Anticuerpos monoclonales inmunógenos.

Anticuerpo antiidiotípico inmunógeno, que comprende por lo menos dos epítopes distintos procedentes de antígenos asociados a tumores,

procediendo un epítope del grupo constituido por péptidos o proteínas y un epítope del grupo constituido por carbohidratos, reconociendo el anticuerpo el idiotipo de un anticuerpo contra un antígeno asociado a tumores.

Anticuerpos monoclonales inmunógenos.

La presente invención se refiere a anticuerpos monoclonales que son aptos para la preparación de vacunas contra tumores así como a un procedimiento para la inmunogenización de antígenos asociados a tumores.

Las células cancerígenas presentan prácticamente siempre, además de otras características fisiológicas, las cuales las distinguen de células normales, un tipo modificado de glicosilación (Glycoconj. J. (1997) , 14:569; Adv. Cancer Res. (1989) , 52:257; Cancer Res. (1996) , 56:5309) . Aunque los cambios son distintos de un tejido a otro, puede observarse que una glicosilación cambiada es típica para las células cancerígenas. En la mayoría de los casos, la glicosilación cambiada se presenta en la superficie de las células en forma de glicoproteínas y glicolípidos. Dichas estructuras de azúcar cambiadas pueden denominarse por tanto como antígenos asociados a tumores (TAA) , que en muchos casos son lo suficientemente específicos para tumores, es decir, que ocurren raramente en las células "normales". En muchos casos, las células, incluidas las células tumorales, no producen una glicosilación uniforme, es decir, que existen formas glico distintas de cadenas de glicano complejas en una célula (Annu. Rev. Biochem. (1988) , 57:785) .

Entre los ejemplos de estructuras de carbohidratos asociadas a tumores, se incluyen los antígenos Lewis, que se expresan de forma aumentada en muchos tipos de cánceres epiteliales. Entre éstos, se incluyen las estructuras Lewis x, Lewis b y Lewis y, así como estructuras Lewis x sializadas. Otros antígenos de carbohidratos son las estructuras GloboH, KH1, antígeno Tn, antígeno TF, el epítope alfa-1, 3-galactosilo (Electrophoresis (1999) , 20:362; Curr. Pharmaceutical Design (2000) , 6:485, Neoplasma (1996) , 43: 285) .

Otros TAA son proteínas que se expresan de forma particularmente pronunciada en células cancerígenas, tales como por ejemplo CEA, TAG-72, MUC1, Folate Binding Protein A-33, CA 125, EpCAM, HER-2/neu, PSA, MART, etc. (Sem. Cancer Biol. (1995) , 6:321) .

Un planteamiento de destruir células tumorales de forma relativamente específica es una terapia inmune pasiva con anticuerpos que están dirigidos contra TAA (Immunology Today (2000) , 21:403-410; Curr. Opin. Immunol. (1997) , 9:717) .

Otro planteamiento de destruir células tumorales es una vacunación activa, que dispara una respuesta inmune contra TAA. Por tanto, dicha respuesta inmune esta dirigida también contra las células tumorales respectivas (Ann. Med. (1999) , 31:66; Immunobiol. (1999) , 201:1) .

En caso de una inmunización activa, un gran problema radica en la baja inmunogenicidad de los antígenos. Los carbohidratos son moléculas muy pequeñas, por lo cual no son reconocidas directamente por el sistema inmune. Los carbohidratos y polisacáridos se consideran por lo general como antígenos timo-dependientes. La conjugación de estructuras de carbohidratos inmunológicamente inertes con antígenos timo-dependientes, tales como proteínas, refuerzan su inmunogenicidad. Por tanto, las vacunas a base de estructuras de carbohidratos asociadas a tumores se acoplan a las denominadas "moléculas portadoras", con el fin de aumentar la inmunogenicidad (Angew. Chem. Int. Ed. (2000) , 39:836) . Las moléculas portadoras utilizadas a menudo son proteínas, tal como albúmina de suero bovino o KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin) . Dicha proteína estimula las células T de ayuda específicas para el portador, que a continuación son importantes en la inducción de la síntesis de los anticuerpos anti-carbohidratos (Contrib. Microbiol. Immunol. (1989) , 10:18) .

Además de éstos, tanto los antígenos de carbohidratos como los antígenos de proteínas están presentes también en tejidos sanos (por lo menos en etapas de desarrollo determinadas del organismo) y por tanto son reconocidos por el sistema inmune como material autólogo, por lo cual normalmente no tiene lugar una respuesta inmune contra dichas moléculas endógenas.

