UTILIZACIÓN DE FIBROBLASTOS GINGIVALES EN LA TERAPIA CELULAR VASCULAR.

Utilización de fibroblastos gingivales para la obtención de una composición celular destinada al tratamiento de una patología de remodelación arterial

La presente invención se refiere a la utilización de fibroblastos gingivales en la terapia vascular celular, especialmente para el tratamiento de patologías arteriales.

La pared arterial se compone de tres capas superpuestas denominadas túnicas. La túnica interna 5 (íntima) está constituida de una capa de células endoteliales. La túnica intermedia (media) se compone principalmente de fibras musculares lisas y de tejido conjuntivo rico en fibras elásticas. La túnica externa (adventicia) es una envoltura conjuntiva que rodea el conjunto.

Las arterias están sometidas a muchas agresiones de diverso origen (hipoxia, sobrecarga lipídica, fuerzas hemodinámicas, ateroma, hipertensión, etc.) que pueden inducir lesiones de la pared arterial. 10 Durante la reparación de estas lesiones, se puede producir una reacción de cicatrización anormal, que resulta de un desequilibrio entre la degradación y la síntesis de la matriz extracelular, induciendo una remodelación arterial patológica que puede traducirse en un ensanchamiento vascular (aneurisma) o, por el contrario, por una constricción (estenosis, que surge secundariamente durante la aterogénesis, o restenosis, consecuencia particular de una angioplastia que evoluciona con la remisión de la remodelación 15 cicatrizal hacia la reaparición de una estenosis).

Por ejemplo, en las lesiones aneurismales se observa, en general, una degradación enzimática de los componentes de la matriz extracelular, especialmente de las fibras elásticas, así como una disminución del número de células musculares lisas (CML); en la adventicia se observa una fibrosis acompañada de una importante infiltración inflamatoria. 20

La degradación de los componentes de la matriz extracelular implica a diversas proteasas matriciales. Entre ellas, se mencionará en particular una elastasa, la metaloproteinasa-9 matricial (MMP9), sintetizada por los leucocitos infiltrados y las células huésped fisiológicas (células endoteliales, células musculares lisas y fibroblastos adventiciales) que es responsable en su mayor parte de la fragmentación de las fibras elásticas (THOMPSON, J. Clin. Invest. 96: 318-326, 1995). Paralelamente, la disminución de las 25 CML en la media ocasiona una disminución de la síntesis de los componentes de la matriz extracelular y de la de los inhibidores de las proteasas matriciales, que son sintetizadas principalmente por estas CML (LOPEZ-CANDALES y col., Am. J. Pathol. 150: 993-1007, 1997).

En el caso de la estenosis y de la restenosis se produce una remodelación fibrosa retráctil que puede ser considerada también como un proceso de cicatrización anormal. Esta remodelación se 30 caracteriza por una hiperplasia fibrosa de la íntima (LAFONT y col., Circ. Res. 76 (6): 996-1002, 1995) y parece unida a un incremento del colágeno en la neoíntima, en la media y en la adventicia (LAFONT y col., Circulation 100(10): 1109-1115, 1999; DURAND y col., Arch. Mal. Coeur Vaiss. 94(6): 605-611, 2001).

Actualmente, el tratamiento de las patologías arteriales se basa principalmente en la cirugía y en la cardiología intervencional (cirugía vascular, puentes aortocoronarios y periféricos, prótesis aórticas de 35 Dacron, angioplastia arterial coronaria y periférica, endoprótesis aórticas, etc.). Sin embargo, estas técnicas invasivas no tratan la causa, sino las consecuencias de la patología. Permiten una mejora de la situación del paciente sin ser capaces de detener el desarrollo de la enfermedad.

Por tanto, parece necesario disponer de nuevos medios de tratamiento menos invasivos que permitan tratar eficazmente la remodelación arterial patológica. 40

ALLAIRE y col., (J. Clin. Invest. 102(7): 1413-1420, 1998) observaron, en un modelo de aneurisma experimental en la rata, que la implantación local de CMS en la pared arterial inducía una inhibición de la degradación de las fibras elásticas y de la formación de un aneurisma. Se ha mostrado también en la rata que aneurismas experimentales ya formados pueden ser estabilizados por inyección local de CML. Esta estabilización se asocia a una secreción de TGFβ de origen paracrino a nivel de trasplante celular (LOSY y 45 col., J. Vasc. Surg. 37(6): 1301-1309, 2003).

