Un anticuerpo monoclonal neutralizante aislado capaz de unión al dominio de unión del receptor de la proteína espicular del coronavirus asociado al síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV),

en el que el anticuerpo se produce mediante el hibridoma 30F9 con No. de Acceso de ATCC PTA-6523.

Anticuerpos monoclonales neutralizantes contra el coronavirus asociado al síndrome respiratorio agudo severo.

Antecedentes de la invención

El síndrome respiratorio agudo severo (SARS) es una enfermedad respiratoria inferior severa febril reconocida recientemente que es el resultado de una infección causada por un nuevo coronavirus (SARS-CoV) (1-5) . El brote global del SARS se contuvo, pero se mantienen las preocupaciones sobre la posibilidad de futuras recurrencias, especialmente con recientes informes de infecciones adquiridas en laboratorios (6) . Sin embargo, actualmente no existe disponible un tratamiento o profilaxis eficaz para combatir este virus mortal (7, 8) .

Al igual que otros coronavirus, el SARS-CoV, es un virus envuelto que contiene un genoma de ARN de hebra positiva, grande, que codifica proteínas estructurales y proteínas replicasa víricas que incluyen proteínas espicular (S) , de membrana (M) , de envoltura E) , nucleocápsida (N) , y diversas proteínas sin caracterizar (4, 5, 9) . Los análisis filogenéticos indican que el SARS-CoV es distinto de los tres grupos antigénicos conocidos de coronavirus. Por ello, la caracterización post-genómica del SARS-CoV es importante para desarrollar productos terapéuticos y vacunas anti-SARS (10, 11) .

La infección por coronavirus se inicia por la unión de la proteína S al receptor huésped específico, lo cual inicia un cambio de conformación en la proteína S. La proteína S del SARS-CoV es una glucoproteína transmembrana de tipo I con una longitud predicha de 1.255 aminoácidos que contienen un líder (restos 1-14) , un ectodominio (restos 151190) , un dominio transmembrana (restos 1191-1227) , y una cola intracelular corta (restos 1227-1255) (5) . A diferencia de muchos otros coronavirus, tal como el virus de la hepatitis del ratón (MHV) (12, 13) , en el cual la proteína S está escindida post-traducción dentro de subunidades S1 y S2, no se ha identificado un motivo de escisión típico en la proteína S del SARS-CoV (5) . No obstante, sus dominios S1 y S2 fueron predichos mediante la alineación de secuencias con otras proteínas S de coronavirus (5, 14) . El domino S2 (restos 681-1255) de la proteína S del SARS-CoV que contiene un péptido de fusión putativo y dos regiones setenas repetidas (HR1 y HR2) es responsable de la fusión entre membranas de célula vírica y diana. Se ha encontrado que las regiones HR1 y HR2 pueden asociarse para formar una estructura en haz de seis hélices (15-18) , que se parece al núcleo activo de fusión de la gp41 del VIH (19) y la proteína S del MHV (20, 21) . El dominio S1 de la proteína S del SARS-CoV media en la unión del virus con la enzima de conversión de la angiotensina 2 (ACE2) , el receptor funcional para el SARS-CoV sobre células susceptibles (22-25) . Recientemente, se ha identificado un pequeño fragmento de 193 aminoácidos dentro del dominio S1 (restos 318-510) como un dominio de unión del receptor (RBD) , el cual es suficiente para asociarse con ACE2 (26-28) .

Las proteínas S del coronavirus son determinantes antigénicos principales que inducen la producción de anticuerpos neutralizantes (29, 30) . De acuerdo con ello, se deduce lógicamente el uso de la proteína S como un antígeno para el desarrollo de la vacuna (30) . Recientemente, se ha mostrado que la proteína S del SARS-CoV es un inductor principal de inmunidad protectora entre proteínas estructurales (31) . Yang, y otros (32) han informado que un candidato de vacuna de ADN que codifica la proteína S indujo la neutralización del SARS-CoV (valores de anticuerpo neutralizante dentro del intervalo de desde 1:25 hasta 1:150) e inmunidad protectora en ratones, y se probó que la protección estuvo mediada por anticuerpos neutralizantes pero no por un mecanismo dependiente de la célula T. Bisht, y otros (339 han demostrado que la proteína S del SARS-coV expresada por el vrus vaccinia atenuado (MVA) escindió anticuerpos específicos de S con un valor de anticuerpo neutralizante del SARS-CoV de 1:284, e inmunizó de manera protectora a ratones contra infecciones por SARS-CoV, tal como se muestra mediante los valores reducidos de SARS-CoV en los tractos respiratorios de ratones después de exposición a la infección Bukreyev, y otros (34) han informado que la inmunización de mucosa de monos verdes de Africa con virus para-influenza atenuados (BHPIV3) que expresan la proteína S del SARS-CoV indujo anticuerpos neutralizantes con valores de neutralización que variaron desde 1:8 hasta 1:16 y protegieron los animales contra la exposición a la infección. Estos datos indican que la proteína S del SARS-CoV es un antígeno protector capaz de inducir anticuerpos neutralizantes, aunque sus determinantes antigénicos permanecen sin ser definidos.