Otra opción de mejorar la calidad de la respuesta inmune a los carbohidratos es la inmunización con los denominados "mimótopes", que no son carbohidratos (por ejemplo péptidos; Nat. Biotechnol. (1999) , 17:660; Nat. Biotechnol. (1997) , 15:512) .

Las proteínas asociadas a tumores presentan una baja inmunogenicidad, aunque a pesar de esto se incluyen entre las vacunas (Ann. Med. (1999) , 31:66; Cancer Immunol. Immunother. (2000) , 49:123; memoria de patente estadounidense 5994523) . Una posibilidad de evitar el "auto"-reconocimiento de TAA determinados es la utilización de anticuerpos antiidiotípicos como inmunógeno, que imitan la estructura del TAA, disparando una respuesta inmune que reacciona también con el TAA (Cancer Immunol. Immunother. (2000) , 49:133) . Existen además otras posibilidades de penetrar la auto-tolerancia frente a proteínas determinadas, tal como por ejemplo la fusión de TAA con secuencias de proteínas ajenas determinadas (US 5, 869, 057, US 5, 843, 648 y US 6, 069, 242) o a través de una presentación adecuada por medio de células presentadoras de antígenos (Immunobiol. (1999) , 201:1) .

El objetivo de la presente invención es evitar los inconvenientes de las vacunas contra tumores descritas en el

estado de la técnica y, conforma a esto, proporcionar una vacuna contra tumores mejorada, que provoque una respuesta inmune eficaz contra las células tumorales.

Dicho objetivo se consigue según la invención por medio de un anticuerpo inmunógeno tal como se ha definido en las reivindicaciones.

Por el término "inmunógeno" deben entenderse todas las estructuras que dan lugar a una respuesta inmune en un sistema de huésped específico. Por ejemplo, un anticuerpo murino o fragmentos de dicho anticuerpo presentan una inmunogenicidad muy alta en el organismo humano, un efecto que puede reforzarse aún más combinando dicho anticuerpo con adyuvantes.

Un anticuerpo inmunógeno puede actuar como un inmunógeno o bien por medio de su especificidad o bien por medio de su estructura. Preferentemente, el anticuerpo inmunógeno según la invención puede inducir inmunogenicidad también en su estado desnaturalizado o como conjugado con estructuras o sustancias portadoras seleccionadas.

El término "epítope" define cualquier región dentro de una molécula que puede ser reconocida por un anticuerpo específico o que induce la formación de dichos anticuerpos específicos. Los epítopes pueden ser epítopes de conformación o epítopes lineales.

Los epítopes imitan o comprenden en particular los dominios de un TAA natural, homólogo o de su derivado. Son comparables a los TAA por lo menos con relación a su estructura primaria y posiblemente su estructura secundaria. Sin embargo, los epítopes pueden ser también completamente distintos con relación a este aspecto y pueden imitar partes de un TAA puramente por el hecho de ser similares a estructuras espaciales (terciarias) , en particular imitar antígenos de proteínas o carbohidratos. Por tanto, puede ser únicamente la estructura terciaria de una molécula que forma una imitación (imitación inmunológica, tal como por ejemplo es conocido por el documento WO 00/73430) , que provoca una respuesta inmune contra un TAA determinado.

Como regla general, hay que suponer que por un antígeno que imita un epítope proteínico de un antígeno asociado a tumores debe entenderse un polipéptido de por lo menos cinco aminoácidos.

Entre los epítopes del anticuerpo según la invención, se encuentra preferentemente por lo menos un epítope de un antígeno seleccionado entre el grupo constituido por péptidos o proteínas, en particular EpCAM, NCAM, CEA y péptidos de células T, derivados preferentemente de antígenos asociados a tumores, además carbohidratos, en particular Lewis Y, sialil-Tn, Globo H, y glicolípidos, en particular GD2, GD3 y GM2. Los epítopes preferidos se han derivado de antígenos que son específicos para los tumores epiteliales y ocurren por ejemplo de forma aumentada en el cáncer de mama, cáncer del estómago y del intestino, de la próstata, páncreas, ovarios y pulmón. Entre los epítopes preferidos, se encuentran los que provocan una respuesta inmune en particular humoral, es decir, una formación de anticuerpos específica in vivo. Preferentemente, el anticuerpo inmunógeno según la invención puede disparar también una respuesta inmune específica para las células T, lo cual da lugar, como reacción a la administración del anticuerpo, a la formación no... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo antiidiotípico inmunógeno, que comprende por lo menos dos epítopes distintos procedentes de antígenos asociados a tumores, procediendo un epítope del grupo constituido por péptidos o proteínas y un epítope del grupo constituido por carbohidratos, reconociendo el anticuerpo el idiotipo de un anticuerpo contra un antígeno asociado a tumores.

