USO DE LA ACTIVIDAD PARP INHIBIDORA DE ARNI PARA LA FABRICACIÓN DE UN MEDICAMENTO PARA EL TRATAMIENTO DEL CÁNCER.

Uso de la actividad PARP inhibidora de ARNI para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer. [0001] Esta invención se refiere al uso de un agente que inhibe la actividad de una enzima que media en la reparación de roturas en las cadenas de ADN para el tratamiento de algunas formas de cáncer, en particular el cáncer de mama. [0002] La recombinación homóloga (RH) ha demostrado jugar un importante papel en la reparación del daño que se produce en las horquillas de replicación del ADN en células de mamíferos (2). De esta manera, las células deficientes en RH muestran un crecimiento retardado y presentan mayor nivel de inestabilidad genética. Se piensa que la inestabilidad genética debida a la pérdida de reparación de la RH en cánceres humanos contribuye significativamente al desarrollo del cáncer en estas células (1). [0003] La modificación después de la transcripción de las proteínas nucleares mediante poli-ADP-ribosilación (PARP) en respuesta a las roturas en las cadenas de ADN desempeña un importante papel en la reparación del ADN, la regulación de la apoptosis, y el mantenimiento de la estabilidad genómica. [0004] La poli-ADP-ribosa polimerasa (PARP-1) es una proteína nuclear abundante en células de mamíferos que cataliza la formación de polímeros de poli-ADP-ribosa (PAR) usando NAD + como sustrato. Tras el daño del ADN, la PARP-1 se une rápidamente a una cadena de ADN (monocatenaria o bicatenaria) rota y cataliza la adición de cadenas de PAR cargadas negativamente a sí mismo (automodificación) y a otras proteínas (véase [3, 4] para revisiones). Se piensa que la unión de la PARP-1 a las roturas en las cadenas de ADN protege las lesiones del ADN de un procesamiento adicional hasta que la PARP-1 se disocia de la cadena rota por la carga negativa acumulada resultante de los polímeros PAR (5,6). [0005] Aunque se ha involucrado a la PARP-1 en algunos procesos nucleares, tales como la modulación de la estructura de la cromatina, la replicación del ADN, la reparación y la transcripción del ADN, los ratones con PARP-1 inactivada se desarrollan normalmente (7). Las células aisladas de estos ratones presentan un fenotipo de hiperrecombinación e inestabilidad genética en la forma de niveles crecientes de SCE, micronúcleos y tetraploidía (8-10). Se puede producir también inestabilidad genética en estos ratones con PARP-1 inactivada mediante acortamiento telomérico, frecuencia creciente de fusión cromosómica y aneuploidía (11), aunque todos estos resultados no se podrían repetir en otro lote de ratones con PARP-1 inactivada (12). En los ratones inactivados anteriores, la mutación nuII de PARP-1 rescata la recombinación V(D)J desequilibrada en ratones SCID (13). Estos resultados apoyan la opinión sugerida por Lindahl y colaboradores de que la PARP-1 tiene un papel protector frente a la recombinación (5). Estos autores propusieron que la unión de la PARP-1 a las roturas en las cadenas de ADN evita que la maquinaria de recombinación reconozca y procese lesiones de ADN o, alternativamente, que las cargas negativas acumuladas tras la poli-ADP-ribosilación repelan las secuencias de ADN recombinogénicas adyacentes. Solo el último modelo es consistente con la propia inhibición de la PARP-1 y la expresión de un mutante PARP-1 negativo dominante, induciendo SCE, la amplificación génica y la recombinación homóloga (RH [14-18]). [0006] Los estudios basados en el tratamiento de células con inhibidores de la PARP o de células derivadas de ratones con PARP-1 o PARP-2 inactivados indica que la supresión de la actividad de la PARP-1 aumenta la susceptibilidad celular a los agentes que dañan el ADN e inhibe la reunión de la cadena rota (3,4, 8-11, 19, 20, 47). [0007] Se han usado inhibidores de la actividad de la PARP-1 en combinación con agentes anticancerosos tradicionales, tales como radioterapia y quimioterapia (21). Se usaron los inhibidores en combinación con agentes metilantes, venenos de la topoisomerasa y radiaciones ionizantes y se encontró que potenciaban la efectividad de estas formas de tratamiento. Se sabe, sin embargo, que dichos tratamientos producen daño y muerte de las células no cancerosas o sanas y están asociados con efectos secundarios desagradables. [0008] Existe por tanto una necesidad de tratamiento del cáncer que sea eficaz y selectivo al mismo tiempo en la eliminación de células cancerosas y que no necesite administrarse en combinación con tratamientos de radioterapia o quimioterapia. [0009] Los presentes inventores han encontrado sorprendentemente que las células deficientes en la recombinación homóloga (RH) son hipersensibles a los inhibidores de la PARP en comparación con las células naturales. Esto es sorprendente debido a que los ratones con PARP-1 inactivada viven de manera normal indicando de este modo que la PARP-1 no es esencial para la vida. De esta manera, no se esperaría que dichas