Antígenos de leishmania para su uso en la terapia y el diagnóstico de la leishmaniasis.

Una proteína de fusión que comprende:

(i) un polipéptido que comprende un antígeno de Leishmania que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO:

2, una porción inmunogénica de dicho antígeno capaz de generar al menos 25% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa o interleuquina 12, o una variante de dicho antígeno que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 2; y

(ii) un polipéptido que comprende un antígeno de Leishmania que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 24, una porción inmunogénica de dicho antígeno capaz de generar al menos 25% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa o interleuquina 12, o una variante de dicho antígeno que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 24.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E05025429.

Solicitante: CORIXA CORPORATION.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: CSC THE UNITED STATES CORPORATION 2711 CENTERVILLE ROAD WILMINGTON, DE 19808 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: CAMPOS-NETO, ANTONIO, DILLON, DAVIN C., WEBB, JOHN, R., BHATIA, AJAY, COLER, RHEA, M., PROBST, PETER, REED,STEVEN, SHEIKY,YASIR A. W.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K14/44 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de protozoos.
  • C12N15/62 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.

PDF original: ES-2391562_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Antígenos de leishmania para su uso en la terapia y el diágnóstico de la leishmaniasis.

Campo Técnico

La presente invención se refiere en general a proteínas de fusión, composiciones y métodos para prevenir, tratar y detectar la leishmaniasis, y para estimular respuestas inmunitarias en pacientes. La invención se refiere más concretamente a proteínas de fusión que comprenden antígenos de Leishmania, porciones inmunogénicas o variantes de las mismas, y a vacunas y composiciones farmacéuticas que comprenden dichas proteínas de fusión. Las vacunas y composiciones farmacéuticas se pueden utilizar, por ejemplo, para la prevención y la terapia de la leishmaniasis, así como para la detección de la infección por Leishmania.

Antecedentes de la Invención

Los organismos de Leishmania son parásitos protozoicos intracelulares de macrófagos que causan una amplia gama de enfermedades clínicas en seres humanos y animales domésticos, principalmente perros. En algunas infecciones, el parásito puede permanecer en estado latente durante muchos años. En otros casos, el anfitrión puede desarrollar una de una variedad de formas de leishmaniasis. Por ejemplo, la enfermedad puede ser asintomática o puede manifestarse como leishmaniasis visceral subclínica, que se caracteriza por síntomas leves de malestar, diarrea y hepatomegalia intermitente. Los pacientes con enfermedad subclínica o asintomática usualmente tienen bajos títulos de anticuerpos, haciendo que la enfermedad sea difícil de detectar con las técnicas convencionales. Alternativamente, la leishmaniasis puede manifestarse como una enfermedad cutánea, que es un problema médico grave, pero es generalmente autolimitante, o como una enfermedad de la mucosa altamente destructiva, que no es auto-limitante. Finalmente, y de forma más grave, la enfermedad puede manifestarse como una infección visceral aguda que implica el bazo, el hígado y los ganglios linfáticos, que, si no se trata, generalmente es una enfermedad fatal. Los síntomas de la leishmaniasis visceral aguda incluyen hepatoesplenomegalia, fiebre, leucopenia, anemia e hipergammaglobulinemia.

La leishmaniasis es un grave problema en muchas partes del mundo, incluyendo Brasil, China, África Oriental, India y zonas de Oriente Medio. La enfermedad también es endémica en la región mediterránea, incluyendo el sur deFrancia, Italia, Grecia, España, Portugal y Norte de África. El número de casos de leishmaniasis se ha incrementado espectacularmente en los últimos 20 años, y existen hoy en el mundo millones de casos de esta enfermedad. Alrededor de 2 millones de nuevos casos se diagnostican cada año, el 25% de los cuales son de leishmaniasis visceral. No hay, sin embargo, vacunas ni tratamientos eficaces disponibles en la actualidad.

El diagnóstico preciso de la leishmaniasis es frecuentemente difícil de lograr. Existen 20 especies de Leishmania que infectan a los seres humanos, incluyendo L. donovani, L. chagasi, L. infantum, L. major, L. amazonensis, L. braziliensis, L. panamensis, L. mexicana, L. tropica, y L. guyanensis, y no hay signos distintivos o síntomas que indiquen inequívocamente la presencia de infección por Leishmania. Se han utilizado métodos de detección de parásitos, pero estos métodos no son sensibles ni prácticos clínicamente. Las pruebas cutáneas actuales normalmente utilizan parásitos completos o lisados. Estas pruebas generalmente son insensibles, irreproducibles y propensas a la reacción cruzada con una variedad de otras enfermedades. Además, las preparaciones empleadas en tales pruebas son a menudo inestables. Por lo tanto, hay una necesidad de métodos mejorados para la detección de la infección por Leishmania.

