Un polipéptido que comprende una porción inmunogénica de un antígeno de Leishmania,

teniendo el antígeno la secuencia de aminoácidos citada en el SEQ ID NO: 24

Antígenos de Leishmania para su uso en la terapia y la diagnosis de la leismaniasis REFERENCIA A LAS SOLICITUDES RELACIONADAS

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere en general a composiciones y métodos para prevenir, tratar y detectar la leismaniasis, y para estimular respuestas inmunitarias en pacientes. La invención está relacionada más concretamente con polipéptidos que comprenden una porción inmunogénica de un antígeno de Leishmania o una de sus variantes, y a vacunas y composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más de tales polipéptidos. Las vacunas y composiciones farmacéuticas se pueden utilizar, por ejemplo, para la prevención y la terapia de la leismaniasis, así como para la detección de la infección por Leishmania.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los organismos de Leishmania son parásitos protozoicos intracelulares de macrófagos que causan una amplia gama de enfermedades clínicas en seres humanos y animales domésticos, principalmente perros. En algunas infecciones, el parásito puede permanecer durmiente durante muchos años. En otros casos, el anfitrión puede desarrollar una variedad de formas de leismaniasis. Por ejemplo, la enfermedad puede ser asintomática o se puede manifestar en forma de leismaniasis visceral subclínica, que se caracteriza por unos síntomas leves de malestar, diarrea y hepatomegalia intermitente. Los pacientes con enfermedad subclínica o asintomática tienen normalmente bajos títulos de anticuerpo, dificultando de este modo la detección de la enfermedad con las técnicas convencionales. De manera alternativa, la leismaniasis se puede manifestar en forma de enfermedad cutánea, que es un problema médico grave pero es generalmente auto-limitante, o en forma de una enfermedad de las mucosas altamente destructiva, que no es auto-limitante. Finalmente, y muy gravemente, la enfermedad se puede manifestar en forma de infección visceral aguda que afecta al bazo, al hígado y a los ganglios linfáticos, que no tratada, es generalmente una enfermedad fatal. Los síntomas de leismaniasis visceral aguda incluyen hepatoesplenomegalia, fiebre, leucopenia, anemia e hipergammaglobulinemia.

La leismaniasis es un problema grave en la mayor parte del mundo, incluyendo Brasil, China, Este de África, India y zonas de Oriente Medio. La enfermedad también es endémica en la región Mediterránea, incluyendo el sur deFrancia, Italia, Grecia, España, Portugal y Norte de África. El número de casos de leismaniasis ha aumentado espectacularmente en los últimos 20 años, y en la actualidad existen millones de casos de esta enfermedad en todo el mundo. Cada año se diagnostican aproximadamente 2 millones de nuevos casos, 25% de los cuales son de leismaniasis visceral. No obstante, no existen en la actualidad vacunas u otros tratamientos eficaces.

Levick et al. (1996, Molecular and Biolochemical Parasitology, 76, 1-2, 345-348) han publicado previamente un análisis con etiquetas de secuencias expresadas de una genoteca de ADNc líder empalmado de promastigotas de Leishmania major. Este documento describe numerosos antígenos de Leishmania hipotéticos pero no proporciona datos sobre su inmunogenicidad potencial.

Con frecuencia la diagnosis exacta de la leismaniasis es difícil de lograr. Existen 20 especies de Leishmania que infectan a los seres humanos, incluyendo L. donovani, L. chagasi, L. infantum, L. major, L. amazonensis, L. braziliensis, L. panamensis, L. mexicana, L. tropica, y L. guyanensis, y no existen signos o síntomas distintivos que indiquen inequívocamente la presencia de infección por Leishmania. Se han utilizado métodos para la detección de los parásitos, pero estos métodos no son sensibles ni prácticos clínicamente. Las pruebas cutáneas actuales utilizan típicamente parásitos completos o lisados. Tales pruebas son generalmente insensibles, irreproducibles y propensas a reacción cruzada con una variedad de otras enfermedades. Además, las preparaciones empleadas en dichas pruebas son a menudo inestables. De este modo, existe la necesidad de métodos mejorados para la detección de la infección por Leishmania.