células fueran sensibles a la inhibición de la PARP. [0010] De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona el uso de un agente que inhibe la 2 ES 2 367 433 T3 actividad de una enzima que media en la reparación de roturas de las cadenas de ADN en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades que están producidas por un defecto genético en un gen que media en la recombinación homóloga. [0011] En un aspecto adicional, la invención proporciona un procedimiento de tratamiento de una enfermedad o dolencia en un mamífero, que incluye un ser humano, que está producida por un defecto genético en un gen que media en la recombinación homóloga, dicho procedimiento comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente que inhibe la actividad de una enzima que media en la reparación de cadenas de roturas en el ADN u otras lesiones presentes en las horquillas de replicación. [0012] En un aspecto preferido, dicha enzima es la PARP. En un aspecto preferido adicional dicho agente es un inhibidor de la PARP o una molécula de ARNi específica del gen PARP. [0013] En un aspecto preferido adicional, el uso es en el tratamiento del cáncer. [0014] Preferiblemente, el medicamento es una composición farmacéutica constituida por el inhibidor de la PARP en combinación con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. [0015] La sensibilidad específica de tumores defectivos en la RH respecto de la inhibición de la PARP-1 significa que las células que se encuentran normalmente en división en el paciente no se verán afectadas por el tratamiento. El tratamiento de las células cancerosas defectivas en la RH que usan un inhibidor de la PARP tiene también la ventaja de que no necesita administrarse como una terapia de combinación junto con los tratamientos de radioterapia o quimioterapia convencionales, evitando por tanto los efectos secundarios asociados con estas formas convencionales de tratamiento. [0016] Un defecto genético en un gen que media en la recombinación homóloga puede ser debido a una mutación en, la ausencia de, o la expresión defectiva de, un gen que codifica una proteína implicada en la RH. [0017] En un aspecto adicional, la invención proporciona además el uso de un inhibidor de la PARP en la fabricación de un medicamento para inducir la apoptosis en células defectivas en la RH. [0018] En otro aspecto, la invención proporciona un procedimiento para inducir la apoptosis en células defectivas en la RH en un mamífero, cuyo procedimiento comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la PARP. [0019] Al producir la apoptosis en células defectivas en la RH debería ser posible reducir o detener el crecimiento de un tumor en el mamífero. [0020] Preferiblemente, las células defectivas en la RH son células cancerosas. [0021] Las células cancerosas defectivas en la RH pueden ser parcial o totalmente deficientes en la RH. Preferiblemente, las células cancerosas son totalmente deficientes en la RH. [0022] El término cáncer o tumor incluye cáncer de pulmón, de colon, de páncreas, gástrico, de ovarios, de cuello de útero o de próstata. El cáncer puede incluir también cáncer de piel, de riñón, de hígado, de vejiga o cerebral. En un aspecto preferido, el cáncer es en un mamífero, preferiblemente un ser humano. [0023] El cáncer que se va a tratar puede ser una forma heredada de cáncer en la que el paciente que se va a tratar tiene una predisposición familiar al cáncer. Preferiblemente, el cáncer que se va a tratar es un cáncer hereditario vinculado a genes. En una realización preferida de la invención, el cáncer es un cáncer de mama hereditario vinculado a genes. [0024] En un aspecto preferido, el inhibidor de la PARP es útil en el tratamiento de células cancerosas defectivas en la expresión de un gen implicado en la RH. Los genes con función sugerida sobre... [Seguir leyendo]

1. Uso de un inhibidor de la poli-ADP-ribosa polimerasa (PARP) en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de células cancerosas defectivas en la recombinación homóloga (RH); en el que las células cancerosas tienen un defecto en un gen seleccionado entre el grupo constituido por XRCC1, CTPS, RPA, RPA1, RPA2, RPA3, XPD, ERCC1, XPF, MMS19, RAD51, RAD51B, RAD51C, RAD51D, DMC1, XRCC2, XRCC3, BRCA1, BRCA2, RAD52, RAD54, RAD50, MRE11, NBS1, WRN, BLM, Ku70, Ku80, ATM, ATR, chk1, chk2, FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, RAD1, RAD9, FEN-1, Mus81, Emel, DDS1 y BARD. 2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 en el que el inhibidor de la PARP se selecciona entre el grupo constituido por inhibidores PARP-1, PARP-2, PARP-3, PARP-4, tanquirasa 1 tanquirasa 2. 3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2 en el que el inhibidor de la PARP es un inhibidor de la PARP-1. 4. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en el que el inhibidor de la PARP se selecciona entre el grupo constituido por bencimidazol-carboxamidas, quinazolin-4-[3H]-onas y derivados de isoquinolona. 