Procedimiento de control de una inyección de una composición luminiscente en un huevo aviar con fines de vacuna.

Procedimiento de control de una inyección de un producto con fines de vacuna en un huevo aviar,

que comprende

sucesivamente las etapas siguientes :

- inyección de una composición que comprende un producto que tiene una actividad de vacuna y un compuesto luminiscente que forma un biomarcador de dicho producto que tiene una actividad de vacuna en un huevo;

- detección de la señal emitida por el compuesto luminiscente a través de la cáscara del huevo;

- tratamientos de la información recogida.

Procedimiento de control de una inyección de una composición luminiscente en un huevo aviar con fines de vacuna 1. Campo técnico de la invención La invención se refiere al uso de compuestos aptos para emitir una señal luminiscente de en un huevo aviar.

La invención se refiere en particular al uso de estos biomarcadores en un procedimiento de detección y/o de cuantificación de fenómenos biológicos con fines de vacuna y/o terapéuticos y/o diagnósticos en un huevo aviar.

La invención está destinada de forma más particular al campo de la vacunación in ovo.

2. Antecedente tecnológico La formación de imágenes ópticas gana popularidad en el campo biomédico con numerosas aplicaciones preclínicas y en seres humanos en campos tales como la investigación sobre el cáncer, para la detección de tumores o incluso en neurociencias, para la formación de imágenes del cerebro.

Por lo tanto, como se ha descrito en el documento de patente publicado con el número WO2008/025006 con respecto a ratones o animales pequeños, los fotones emitidos por la dispersión de las células marcadas por un compuesto luminiscente excitado por una luz se difunden a través de los tejidos de estos mamíferos. Incluso si esta serie de fotones difundidos se absorben, una fracción llega a la superficie en la que se pueden detectar con una cámara que registra en dos dimensiones (2D) la distribución espacial de los fotones emitidos por la superficie.

Sin embargo, incluso en el caso de una sonda fluorescente única en un ratón, la autofluorescencia tisular hace difícil una buena resolución.

En un intento de superar estas deficiencias, se han explorado dos temas principales :

- adaptación de dispositivos de formación de imágenes ópticas de acuerdo con las directrices que se describen en el documento de patente publicado con el número WO2007 144542 ; -adaptación de sondas luminiscentes : se han desarrollado números de sondas pero la atención de la solicitante se ha centrado más particularmente en los biomarcadores, tales como los que se escriben en el documento de patente publicado con el número WO2006/129036. Sin embargo, estas informaciones no permiten ni sugieren aplicar la formación de imágenes ópticas sobre huevos.

El documento de patente WO 2010/103111 enseña a los inventores que anticuerpos inyectables se marcan preferentemente con compuestos luminiscentes, tales como por ejemplo un grupo fluorescente o fosforescente. El documento de patente WO 2010/103111 se refiere a los procedimientos de determinación del sexo de los embriones. Este procedimiento comprende en particular la inyección de un anticuerpo marcado, que se fijará de forma específica a ciertos antígenos del embrión.

El documento de Patente de Estados Unidos Nº 4 458 630 desvela un procedimiento de vacunación in ovo, en particular mediante inyección de cepas de virus específicos. El documento de Patente de Estados Unidos Nº 5 028 421 desvela también un procedimiento de vacunación in ovo, en particular por inyección de interleuquina aviar.

3. Objetivos de la invención Una de las aplicaciones preferentes de la invención se aplica a la vacunación in ovo.

Hasta el momento actual, se ha desarrollado una serie de técnicas para permitir que la vacunación in ovo de embriones, es decir, la vacunación de embriones mientras que estos últimos todavía se encuentran en el huevo. De hecho, se reconoce que estas vacunas in ovo permiten una reducción de los costes, una alta automatización de la vacunación, una reducción del estrés y aumenta la tasa de éxito en comparación con una vacunación de los pollos después de la eclosión.

Una de las dificultades de esta operación de vacunación in ovo reside en el control de la vacunación, pudiendo variar el tamaño del huevo de forma significativa. De hecho, un huevo fertilizado comprende una pluralidad de compartimentos distintos, a saber la cáscara exterior, la cámara de aire, el fluido alantoideo, el líquido amniótico y el embrión. Sin embargo, la vacunación solamente es eficaz si el producto se inyecta en el embrión o en el líquido amniótico.

En la práctica es difícil certificar que la inyección se realizó correctamente, en particular en las cadenas automatizadas de tratamiento huevos aviares, tales como las líneas de tratamiento de huevos de futuros pollos de engorde.

Una de las soluciones usadas normalmente en la actualidad consiste en mezclar el producto inyectado con un colorante y en tomar muestras de grandes cantidades de huevos en la cadena de vacunación para verificar la calidad de la inyección. Si el huevo sometido a ensayo de este modo se considera no conforme, entonces el dispositivo de inyección se vuelve a calibrar.

Uno de los inconvenientes de este procedimiento es que requiere la destrucción de varios cientos o miles de huevos, por lo tanto embriones, sin garantizar, no obstante, una buena reproducibilidad de la vacunación y requiere una puesta en marcha pesada en términos de personal y tiempo. Otro inconveniente unido a esta destrucción masiva de huevos es la imposibilidad de aplicar este procedimiento de forma rutinaria y el carácter invasivo que no es compatible con los patrones de automatización, de productividad y de bienestar.

También existe una necesidad de un procedimiento de control para poder garantizar que la vacunación y/o la extracción se realizan en condiciones óptimas.

Por lo tanto, la invención tiene como objeto solucionar al menos algunos de los inconvenientes de los procedimientos y dispositivos del estado de la técnica.

En particular, la invención tiene como objeto proporcionar un procedimiento para controlar la calidad de una inyección de producto en un huevo que no sea invasivo.

