COMPUESTOS Y MÉTODOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA TUBERCOLOSIS.

Un método para detectar la sensibilización frente a un antígeno micobacteriano en un sujeto,

que comprende:

(a) poner en contacto una muestra biológica de dicho sujeto con un polipéptido que comprende una porción antigénica de SEC ID Nº : 89; y

(b) detectar en la muestra biológica la presencia de anticuerpos que se unan al polipéptido.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E09174756.

Solicitante: CORIXA CORPORATION.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: CSC THE UNITED STATES CORPORATION 2711 CENTERVILLE ROAD WILMINGTON, DE 19808 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: CAMPOS-NETO, ANTONIO, HOUGHTON, RAYMOND, TWARDZIK, DANIEL, SKEIKY,YASIR, REED,STEVEN, Dillon,Davin, Vedvick,Thomas.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2378051_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Compuestos y métodos para el diagnóstico de la tuberculosis CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere de forma general a la detección de infección de Mycobacterium tuberculosis.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La tuberculosis es una enfermedad infecciosa crónica que generalmente es causada por infección de Mycobacterium tuberculosis. Es una enfermedad importante en los países en desarrollo, así como un problema creciente en áreas del mundo desarrollado, con aproximadamente 8 millones de nuevos casos y 3 millones de muertes cada año. Aunque la infección puede ser asintomática durante un periodo de tiempo considerable, la forma más común en la que se manifiesta la enfermedad es una inflamación aguda de los pulmones, que produce fiebre y tos no productiva. Si no se trata, normalmente da lugar a complicaciones graves y a la muerte.

Aunque la tuberculosis generalmente puede controlarse usando una terapia extendida de antibióticos, dicho tratamiento no es suficiente para prevenir la propagación de la enfermedad. Los individuos infectados pueden ser asintomáticos, pero contagiosos, durante un determinado tiempo. Adicionalmente, aunque el cumplimiento del régimen de tratamiento es crítico, el comportamiento del paciente es difícil de monitorizar. Algunos pacientes no completan el curso del tratamiento, lo que puede conducir a un tratamiento ineficaz y al desarrollo de resistencias a fármaco.

La inhibición de la propagación de la tuberculosis requerirá una vacunación eficaz y un diagnóstico temprano y preciso de la enfermedad. Actualmente, la vacunación con bacterias vivas es el método más eficaz para inducir una inmunidad protectora. El Mycobacterium más habitual para este fin es el Bacillus Calmette-Guerin (BCG) , una cepa no virulenta de Mycobacterium bovis. Sin embargo, la seguridad y la eficacia del BCG es una fuente de controversia, y algunos países, tal como los Estados Unidos, no vacunan al público general. El diagnóstico se realiza habitualmente con un ensayo cutáneo, que implica la exposición intradermal a PPD de tuberculina (derivado purificado con proteína) . Las respuestas de células T específicas de antígeno dan como resultado una incubación mensurable en la zona de inyección a las 48-72 horas después de inyectar, lo que indica exposición a antígenos de Mycobacterium. Sin embargo, la sensibilidad y la especificidad han sido un problema con este ensayo, y los individuos vacunados con BCG no pueden ser distinguidos de los individuos infectados.

Aunque se ha demostrado que los macrófagos actúan como los principales agentes de la inmunidad de M. tuberculosis, las células T son los inductores predominantes de dicha inmunidad. El papel esencial de las células T en la protección contra la infección de M. tuberculosis se ilustra a través de la frecuente aparición de M. tuberculosis en pacientes de SIDA, debido a un agotamiento de células T CD4 asociado a la infección de virus de inmunodeficiencia humano (VIH) . Se ha demostrado que las células T CD4 reactivas frente a Mycobacterium son potentes productores de interferón gamma (IFN-y) , el cual se ha demostrado que, a su vez, activa los efectos micobacterianos de macrófagos en ratones. Aunque el papel del IFN-y en humanos está menos claro, hay estudios que han demostrado que la 1, 25-dihidroxi-vitamina D3, sola o en combinación con IFN-y o factor alfa de necrosis tumoral, activa macrófagos humanos para inhibir la infección de M. tuberculosis. Además, se sabe que el IFN-y estimula macrófagos humanos para fabricar 1, 25-dihidroxi-vitamina D3. De forma similar, se ha demostrado que la IL-12 desempeña un papel en la estimulación de resistencia frente a la infección de M. tuberculosis. Para una revisión de la inmunología de la infección de M. tuberculosis véase Chan y Kaufmann, en "Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control", Bloom (ed.) , ASM Press, Washington, DC, 1994.

