica de la composición es al menos 200 mM.

2. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la fuerza iónica de la composición es al menos 250 mM, tal como al menos 300 mM, 400 mM, 800 mM, 1000 mM, 1200 mM, 1500 mM, 1800 mM, 2000 mM, o al menos 2200 mM.

3. Composición según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde el agente modificador de la fuerza iónica

(iv) se selecciona de la lista de: una sal neutra, por ejemplo, cloruro sódico; un aminoácido; o un péptido pequeño, o una mezcla de al menos dos de dichos agentes modificadores.

4. Composición según la reivindicación 3, donde el agente modificador de la fuerza iónica (iv) comprende cloruro sódico.

5. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el agente (iii) está presente en una concentración de al menos 2 mM, tal como al menos 5 mM.

6. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde la sal de calcio se selecciona de la lista de: cloruro de calcio, acetato de calcio, gluconato de calcio, y levulato de calcio.

7. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde la sal de magnesio se selecciona de la lista de: cloruro de magnesio, acetato magnésico, sulfato magnésico, gluconato de magnesio, y levulato de magnesio.

8. Composición según la reivindicación 6 o la reivindicación 7, donde el agente (iii) se selecciona de la lista de: cloruro de calcio, acetato de calcio, cloruro de magnesio, acetato magnésico, sulfato magnésico, o una mezcla de los mismos; y donde el agente modificador de la fuerza iónica (iv) es cloruro de sodio.

9. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, comprendiendo además un agente modificador de la tonicidad (v) .

10. Composición según la reivindicación 9, donde el agente modificador de la tonicidad (v) se selecciona de la lista de: una sal neutra; un mono-, di- o polisacárido; un alcohol de azúcar; un aminoácido; o un péptido pequeño, o una mezcla de al menos dos de dichos agentes modificadores.

11. Composición según la reivindicación 9 o la reivindicación 10, donde el agente modificador de la tonicidad

(v) está presente en una concentración de 1 mM a 500 mM.

12. Composición según la reivindicación 11, donde la concentración del agente modificador de la tonicidad (iv) e.

10. 250 mM.

13. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, comprendiendo además un tensioactivo no iónico (vi) .

14. Composición según la reivindicación 13, donde el tensioactivo no iónico es un polisorbato o un poloxámero o un polioxietileno alquil éter tal como poloxámero 188, poloxámero 407, polisorbato 20, polisorbato 80, o polioxi 23 lauril éter.

15. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, comprendiendo además un antioxidante (vii) .

16. Composición según la reivindicación 15, donde el antioxidante (vii) se selecciona de la lista de: L- o Dmetionina, un análogo de metionina, un péptido que contiene metionina, un homólogo de metionina, ácido ascórbico, cisteína, homocisteína, glutatión, cistina, y cistationina.

17. Composición según la reivindicación 16, donde el antioxidante es L-metionina.

18. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, donde el antioxidante está presente en una concentración de 0, 1 a 5, 0 mg/ml, tal como de 0, 1 a 4 mg/ml, de 0, 1 a 3 mg/ml, de 0, 1 a 2 mg/ml, o de 0, 5 a 2 mg/ml.

19. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, donde el pH se mantiene en el intervalo de 5, 5 a 7, 0, o de 5, 5 a 6, 5.

20. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, donde el agente adecuado para mantener el pH en el intervalo de 5, 5 a 7, 0 se selecciona de la lista de ácidos y sales de:

MES, PIPES, ACES, BES, TES, HEPES, TRIS, histidina (p. ej. L-histidina) , imidazol, glicina, glicilglicina, glicinamida, ácido fosfórico (p. ej. fosfato de sodio o de potasio) , ácido acético (p. ej. acetato de amonio, de sodio o de calcio) , ácido láctico, ácido glutárico, ácido cítrico (p. ej. citrato de sodio o de potasio) , ácido tartárico, ácido málico, ácido maleico, y ácido succínico, o una mezcla de al menos dos de dichos agentes.

