Uso de un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8 en la fabricación de un medicamento para facilitar o acelerar la curación de un higado herido o lesionado,

en donde la herida o la lesión se desarrolla despues de una resección hepatica.

Caspasa-8 y cicatrización de heridas

Campo de la invención

La presente invención se refiere a la función reguladora de la caspasa 8 en la cicatrización de heridas.

Antecedentes de la invención

La familia caspasa de las proteasas de cisteina se conoce principalmente por su papel fundamental en la inducción de la apoptosis en las celulas animales (Shi y col., 2002) . Algunas de las caspasas, que se caracterizan por una región denominada "prodominio", situada aguas arriba de la fracción proteolitica, tienen una función de iniciación en la apoptosis. Se activan tras la unión de sus prodominios a los receptores que inducen la muerte o a proteinas adaptadoras asociadas a tales receptores y, una vez activadas, escinden otros miembros de la familia de las caspasas, activandoles de este modo. La caspasa-8 (anteriormente conocida como MACH/FLICE/Mch4) es una caspasa iniciadora activada, dentro de complejos de senalización de receptores de la familia TNF/NGF, a los que se incorpora mediante la unión de su prodominio a una proteina adaptadora, denominada dominio de muerte asociado a Fas (FADD, tambien denominada MORT1) (Boldin y col., 1996, Muzio y col., 1996 y Wallach y col., 1999) . La activación de la caspasa-8 constituye un acontecimiento iniciador crucial en el mecanismo de muerte por apoptosis, inducido por estos receptores (lo ruta extrinseca de la muerte celular) (Varfolomeev y col., 1998) . La caspasa-8 y FADD tambien contribuyen, por mecanismos aun desconocidos, a diversos procesos celulares no apoptóticos (por ejemplo, vease Varfolomeev y col., 1998, Zhang y col., 1998, Walsh y col., 1998, Newton y col., 1998, Alam y col., 1999, Kennedy y col., 1999, Chun y col., 2002, Sakamaki y col., 2002, Salmena y col., 2003, Kang y col., 2004, Su y col., 2005 y Beisner y col., 2005) .

Aunque el funcionamiento in vivo de la caspasa-8 se ha investigado empleando una serie de modelos de ratones transgenicos (Varfolomeev y col., 1998, Salmena y col., 2003, Kang y col., 2004 y Beisner y col., 2005) , todavia se sabe muy poco sobre el significado fisiológico o fisiopatológico de la enzima.

Sumario de la invención

En un aspecto, la invención se refiere a un inhibidor de un inhibidor natural del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8, en la preparación de un medicamento para prevenir y/o tratar la inflamación de un tejido u órgano, tal y como se define en las reivindicaciones.

Es un objeto de la invención proporcionar el uso de un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8, en la preparación de un medicamento para facilitar o acelerar la curación de un tejido o un órgano herido o lesionado.

Otro objeto de la invención es proporcionar un metodo para facilitar o acelerar la curación de un tejido o un órgano herido o lesionado que comprende administrar a un paciente que lo necesite, una cantidad terapeuticamente eficaz de un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8.

La herida o la lesión se desarrollan despues de la resección de un tejido o un órgano.

El órgano es el higado.

En otra realización adicional de la invención, la herida o la lesión se desarrollan despues de un traumatismo fisico que incluye pero no se limita a, una operación quirurgica, una mordedura, un accidente deportivo, un accidente, una resección de un tejido o un órgano y una amputación.

Otro objeto de la invención es proporcionar el uso de un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8, en la fabricación de un medicamento para facilitar o acelerar la cicatrización de un higado lesionado.

Otro objeto adicional de la invención es proporcionar un metodo para facilitar o acelerar la cicatrización de un higado lesionado que comprende administrar a un paciente que lo necesite, una cantidad terapeuticamente eficaz de un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8.

En ciertas realizaciones de la invención, el inhibidor de la caspasa-8 incluye, pero no esta limitado a los mismos, un ARNm no codificante, un ARN pequeno de interferencia, un anticuerpo especifico de la caspasa-8 y una molecula pequena inhibidora.