Por consiguiente, existe una necesidad en la técnica de métodos diagnósticos mejorados para detectar la tuberculosis. La presente invención cubre dicha necesidad y además proporciona otras ventajas relacionadas.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Brevemente, la presente invención proporciona métodos para diagnosticar tuberculosis. Se describen polipéptidos que comprenden una porción antigénica de un antígeno de M. tuberculosis soluble, o una variante de dicho antígeno que difiere sólo en sustituciones y/o modificaciones conservativas.

El antígeno soluble puede tener una de las siguientes secuencias N-terminales:

(a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu (SEC ID Nº : 115) ; (b) Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser (SEC ID Nº : 116) ; (c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg (SED ID Nº : 117) ; (d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro (SEC ID Nº : 118) ; (e) Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val (SEC ID Nº : 119) ;

(f) Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro (SEC ID Nº : 120) ;

(g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ser (SEC ID Nº : 121) ;

(h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly (SEC ID Nº : 122) ;

(i) Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Leu-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn5 Val-Ser-Phe-Ala-Asn (SEC ID Nº : 123) ;

(j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser; (SEC ID Nº : 129) ;

(k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp; (SEC ID Nº : 130) ó

(l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly; (SEC ID Nº : 131)

en donde Xaa puede ser cualquier aminoácido.

También se describen polipéptidos que comprenden una porción inmunogénica de un antígeno de M. tuberculosis, o una variante de dicho antígeno que difiere sólo en sustituciones y/o modificaciones conservativas, presentando el antígeno una de las siguientes secuencias N-terminales:

(m) Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val; (SEC ID Nº : 132) ó

(n) Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe; (SEC ID Nº : 15 124)

en donde Xaa puede ser cualquier aminoácido.

Los antígenos descritos pueden comprender una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de ADN seleccionada del grupo que consiste en las secuencias presentadas en los SEC ID Nº : 1, 2, 4-10, 13-25, 52, 94 y 96, los complementos de dichas secuencias y las secuencias de ADN que se hibridan con una secuencia presentada en las SEC ID Nº : 1, 2, 4-10, 13-25, 52, 94 y 96 o un complemento de la misma en condiciones moderadamente severas.

Los polipéptidos descritos pueden comprender una porción antigénica de un antígeno de M. tuberculosis, o una variante de dicho antígeno que difiera sólo en sustituciones y/o modificaciones conservativas, en donde el antígeno comprende una secuencia de aminoácido codificada por una secuencia de ADN seleccionada del grupo que consiste en las secuencias presentadas en las SEC ID Nº : 26-51, los complementos de dichas secuencias, y secuencias de ADN que se hibridan con una secuencia presentada en las SEC ID Nº : 26-51 o un complemento de la misma en condiciones moderadamente severas.

También se describen las secuencias de ADN que codifican los anteriores polipéptidos, los vectores de expresión recombinantes que comprenden dichas secuencias de ADN y las células hospedantes transformadas o 30 transfectadas con dichos vectores de expresión.

Según la presente invención se proporciona un método para detectar la sensibilización a un antígeno micobacteriano en un sujeto que comprende: (a) poner en contacto una muestra biológica de dicho sujeto con un polipéptido que comprende una porción antigénica de SEC ID Nº : 89; y (b) detectar en la muestra biológica la presencia de anticuerpos que se unan al polipéptido.

Se proporcionan métodos y kits de diagnóstico para detectar tuberculosis en un paciente. Los métodos comprenden (a) poner en contacto una muestra biológica con al menos un polipéptido que comprende una porción antigénica de SEC ID Nº : 89 y (b) detectar en la muestra la presencia de anticuerpos que se unen al polipéptido o polipéptidos, detectando con ello la infección de M. tuberculosis en la muestra biológica. Las muestras biológicas adecuadas incluyen sangre entera, esputo, suero, plasma, saliva, fluido... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un método para detectar la sensibilización frente a un antígeno micobacteriano en un sujeto, que comprende:

(a) poner en contacto una muestra biológica de dicho sujeto con un polipéptido que comprende una porción antigénica de SEC ID Nº : 89; y

(b) detectar en la muestra biológica la presencia de anticuerpos que se unan al polipéptido.

2. El método según la reivindicación 1, para detectar infección de M. tuberculosis en un sujeto, que comprende:

(a) poner en contacto una muestra biológica de dicho sujeto con un polipéptido que comprende una porción antigénica de SEC ID Nº : 89; y

(b) detectar en la muestra biológica la presencia de anticuerpos que se unan al polipéptido.