21. Composición según la reivindicación 20, donde la concentración del agente es de 1 mM a 50 mM.

22. Composición según la reivindicación 21, donde la concentración del tampón es aproximadamente 10 mM.

23. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, comprendiendo además un conservante (viii) , tal como fenol, alcohol benzílico, orto-cresol, meta-cresol, para-cresol, metil parabeno, propil parabeno, cloruro de benzalconio, o cloruro de bencetonio.

24. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, que se adapta para la administración parenteral.

25. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, que es estable durante al menos 6 meses a 2-8°C.

26. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25, donde el polipéptido del factor VII es factor VIIa humano, preferentemente factor VIIa humano obtenido por recombinación.

27. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25, donde el polipéptido del factor VII es una variante de la secuencia del factor VII.

28. Composición según la reivindicación 27, donde la relación entre la actividad del polipéptido del factor VII y la actividad del factor VIIa humano nativo (FVIIa natural) es al menos 1, 25, preferiblemente al menos 2, 0 o 4, 0, más preferiblemente al menos 8, 0, cuando se evalúa en el "Ensayo de proteólisis in vitro" como se describe en la presente especificación.

29. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28, donde el polipéptido del factor VII está presente en una concentración de 0, 1 mg/ml a 15 mg/ml, tal como de 0, 5 a 10, 0 mg/ml, de 0, 5 a 5, 0 mg/ml, de 0, 6 a 4, 0 mg/ml, o de 1, 0 mg/ml a 4, 0 mg/ml.

30. Método para preparar una composición acuosa líquida de un polipéptido del factor VII, que comprende el paso de proporcionar el polipéptido del factor VII en una solución que comprende un agente tampón (ii) adecuado para mantener el pH en el intervalo de 5, 5 a 9, 0; un agente (iii) seleccionado de la lista de: una sal de calcio, una sal de magnesio, o una mezcla de las mismas; donde la concentración de (iii) es inferior a 15 mM; y un agente modificador de la fuerza iónica (iv) ; mientras se garantiza que, en la composición final, la fuerza iónica es de al menos 200 mM.

31. Composición farmacéutica acuosa líquida tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-30 para su uso como medicamento.

32. Uso de una composición tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30 para la preparación de un medicamento para tratar un síndrome sensible al factor VII.

33. Método para reducir la degradación de un polipéptido del factor VII en una formulación líquida, comprendiendo dicho método el paso de proporcionar el polipéptido del factor VII en una solución que comprende un agente tampón (ii) adecuado para mantener el pH en el intervalo de 5, 5 a 9, 0; un agente (iii) seleccionado de la lista de: una sal de calcio, una sal de magnesio, o una mezcla de las mismas; donde la concentración de (iii) es inferior a 15 mM; y un agente modificador de la fuerza iónica (iv) ; mientras se garantiza que, en la composición final, la fuerza iónica es al menos 200 mM.

34. Método según la reivindicación 33, donde la concentración de Ca+2 es al menos 2 mM, tal como al menos 5 mM.

35. Recipiente hermético, al menos parcialmente lleno que contiene una composición farmacéutica acuosa

líquida tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-31, y opcionalmente un gas inerte, comprendiendo dicho recipiente (i) una parte de pared y (ii) uno o más medios de cierre que no constituyen parte de dicha parte de pared.

36. Recipiente según la reivindicación 35, donde la composición no comprende un antioxidante (vii) .

37. Recipiente según cualquiera de las reivindicacione.

3. 36, donde dicho recipiente es un vial o cartucho comprendiendo un medio de cierre que comprende un tabique eslastomérico autosellado que puede ser penetrado por una aguja.

38. Recipiente según la reivindicación 37, donde dicho recipiente es un cartucho que comprende además un medio de pistón desplazable por el cual el líquido presente en dicho recipiente se puede expulsar de dicho recipiente.