En una realización adicional de la invención, la molecula inhibidora es una molecula pequena que tiene un peso molecular de 100 a 5.000 dalton, tal como Z-IETD-FMK.

Otro objeto adicional de la invención es proporcionar el uso de un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8 junto con un inhibidor de la inflamación, en la preparación de un medicamento para facilitar o acelerar la curación de un higado lesionado.

La lesión se desarrolla despues de una resección hepatica.

En otra realización de la invención, se extirpa 1/3 del higado.

En otra realización adicional de la invención, se extirpan 2/3 del higado.

En otra realización adicional de la invención, el inhibidor de la caspasa-8 se selecciona a partir de un ARNm no codificante especifico de la caspasa-8, un ARN pequeno de interferencia especifico de la caspasa-8, un anticuerpo anticaspasa-8 y una molecula pequena inhibidora de la caspasa-8.

En otra realización adicional de la invención, la molecula pequena inhibidora tiene un peso molecular de 100 a 5.000 dalton.

En otra realización adicional de la invención, la molecula pequena inhibidora es Z-IETD-FMK.

En otra realización adicional de la invención, el inhibidor de la inflamación es un agente capaz de inhibir celulas inmunes, tales como macrófagos, por ejemplo, celulas de Kupffer.

En otra realización adicional de la invención, el inhibidor de la inflamación se administra despues del inhibidor de la caspasa-8.

En otra realización adicional de la invención, el inhibidor de la inflamación se administra los dias 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 despues de la resección hepatica.

En otra realización adicional de la invención, el inhibidor de la inflamación comprende cloruro de gadolinio.

Breve descripción de las Figuras Las Figs. 1A-1I muestran el efecto de la falta de caspasa-8 en hepatocitos, sobre la infección con Listeria monocytogenes. En todas las figuras, las barras negras representan ratones GaspSFI+: Alb-Gre (con hepatocitos normales) y las barras vacias representan ratones GaspSFI-: Alb-Gre (con hepatocitos carentes de caspasa-8) . (A-C) Organismos viables de Listeria recuperados a partir de bazos e higados de ratones, despues de una infección subletal, 24 horas (A) , 6 dias (B) y 14 dias (C) despues de la infección. Cada grupo de ratones F/+ o F/-en cada momento especifico, comprendia por lo menos cinco ratones. (D-I) Analisis histológico de secciones hepaticas de ratones GaspSFI-: Alb-Gre y GaspSFI+: Alb-Gre, 6 y 14 dias despues de la infección con Listeria. (D, E) Tinción con H&E de los higados, 6 dias despues de la infección, que muestra la acumulación de leucocitos en los higados de ratones GaspSFI-: Alb-Gre (flechas) . (F, G) 14 dias despues de la infección, los higados de los ratones GaspSFI-: Alb-Gre (G) presentan grandes lesiones necr6ticas, mientras que los higados testigos parecen normales. (F) Ampliación (200x) de D a G. (H, I) Inmunotinción anti-Ki67 de los higados, 14 dias despues de la infección, que muestra un gran numero de hepatocitos proliferantes en higados GaspSFI-: Alb-Gre pero no en higados GaspSF-: Alb-Gre (I; nucleos tenidos de marrón) . Aumento: 100x.

Las Figs. 2A-2E muestran el efecto de la falta de caspasa 8 en hepatocitos, sobre la recuperación a partir de una PHx (hepatectomia parcial) : una disminución en la respuesta de crecimiento temprano. (A) Inmunotinción anti-Ki67 (nucleos tenidos de marrón) del higado en etapas tempranas (dia 2) y tardias (dia 14) despues de PHx. Aumento: 100x. (B, C) Proliferación de los hepatocitos en varios momentos especificos despues de 1/3 de PHx (B) y 2/3 de PHx (C) , cuantificada por la determinación del numero de hepatocitos tenidos con anticuerpos contra Ki67 (o BrdU; recuadro) , tal y como se muestra en A, hecho el recuento con 10 campos de alta resolución. * P <0, 05, ** P <0, 01. Al menos ocho ratones fueron sometidos a ensayo en cada momento especifico en cuatro experimentos independientes. (D) Cantidades de diversas proteinas asociadas a la transición G1/S (ciclina A, ciclina E, proteina de retinoblastoma fosforilada) en el higado en diferentes momentos especificos despues de 1/3 de PHx (panel izquierdo) , 2/3 de PHx (panel derecho) . Se muestran resultados representativos de... [Seguir leyendo]

1. Uso de un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8 en la fabricación de un medicamento para facilitar o acelerar la curación de un higado herido o lesionado, en donde la herida o la lesión se desarrolla despues de una resección hepatica.