Los autores de la presente invención han demostrado recientemente que el dominio de unión del receptor (RBD) de la proteína S del SARS-CoV es una diana principal de anticuerpos neutralizantes inducida en pacientes infectados con SARS-CoV y en animales inmunizados con virus inactivados o proteínas S (35, 36) . Por ello, los autores de la presente invención han usado el RBD recombinante de la proteína S del SARS-CoV como un inmunógeno para inducir anticuerpos monoclonales neutralizantes (mABs) .

Breve sumario de la invención

De acuerdo con la presente invención, se proporciona un anticuerpo monoclonal neutralizante aislado capaz de unión al dominio de unión del receptor de la proteína espicular del coronavirus asociado al síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV) , en el que el anticuerpo se produce mediante el hibridoma 30F9 con el No. de Acceso de ATCC PTA-6523.

Además, de acuerdo con la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del anticuerpo de acuerdo con la invención y un vehículo aceptable farmacéuticamente.

Además, de acuerdo con la invención, se proporciona el hibridoma 30F9 con el No. de Acceso de ATCC PTA-6523.

Además, de acuerdo con la invención, se proporciona un anticuerpo de acuerdo con la invención para uso en el tratamiento de la infección por SARS-CoV.

Además, de acuerdo con la invención, se proporciona el uso de un anticuerpo de acuerdo con la invención en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la infección por SARS-CoV.

Además, de acuerdo con la invención, se proporciona un procedimiento para la detección del coronavirus asociado al síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV) o de células infectadas por SARS-CoV in vitro, que comprende poner en contacto un anticuerpo de acuerdo con la invención bajos condiciones que permiten la formación de complejos entre el anticuerpo y el dominio de unión del receptor de la proteína espicular del SARS-CoV, y la detección de los complejos formados.

Además, de acuerdo con la invención, se proporciona un procedimiento para el rastreo de compuestos capaces de inhibir la infección por coronavirus asociado al síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV) , mediante el bloqueo de la unión del virus a los receptores sobre las células huéspedes, que comprende las etapas de:

(a) establecer un sistema para un anticuerpo de acuerdo con la invención, para unir al dominio de unión del receptor de la proteína espicular del SARS-CoV; y

(b) poner en contacto un compuesto para ser rastreado con el sistema de (a) , indicando una disminución en la unión del anticuerpo al dominio de unión del receptor de la proteína espicular del SARS-CoV que el compuesto es capaz de interferir con la unión y de inhibir la infección del dominio de unión del receptor de la proteína espicular del SARS-CoV.

Además, de acuerdo con la invención, se proporciona un kit de diagnóstico o un kit de rastreo que comprende un compartimento que contiene un anticuerpo de acuerdo con la invención.

La presente invención demuestra que el dominio de unión del receptor (RBD) contiene múltiples epítopos de neutralización dependientes de la conformación, que inducen un panel de potentes anticuerpos monoclonales neutralizantes (mAbs) , los cuales pueden usarse para el tratamiento, diagnosis, y prevención del SARS.

Breve descripción de las diferentes vistas de los dibujos Figura 1. (no de acuerdo con la invención) . Mapaje del epítopo de los mAbs 4D5 y 17H9 mediante péptidos de solapamiento que cubren el RBD de la proteína S. Cada uno de los péptidos se recubrió a una concentración de 5 µg/ml y los mAbs se ensayaron a una concentración de 10 µg/ml.

Figura 2. Inhibición de la unión de RBD-Fc a la... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal neutralizante aislado capaz de unión al dominio de unión del receptor de la proteína espicular del coronavirus asociado al síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV) , en el que el anticuerpo se produce mediante el hibridoma 30F9 con No. de Acceso de ATCC PTA-6523.

2. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del anticuerpo de acuerdo con la reivindica5 ción 1 y un vehículo aceptable farmacéuticamente.

3. El hibridoma 30F9 con el No. de Acceso de ATCC PTA-6523.

4. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de infección por SARS-CoV.

5. Uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de infección por SARS-CoV.

6. Un procedimiento para la detección del coronavirus asociado al síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV)

o de células infectadas con SARS-CoV in vitro, que comprende poner en contacto un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 bajo condiciones que permiten la formación de complejos entre el anticuerpo y el dominio de unión del receptor de la proteína espicular del SARS-CoV, y la detección de los complejos formados.

7. Un procedimiento para el rastreo de compuestos capaces de inhibir la infección por el coronavirus asociado al síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV) mediante el bloqueo de la unión del virus a receptores sobre células huéspedes, que comprende las etapas de:

(a) establecer un sistema para el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 para unir al dominio de unión de la proteína espicular del receptor del SARS-CoV; y

(b) poner en contacto un compuesto a rastrear con el sistema de (a) , indicando una disminución en la unión

del anticuerpo al dominio de unión del receptor de la proteína espicular del SARS-CoV que el compuesto es capaz de interferir con la unión e inhibir la infección del dominio de unión del receptor de la proteína espicular del SARS-CoV.

8. Un kit de diagnóstico o un kit de rastreo que comprende un compartimento que contiene un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1.