Las vacunas experimentales actuales que consisten en organismos completos no han mostrado ser eficaces en seres humanos. Por consiguiente, sigue existiendo la necesidad en la técnica de vacunas para prevenir la leismaniasis en seres humanos y perros, y de composiciones terapéuticas mejoradas para el tratamiento de la leismaniasis.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN

Expuesto brevemente, la presente invención proporciona composiciones y métodos para prevenir, tratar y detectar la leismaniasis, así como para estimular respuestas inmunitarias en pacientes. En un aspecto, se proporcionan polipéptidos que comprenden al menos una porción inmunogénica de un antígeno de Leishmania, que tiene la secuencia de aminoácidos citada en el SEQ ID NO: 24. También se proporcionan las secuencias de ADN que codifican los polipéptidos anteriores, los vectores de expresión recombinantes que comprenden estas secuencias de ADN y las células anfitrionas transformadas o transfectadas con dichos vectores de expresión.

En aspectos relacionados, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más de los polipéptidos descritos en la presente memoria, o una molécula de ADN que codifica tales polipéptidos, y un portador fisiológicamente aceptable. También se proporcionan vacunas que comprenden uno o más de tales polipéptidos o moléculas de ADN, junto con un intensificador de la respuesta inmunitaria no específica. En realizaciones específicas de estos aspectos, el antígeno de Leishmania tiene una secuencia de aminoácidos citada en el SEQ ID No: 24.

Se describen en la presente memoria las composiciones farmacéuticas y las vacunas que comprenden al menos dos polipéptidos diferentes, comprendiendo cada polipéptido una porción inmunogénica de un antígeno de Leishmania que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las secuencias citadas en los SEQ ID No: 2, 4, 6, 8, 10, 20, 22, 24, 26, 36-38, 41, 50-53, 82, y sus variantes que difieren solamente en sustituciones y/o modificaciones conservativas. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender uno o más de los polipéptidos de la invención combinados con un antígeno de Leishmania conocido.

Las composiciones farmacéuticas y las vacunas comprenden antígenos de Leishmania solubles.

En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas y vacunas como se han descrito antes para inducir inmunidad protectora frente a la leismaniasis en un paciente.

También se describen en la presente memoria métodos y kits de diagnóstico para detectar la infección por Leishmania en un paciente. Los métodos comprenden: (a) poner en contacto células dérmicas de un paciente con una composición farmacéutica como se ha descrito más arriba; y (b) detectar una respuesta inmunitaria en la piel del paciente, detectando a partir de allí la infección por Leishmania en el paciente. Los kits de diagnóstico comprenden:

(a) una composición farmacéutica como se ha descrito más arriba; y (b) un aparato suficiente para poner en contacto la composición farmacéutica con las células dérmicas de un paciente.

También se describen en la presente memoria los métodos para estimular una respuesta inmunitaria celular y/o humoral en un paciente, que comprenden administrar a un paciente una composición farmacéutica o una vacuna como se ha descrito más arriba.

Los métodos descritos en la presente memoria son adecuados para tratar a un paciente aquejado de una enfermedad sensible a la estimulación con IL-12, que comprenden administrar a un paciente una composición farmacéutica o una vacuna como se ha descrito más arriba.

Estos y otros aspectos de la presente invención se harán evidentes tras la referencia a la siguiente descripción detallada y a los dibujos adjuntos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 muestra la estimulación de la proliferación de las células T obtenidas de ratones BALB/c inmunizados para L. donovani (representada por el índice de estimulación) por medio de macrófagos infectados con L. donovani después de la incubación durante 24, 48 y 72 horas.

La Figura 2 ilustra perfiles de HPLC representativos de péptidos aislados de moléculas de MHC de clase II de macrófagos P388D1. El Panel A muestra péptidos aislados de macrófagos no infectados y el panel B muestra péptidos aislados de macrófagos... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que comprende una porción inmunogénica de un antígeno de Leishmania, teniendo el antígeno la secuencia de aminoácidos citada en el SEQ ID NO: 24.

2. Una molécula de ADN aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido de 5 acuerdo con la reivindicación 1.

3. Un vector de expresión recombinante que comprende la molécula de ADN de la reivindicación 2.

4. Una célula anfitriona transformada o transfectada con el vector de expresión de la reivindicación 3.

5. Una composición farmacéutica que incluye el polipéptido de la reivindicación 1, o la molécula de ADN aislada de la reivindicación 2 y un portador fisiológicamente aceptable.

6. Una vacuna que incluye el polipéptido de la reivindicación 1 o la molécula de ADN de la reivindicación 2, junto con un intensificador de la respuesta inmunitaria no específico.

7. Una composición farmacéutica de la reivindicación 5 para su uso en la inducción de inmunidad protectora contra la Leismaniasis en un paciente.

8. La vacuna de la reivindicación 6 para su uso en la inducción de inmunidad protectora contra la Leismaniasis en un 15 paciente.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 5 para su uso en la detección de la infección por Leishmania en un paciente.