Sin embargo, un obstáculo más importante que la utilización de CMS para el tratamiento de los aneurismas mediante de la terapia celular se deriva de la necesidad de obtener estas CML a partir de células cepa. Las células cepa utilizadas proceden de la médula o de la sangre y resulta muy difícil obtenerlas. 50

Los inventores se han propuesto investigar si podían utilizarse eventualmente en terapia celular tipos de células distintas de las CML de la pared arterial y tuvieron la idea de someter a prueba los fibroblastos gingivales.

Los fibroblastos gingivales son células mesenquimatosas capaces de migrar, adherirse y proliferar dentro de los tejidos conjuntivos blandos de la encía, manteniendo así la integridad del tejido gingival 55

sometido a numerosas agresiones tales como fuerzas mecánicas, infecciones bacterianas, variaciones de pH, de temperatura, etc. (GOGLY y col., Clin. Oral Invest. 1:1 147-152, 1997; GOBLY y col., Biochem. Pharmacol. 56(11): 1447-1454, 1998; EJEIL y col., J. Periodontol. 74(2): 188-195, 2003).

Según las condiciones ambientales a las que están sometidos, los fibroblastos gingivales son capaces de cambiar de fenotipo y responder a los estímulos que proceden del entorno tisular gingival 5 mediante proliferación, migración, síntesis o degradación de los componentes de la matriz extracelular.

Así, son capaces de sintetizar diversos componentes de la matriz extracelular: colágenos (tipos I, III, V, VI, VII, XII), fibras elásticas, proteoglicanos y glicosaminoglicanos, glicoproteínas. Asimismo, pueden producir una variedad de enzimas (en particular metaloproteasas), capaces de degradar estos compuestos macromoleculares. Por último, pueden expresar también inhibidores tisulares de las metaloproteasas que 10 inhiben las formas activas de las MMP.

Los inventores realizaron co-cultivos de fibroblastos gingivales y de CML y observaron que las interacciones entre estas células conducían a la inhibición por los fibroblastos gingivales de la actividad de las MMP9 por las CML, así como a la potencialización de la secreción de TGFβ por ambos tipos celulares. Estos efectos son específicos de los fibroblastos gingivales y no se observan cuando las CML se co-15 cultivan con fibroblastos dérmicos o adventiciales.

Se realizaron observaciones idénticas en co-cultivos de fibroblastos gingivales y de arterias lesionadas. Este modelo organotípico ha permitido también demostrar que la presencia de fibroblastos gingivales induce una protección de la red elástica.

Se evidencia por tanto que los fibroblastos gingivales por una parte tienen un efecto inhibidor 20 sobre uno de los factores principales de la formación de los aneurismas, a saber la MMP9 responsable de la degradación de la red elástica, y, por otra parte, un efecto activador sobre un factor favorable a la estabilización de los aneurismas, a saber la secreción de TGFβ.

Además, los inventores realizaron en conejos ensayos in vivo de trasplante de fibroblastos gingivales obtenidos a partir de una muestra de tejido gingival de conejo en la pared arterial de dicho 25 conejo y constataron que estos fibroblastos gingivales autólogos eran capaces de insertarse en la pared a la altura de la media.

Por tanto, la presente invención tiene por objeto la utilización de fibroblastos gingivales para la obtención de una composición celular destinada al tratamiento de una patología de remodelación arterial.

Los fibroblastos gingivales se pueden utilizar, según la invención, en todas las patologías 30 vasculares, especialmente arteriales, con alteraciones profundas de la matriz extracelular. Se mencionarán en particular: aterosclerosis, placa vulnerable, restenosis, aneurismas arteriales, disección aórtica.

Según una realización preferente de la presente invención, dicha patología es un aneurisma.

Según otra realización preferente de la presente invención, dicha patología es una estenosis o una restenosis tras una angioplastia. 35

Dichos fibroblastos son preferentemente fibroblastos autólogos, es decir fibroblastos procedentes de tejido gingival previamente extraído del sujeto al que se destina el tratamiento y cultivados. Preferentemente,...

1. Utilización de fibroblastos gingivales para la obtención de una composición celular destinada al tratamiento de una patología de remodelación arterial.

2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicha patología es un aneurisma.

3. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicha patología es una estenosis o restenosis 5 después de una angioplastia.

4. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicha patología es una disección aórtica.

5. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque dicha patología es una ateroesclerosis.

6. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque dichos fibroblastos proceden de tejido gingival previamente extraído en el sujeto al que se destina el tratamiento. 10