La invención también tiene como objeto proporcionar un procedimiento tal que su fiabilidad no éste solamente relacionada con un calibre de huevo.

La invención también tiene como objeto proponer un dispositivo para la realización de un procedimiento de acuerdo con la invención.

4. Descripción de la invención El objeto de la presente solicitud está limitado por el objeto de las reivindicaciones 1-17. La solicitud se refiere a cualquier composición luminiscente inyectable en un huevo caracterizada porque comprende un compuesto apto para emitir una señal luminiscente (o fluorescente o autoluminiscente o quimioluminiscente) detectable en un huevo que forma biomarcador de un producto que tiene una actividad de vacuna, terapéutica o de diagnóstico.

Se observará que los compuestos luminiscentes de acuerdo con la solicitud usados para marcar un producto que tienen tal actividad de vacuna, se distinguen claramente de los anticuerpos marcados detectables por una excitación luminosa conocidos en la solicitud WO2010/103111 y usados para determinar in ovo el sexo de las especies aviares.

Por compuesto apto para emitir una señal luminiscente, se entiende todo compuesto que emite una radiación durante su paso de un estado estable a un estado excitado o viceversa.

De acuerdo con un modo de realización en particular, dicho compuesto luminiscente es el verde de indocianina que emitirá fotones después de someter al huevo a una fuente de excitación luminosa.

De acuerdo con una variante, la composición usada en el procedimiento comprende además un producto que tiene una actividad de vacuna.

La invención se refiere a un procedimiento de control de la inyección de un producto con fines de vacuna en un huevo, que comprende sucesivamente las etapas siguientes :

- inyección de una composición que comprende un producto que tiene una actividad de vacuna y un compuesto luminiscente que forman biomarcador de dicho producto que tiene una actividad de vacuna en un huevo ; -detección de la señal emitida por el compuesto luminiscente a través de la cáscara del huevo ; -tratamiento de la información recogida.

Por lo tanto, se trata claramente de un procedimiento de control de acuerdo con la invención que no es invasivo.

Además, como quedara más claro a continuación, la fiabilidad de un procedimiento de acuerdo con la invención es independiente del calibre del huevo analizado.

Además, es posible, por ejemplo, integrar un procedimiento de acuerdo con la invención sobre una cadena automática de vacunación.

La invención se encuentra, por lo tanto, en el uso de un compuesto luminiscente como marcador del producto inyectado en el huevo. En efecto, la solicitante ha descubierto que es posible detectar los fotones emitidos por el compuesto luminiscente, esto a pesar de la presencia de una barrera mineral, es decir, la cáscara del huevo.

De acuerdo con una solución ventajosa,... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de control de una inyección de un producto con fines de vacuna en un huevo aviar, que comprende sucesivamente las etapas siguientes :

- inyección de una composición que comprende un producto que tiene una actividad de vacuna y un compuesto luminiscente que forma un biomarcador de dicho producto que tiene una actividad de vacuna en un huevo; -detección de la señal emitida por el compuesto luminiscente a través de la cáscara del huevo; -tratamientos de la información recogida.

2. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque dicho compuesto luminiscente es un compuesto fluorescente o autoluminiscente o quimioluminiscente.

3. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque dicho compuesto luminiscente es el verde de indocianina o sus derivados, tales como sales, ésteres o derivados funcionalizados con elementos estructurales.

4. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque dicho compuesto luminiscente es de tipo S-B-A o sus derivados, tales como sales, ésteres o derivados funcionalizados con elementos estructurales.

5. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque comprende una etapa de correlación de la señal emitida por el compuesto luminiscente y de localización de la misma en el huevo.

6. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque comprende una etapa de someter el huevo a una fuente de excitación luminosa necesaria para la detección de la señal.

7. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado porque la fuente de excitación luminosa está adaptada a las longitudes de onda del compuesto luminiscente.

8. Procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 6 o 7, caracterizado porque la fuente de excitación luminosa es un láser o cualquiera de los filtros adaptados a las longitudes de onda del compuesto luminiscente.

9. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque comprende una etapa previa de modelado de la señal emitida par el compuesto luminiscente cuando se sitúa en cada una de las zonas siguientes del huevo :

- cámara de aire, -líquido alantoideo, -líquido amniótico, -embrión.

10. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, caracterizado porque dicha etapa de análisis es realizada con la ayuda de una unidad de tratamiento en la que se memorizan las señales modeladas obtenidas durante dicha etapa preliminar.

11. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10, caracterizado porque comprende una etapa de comparación de la señal emitida par el compuesto luminiscente a través de la cáscara del huevo durante la etapa de detección con las señales modeladas obtenidas durante dicha etapa preliminar.

12. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque dicha etapa de inyección es realizada con el fin de inyectar de forma simultánea dicho producto a inyectar y dicho compuesto luminiscente.

13. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque dicha etapa de inyección es realizada con el fin de inyectar de forma separada dicho producto a inyectar y dicho compuesto luminiscente.

14. Procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 12 o 13, caracterizado porque dicho compuesto luminiscente es apto para su fijación sobre el producto.

15. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 14, caracterizado porque dicha etapa de someter el huevo a una fuente de excitación luminosa y dicha etapa de detección de la señal son efectuadas a ambos lados del eje de simetría de dicho huevo.

16. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 15, caracterizado porque dichas etapas de sometimiento y de tratamiento de la información recogida son efectuadas para al menos dos, preferentemente al menos tres, posiciones angulares distintas relativas entre el huevo y dicha fuente de excitación luminosa.

17. Procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 16, caracterizado porque dicha etapa de tratamiento de la información recogida es efectuada solamente sobre la parte de la señal emitida por la parte superior del huevo que contiene la cámara de aire.