2. Un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8 para uso con el fin de facilitar o acelerar la curación de un higado herido o lesionado, en donde la herida o la lesión se desarrollan despues de una resección hepatica, opcionalmente junto con un inhibidor de la inflamación, preferentemente para la administración de este ultimo despues de la administración del inhibidor de la caspasa-8.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 o el inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la herida o la lesión se desarrolla despues de un traumatismo fisico seleccionado entre una operación quirurgica, una mordedura, un accidente deportivo, un accidente, una resección de un tejido o un órgano y una amputación.

4. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 3 o el inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 2 o 3, en donde el inhibidor de la caspasa-8 se selecciona a partir de un ARNm no codificante, un ARN pequeno de interferencia, un anticuerpo especifico de la caspasa-8 y una molecula pequena inhibidora.

5. El uso o el inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 4, en donde la molecula pequena inhibidora tiene un peso molecular de 100 a 5.000 dalton.

6. El uso o el inhibidor para uso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la molecula pequena inhibidora es Z-IETD-FMK.

7. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 6 o el inhibidor para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en donde el inhibidor de la caspasa-8 se utiliza durante varias horas hasta aproximadamente 1, 2, 3 dias y no mas de 4 dias.

8. Uso de un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8 en combinación con un inhibidor de la inflamación en la fabricación de un medicamento para facilitar o acelerar la curación de un higado lesionado, en donde la herida o la lesión se desarrollan despues de la resección del higado, opcionalmente administrando el inhibidor de la inflamación despues de la administración del inhibidor de la caspasa-8.

9. Composición que comprende un inhibidor del nivel y/o de la actividad de la caspasa-8 y un inhibidor de la inflamación para uso con el fin de facilitar o acelerar la curación de un higado lesionado, en donde la herida o la lesión se desarrolla despues de la resección del higado, opcionalmente administrando el inhibidor de la inflamación despues de la administración del inhibidor de la caspasa-8.

10. El uso de acuerdo con la reivindicación 8 o la composición para uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde se realiza una resección de 1/3 o 2/3 del higado.

11. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 o 10 o la composición para uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el inhibidor de la caspasa-8 se selecciona a partir de un ARNm no codificante especifico de la caspasa-8, un ARN pequeno de interferencia especifico de la caspasa-8, un anticuerpo anti-caspasa-8 y una molecula pequena inhibidora de la caspasa-8.

12. El uso o la composición para uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la molecula pequena inhibidora tiene un peso molecular de 100 a 5.000 dalton.

13. El uso o la composición para uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la molecula pequena inhibidora es Z-IETD-FMK.

14. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 o la composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 13, en donde el inhibidor de la inflamación es un agente capaz de inhibir celulas inmunes.

15. El uso o la composición para uso de acuerdo con la reivindicación 14, en donde las celulas inmunes son macrófagos.

16. El uso o la composición para uso de acuerdo con la reivindicación 15, en donde los macrófagos son celulas de Kupffer.

17. El compuesto para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 o 10 a 16, o la composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 16, en donde el inhibidor de la inflamación se administra los dias 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y/o 12 dias despues de la resección del higado.

18. El compuesto para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, el uso de acuerdo con

una cualquiera de las reivindicaciones 8 o 10 a 17 o la composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 17, en donde el inhibidor de la caspasa-8 se administra durante no menos de 4 dias, hasta 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 dias, y hasta 1 mes despues de la resección del higado.

19. El compuesto para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 o 10 a 18 o la composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 18, en donde el inhibidor de la inflamación comprende cloruro de gadolinio.