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, caracterizado porque comprende por lo menos un epítope de un antígeno seleccionado de entre el grupo constituido por péptidos o proteínas, en particular EpCAM, NCAM, CEA y péptidos de células T, carbohidratos, en particular Lewis Y, sialil-Tn, Globo H, y glicolípidos, en particular GD2, GD3 y GM2.

3. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque presenta por lo menos dos epítopes de EpCAM.

4. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque está conjugado con un péptido, un glicopéptido, un carbohidrato, un lípido o un ácido nucleico.

5. Anticuerpo según la reivindicación 4, caracterizado porque el péptido, el glicopéptido, el carbohidrato, el lípido o el ácido nucleico representa un epítope de un antígeno asociado a tumores.

6. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque presenta por lo menos un epítope de EpCAM y por lo menos un epítope de Lewis Y.

7. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque presenta por lo menos un epítope de EpCAM y por lo menos un epítope de sialil-Tn.

8. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque es un anticuerpo humano, humanizado, quimérico o murino.

9. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque es un anticuerpo recombinante.

10. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque es un derivado de un anticuerpo seleccionado de entre el grupo constituido por fragmentos, conjugados u homólogos de anticuerpos.

11. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque el antígeno del idiotipo se selecciona de entre el grupo constituido por péptidos o proteínas, en particular EpCAM, NCAM, CEA y péptidos de células T.

12. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque el antígeno del idiotipo se selecciona de entre el grupo constituido por carbohidratos, en particular Lewis Y, sialil-Tn, Globo H, y glicolípidos, en particular GD2, GD3 y GM2.

13. Preparación farmacéutica, que contiene un anticuerpo inmunógeno según una de las reivindicaciones 1 a 12.

14. Agente diagnóstico, que contiene un anticuerpo inmunógeno según una de las reivindicaciones 1 a 12.

15. Formulación de vacuna, que contiene un anticuerpo inmunógeno según una de las reivindicaciones 1 a 12.

16. Formulación de vacuna según la reivindicación 15, caracterizada porque el anticuerpo está contenido en una cantidad inmunógena comprendida entre 0, 10 μg y 10 mg.

17. Formulación de vacuna según una de las reivindicaciones 15 ó 16, caracterizada porque contiene por lo menos un adyuvante de vacuna.

18. Procedimiento para la preparación de un anticuerpo inmunógeno según una de las reivindicaciones 1 a 12, que comprende las etapas siguientes:

a) proporcionar un anticuerpo con el idiotipo de un antígeno asociado a tumores; y b) acoplar por lo menos un epítope de un antígeno asociado a tumores o su imitación al anticuerpo.

19. Procedimiento para la preparación de un anticuerpo inmunógeno según una de las reivindicaciones 1 a 12 que comprende las etapas siguientes:

a) proporcionar un ácido nucleico que codifica para un anticuerpo con el idiotipo de un antígeno asociado a tumores; y b) recombinar el ácido nucleico con un ácido nucleico, que codifica para un epítope de un antígeno asociado a tumores o su imitación.

20. Procedimiento para la preparación de un anticuerpo inmunógeno según la reivindicación 1, caracterizado porque un epítope de un antígeno asociado a tumores o su imitación se conjuga con el anticuerpo como portador.

21. Procedimiento según la reivindicación 20, caracterizado porque el antígeno se ha seleccionado de entre el grupo constituido por péptidos o proteínas, en particular EpCAM, NCAM, CEA y péptidos de células T, carbohidratos, en particular Lewis Y, sialil-Tn, Globo H, y glicolípidos, en particular GD2, GD3 y GM2.

22. Procedimiento según la reivindicación 20 ó 21, caracterizado porque un ácido nucleico que codifica para un 10 epítope de un antígeno de péptido o proteína se conjuga con el anticuerpo.

23. Procedimiento según una de las reivindicaciones 20 a 22, caracterizado porque el anticuerpo comprende por lo menos un epítope adicional de un antígeno asociado a tumores.