3. El método de la reivindicación 2, en el que la etapa (a) comprende adicionalmente poner en contacto la muestra

biológica con un antígeno de M. tuberculosis de 38 kD y la etapa (b) comprende adicionalmente detectar en la muestra la presencia de anticuerpos que se unan al antígeno de M. tuberculosis de 38 kD.

4. El método de la reivindicación 1 ó 2, en el que el polipéptido está unido a un soporte sólido.

5. El método de la reivindicación 4, en el que el soporte sólido comprende nitrocelulosa, látex o un material plástico.

6. El método de la reivindicación 2, en el que la muestra biológica se selecciona del grupo que consiste en sangre entera, suero, plasma, saliva, fluido cerebroespinal y orina.

7. El método de la reivindicación 6, en el que la muestra biológica es sangre entera o suero.

8. Un kit diagnóstico que comprende:

(a) un polipéptido que comprende una porción antigénica de SEC ID Nº : 89; y (b) un reactivo de detección.

9. El kit diagnóstico de la reivindicación 8, en el que el polipéptido se inmoviliza sobre un soporte sólido.

10. El kit de la reivindicación 9, en el que el soporte sólido comprende nitrocelulosa, látex o un material plástico.

11. El kit de la reivindicación 8, en el que el reactivo de detección comprende un grupo indicador conjugado con un agente de unión.

12. El kit de la reivindicación 11, en el que el agente de unión se selecciona del grupo que consiste en antiinmunoglobulinas, Proteína G, Proteína A y lectinas.

13. El kit de la reivindicación 11, en el que el grupo indicador se selecciona del grupo que consiste en radioisótopos, grupos fluorescentes, grupos luminiscentes, enzimas, biotina y partículas de colorante.

Figuras (1/7) Figuras (2/7) Figuras (3/7) Figuras (4/7) Figuras (5/7) Figuras (6/7) Figuras (7/7)


 

Patentes similares o relacionadas:

Método para analizar ácido nucleico molde, método para analizar sustancia objetivo, kit de análisis para ácido nucleico molde o sustancia objetivo y analizador para ácido nucleico molde o sustancia objetivo, del 29 de Julio de 2020, de Kabushiki Kaisha DNAFORM: Un método para analizar un ácido nucleico molde, que comprende las etapas de: fraccionar una muestra que comprende un ácido nucleico molde […]

MÉTODOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMOS ATÓPICOS SENSIBLES A COMPONENTES ALERGÉNICOS DEL POLEN DE OLEA EUROPAEA (OLIVO), del 23 de Julio de 2020, de SERVICIO ANDALUZ DE SALUD: Biomarcadores y método para el diagnostico, estratificación, seguimiento y pronostico de la evolución de la enfermedad alérgica a polen del olivo, kit […]

Detección de interacciones proteína a proteína, del 15 de Julio de 2020, de THE GOVERNING COUNCIL OF THE UNIVERSITY OF TORONTO: Un método para medir cuantitativamente la fuerza y la afinidad de una interacción entre una primera proteína de membrana o parte de la misma y una […]

Secuenciación dirigida y filtrado de UID, del 15 de Julio de 2020, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Un procedimiento para generar una biblioteca de polinucleótidos que comprende: (a) generar una primera secuencia del complemento (CS) de un polinucleótido diana a partir […]

Métodos para la recopilación, estabilización y conservación de muestras, del 8 de Julio de 2020, de Drawbridge Health, Inc: Un método para estabilizar uno o más componentes biológicos de una muestra biológica de un sujeto, comprendiendo el método obtener un […]

Evento de maíz DP-004114-3 y métodos para la detección del mismo, del 1 de Julio de 2020, de PIONEER HI-BRED INTERNATIONAL, INC.: Un amplicón que consiste en la secuencia de ácido nucleico de la SEQ ID NO: 32 o el complemento de longitud completa del mismo.

Composiciones para modular la expresión de SOD-1, del 24 de Junio de 2020, de Biogen MA Inc: Un compuesto antisentido según la siguiente fórmula: mCes Aeo Ges Geo Aes Tds Ads mCds Ads Tds Tds Tds mCds Tds Ads mCeo Aes Geo mCes Te (secuencia […]

Aislamiento de ácidos nucleicos, del 24 de Junio de 2020, de REVOLUGEN LIMITED: Un método de aislamiento de ácidos nucleicos que comprenden ADN de material biológico, comprendiendo el método las etapas que consisten en: (i) efectuar un lisado […]

Utilizamos cookies para mejorar nuestros servicios y mostrarle publicidad relevante. Si continua navegando, consideramos que acepta su uso. Puede obtener más información aquí. .