Las vacunas experimentales actuales consistentes en organismos completos no han demostrado su eficacia en seres humanos. En consecuencia, sigue habiendo una necesidad en la técnica de vacunas para prevenir la leishmaniasis en seres humanos y en perros, y para la mejora de composiciones terapéuticas para el tratamiento de la leishmaniasis.

Compendio de la invención

La presente invención proporciona proteínas de fusión, composiciones y métodos para prevenir, tratar y detectar la leishmaniasis, así como para estimular respuestas inmunitarias en pacientes. En un aspecto, la presente invención proporciona una proteína de fusión que comprende (i) un polipéptido que comprende un antígeno de Leishmania que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2, una porción inmunogénica de dicho antígeno capaz de generar al menos 25% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa o interleuquina 12 o una variante de dicho antígeno que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 2; y (ii) un polipéptido que comprende un antígeno de Leishmania que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 24, una porción inmunogénica de dicho antígeno capaz de generar al menos 25% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa o interleuquina 12 o una variante de dicho antígeno que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 24. También se proporcionan secuencias de ADN que codifican las proteínas de fusión anteriores, los vectores de expresión recombinantes que comprenden estas secuencias de ADN y las células anfitrionas transformadas o transfectadas con dichos vectores de expresión.

En ciertas realizaciones específicas, dichas proteínas de fusión comprenden un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en los SEQ ID NO: 95, 98, 99 y 101. Las proteínas de fusión pueden comprender adicionalmente un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 6 y/o del SEQ ID NO: 10.

En aspectos relacionados, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una o más de las proteínas de fusión descritas en la presente memoria, o un polinucleótido que codifica dichas proteínas de fusión, y un portador fisiológicamente aceptable. También se proporcionan vacunas que comprenden una o más de dichas proteínas de fusión o polinucleótidos, junto con un inmunoestimulador. En realizaciones específicas de estos aspectos, el antígeno de Leishmania tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOS: 2, y 24.

En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas para su uso en el método de detección de la infección por Leishmania en un paciente. El método comprende (a) poner en contacto células dérmicas del paciente con la composición farmacéutica, y (b) detectar una respuesta inmunitaria en la piel del paciente.

En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas y vacunas como se ha descrito antes para su uso en métodos para inducir inmunidad protectora frente a la leishmaniasis en un paciente.

En un aspecto adicional, se proporcionan kits de diagnóstico para detectar la infección por Leishmania en un paciente. Los kits de diagnóstico comprenden: (a) una composición farmacéutica como se ha descrito anteriormente; y (b) un aparato suficiente para poner en contacto la composición farmacéutica con las células dérmicas de un paciente.

Se describen en la presente memoria los métodos para estimular una respuesta inmunitaria celular y/o humoral en un paciente, que comprenden administrar a un paciente una composición farmacéutica o una vacuna como se ha descrito anteriormente.

También se describen en la presente memoria los métodos para tratar a un paciente aquejado una enfermedad sensible a la estimulación por IL-12, que comprenden administrar a un paciente una composición farmacéutica o una vacuna como se ha descrito anteriormente.

Estos y otros aspectos de la presente invención serán evidentes mediante la referencia a la siguiente descripción detallada y los dibujos adjuntos.

Breve Descripción de los Dibujos

La Figura 1 muestra la estimulación de la proliferación de células T obtenidas de ratones BALB/c inmunizados frente

L. donovani (representado por el índice de estimulación) por macrófagos infectados por L. donovani tras la incubación durante 24, 48 y 72 horas.

La Figura 2 ilustra perfiles de HPLC representativos de péptidos aislados de moléculas del... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Una proteína de fusión que comprende:

(i) un polipéptido que comprende un antígeno de Leishmania que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2, una porción inmunogénica de dicho antígeno capaz de generar al menos 25% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa

o interleuquina 12, o una variante de dicho antígeno que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 2; y

(ii) un polipéptido que comprende un antígeno de Leishmania que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 24, una porción inmunogénica de dicho antígeno capaz de generar al menos 25% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa

o interleuquina 12, o una variante de dicho antígeno que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO:

24.

2. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende:

(i) una porción inmunogénica de un antígeno de Leishmania que consiste en el SEQ ID NO: 2, capaz de generar al menos 50% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa o interleuquina 12; y

(ii) una porción inmunogénica de un antígeno de Leishmania que consiste en el SEQ ID NO: 24, capaz de generar al menos 50% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa o interleuquina 12.

3. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una secuencia de polipéptidos que tiene una identidad de al menos 90% con la secuencia de aminoácidos codificada por el SEQ ID NO: 101.

4. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 3, que consiste en una secuencia de polipéptidos que tiene una identidad de al menos 90% con la secuencia de aminoácidos codificada por el SEQ ID NO: 101.

5. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 3, que comprende el polipéptido codificado por el SEQ ID NO: 101.

6. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 5, que consiste en el polipéptido codificado por el SEQ ID NO: 101.

7. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una secuencia de polipéptidos que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 95.

8. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 7, que consiste en una secuencia de polipéptidos que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 95.

9. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una secuencia de polipéptidos que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 96.

10. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 9, que consiste en una secuencia de polipéptidos que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 96.

11. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende una secuencia de polipéptidos que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 97.

12. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 11, que consiste en una secuencia de polipéptidos que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 97.

13. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende adicionalmente un polipéptido que comprende un antígeno de Leishmania que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 6, una porción inmunogénica de dicho antígeno capaz de generar al menos 25% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa o interleuquina 12, o una variante de dicho antígeno que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 6.

14. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 13, que comprende una porción inmunogénica de un antígeno de Leishmania que consiste en el SEQ ID NO: 6 capaz de generar al menos 50% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa

o interleuquina 12.

15. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 1, 13 o 14, que comprende adicionalmente un polipéptido que comprende un antígeno de Leishmania que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID

NO: 10, una porción inmunogénica de dicho antígeno capaz de generar al menos 25% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa o interleuquina 12, o una variante de dicho antígeno que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID NO: 10.

16. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 15, que comprende una porción inmunogénica de un antígeno de Leishmania que consiste en el SEQ ID NO: 10 capaz de generar al menos 50% de la respuesta generada por dicho antígeno en un modelo de secreción de interferón gamma, interleuquina 2, factor de necrosis tumoral alfa o interleuquina 12.

17. Un polinucleótido que codifica una proteína de fusión de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a

16.

18. Un vector de expresión recombinante que comprende un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 17.

19. Una composición farmacéutica que comprende una proteína de fusión de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, y un portador fisiológicamente aceptable.

20. Una composición farmacéutica que comprende un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 17, y un portador fisiológicamente aceptable.

21. Una composición inmunogénica que comprende la proteína de fusión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 y un inmunoestimulador.

22. Una composición inmunogénica que comprende el polinucleótido de la reivindicación 17 y un inmunoestimulador.

23. La composición de la reivindicación 21 o 22, donde el inmunoestimulador se selecciona del grupo que consiste en: aminoalquilglucosaminido-4-fosfatos; monofosforil lípido A; y monofosforil lípido A 3-des-O-acilado.

24. Una composición inmunogénica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, que comprende adicionalmente un vehículo de liberación.

25. La composición inmunogénica de la reivindicación 24, donde el vehículo de liberación es una microesfera biodegradable.

26. La composición farmacéutica de la reivindicación 19 o 20, para su uso en un método para inducir inmunidad protectora contra la leishmaniasis en un paciente.

27. La composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 25, para su uso en un método para inducir inmunidad protectora contra la leishmaniasis en un paciente.

28. La composición farmacéutica de la reivindicación 19 o 20, para su uso en un método para detectar la infección por Leishmania en un paciente, comprendiendo el método las etapas de:

a) poner en contacto células dérmicas del paciente con la composición farmacéutica; y b) detectar una respuesta inmunitaria en la piel del paciente.

29. La composición farmacéutica de la reivindicación 28, donde la respuesta inmunitaria es el endurecimiento.

30. Un kit de diagnóstico que comprende: a) una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 19; y b) un aparato suficiente para poner en contacto las células dérmicas de un paciente con la composición

farmacéutica.

31. Una vacuna que comprende: a) una proteína de fusión de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16; o b) el polinucleótido de la reivindicación 17; o c) un vector de expresión recombinante de acuerdo con la reivindicación 18; y d) un coadyuvante.

32. La vacuna de la reivindicación 31, para su uso en la inducción de inmunidad protectora contra la leishmaniasis en un paciente.

Respuestas Proliferativas de BALB infectados con L. major (20 días después de la infección) a proteína MAPS recombinante

Análisis ELISA de suero de pacientes humanos de leishmaniasis con título de

anticuerpos específicos de MAPS (8/27/96)


 

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