5. Uso de acuerdo con la reivindicación 4 en el que el inhibidor de la PARP se selecciona entre el grupo constituido por 2-(4-hidroxifenil) bencimidazol-4-carboxamida, 8-hidroxi-2-metilquinazolin-4-[3H]ona, 6(5H) fenantridinona, 3-amnobenzamida, bencimidazol-4-carboxamidas e indoles de lactama tricíclica. 6. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en el que el inhibidor de la PARP es una molécula de ARNi específica de un gen PARP. 7. Uso de acuerdo con la reivindicación 6 en el que la molécula de ARNi se deriva de una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico seleccionada entre el grupo constituido por: a) una secuencia de ácido nucleico como la representada por la secuencia de la Figura 9, 10, 11, 12, 13 o 14, o uno de sus fragmentos; b) una secuencia que se hibrida con las secuencias de ácido nucleico de la Figura 9, 10, 11, 12, 13 o 14, y que codifica un gen de PARP; o c) una secuencia de ácido nucleico que comprende secuencias que están degeneradas como resultado del código genético de las secuencias de ácido nucleico definidas en (a) y (b). 8. Uso de acuerdo con la reivindicación 6 o la reivindicación 7 en el que la molécula de ARNi comprende la secuencia de ácido nucleico aaa agc cau ggu gga gua uga. 9. Uso de acuerdo con la reivindicación 6 o la reivindicación 7 en el que la molécula de ARNi está constituida por la secuencia de ácido nucleico aag acc aau cuc ucc agu uca ac. 10. Uso de acuerdo con la reivindicación 6 o la reivindicación 7 en el que la molécula de ARNi está constituida por la secuencia de ácido nucleico aag acc aac auc gag aac aac. 11. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las células cancerosas defectivas en la RH son parcialmente deficientes en la RH. 12. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en el que las células cancerosas defectivas en la RH son totalmente deficientes en la RH. 13. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el defecto es una mutación en el gen. 14. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el defecto es la ausencia del gen. 15. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el defecto está en la expresión del gen. 16. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las células cancerosas que se van a tratar se seleccionan entre el grupo constituido por células de cáncer de pulmón, colon, páncreas, ovarios, cuello de útero, mama y próstata. 13 ES 2 367 433 T3 17. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las células cancerosas están en un ser humano. 18. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las células cancerosas que se van a tratar son células de cáncer hereditario vinculado a genes. 19. Uso de acuerdo con la reivindicación 18 en el que las células cancerosas que se van a tratar son células de cáncer de mama. 20. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las células cancerosas que se van a tratar son defectivas en la expresión de BRCA1. 21. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las células cancerosas que se van a tratar son defectivas en la expresión de BDCA2. 22. Uso de acuerdo con la reivindicación 20 o 21 en el que las células cancerosas son parcialmente deficientes en la expresión de BRCA1 y/o BRCA2. 23. Uso de acuerdo con la reivindicación 20 o 21 en el que las célula cancerosas son totalmente deficientes en la expresión de BRCA1 y/o BRCA2. 24. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el gen que media en la RH es un gen supresor del tumor. 25. Uso de acuerdo con la reivindicación 24 en el que el gen supresor del tumor es BRCA1. 26. Uso de acuerdo con la reivindicación 24 en el que el gen supresor del tumor es BRCA2. 27. Un inhibidor de la poli-ADP-ribosa polimerasa (PARP) para uso en el tratamiento de células cancerosas defectivas en la recombinación homóloga (RH); en el que las células cancerosas tienen un defecto en un gen seleccionado entre el grupo constituido por XRCC1,, CTPS, RPA, RPA1, RPA2, RPA3, XPD, ERCC1, XPF, MMS19, RAD51, RAD51B, RAD51C, RAD51D, DMC1, XRCC2, XRCC3, BRCA1, BRCA2, RAD52, RAD54, RAD50, MRE11, NBS1, WRN, BLM, Ku70, Ku80, ATM, ATR, chk1, chk2, FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, RAD1, RAD9, FEN-1, Mus81, Emel, DDS1 y BARD. 28. Un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con la reivindicación 27 en el que el inhibidor de la PARP se selecciona entre el grupo constituido por inhibidores de PARP-1, PARP-2, PARP-3, PARP-4, tanquirasa 1 y tanquirasa 2. 29. Un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con la reivindicación 28 en el que el inhibidor de la PARP es un inhibidor de la PARP-1. 30. Un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 29 en el que el inhibidor de la PARP se selecciona entre el grupo constituido por bencimidazol-carboxamidas, quinazolin-4­ [3H]-onas y derivados de isoquinolona. 31. Un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con la reivindicación 30 en el que el inhibidor de la PARP se selecciona entre el grupo constituido por 2-(4-hidroxifenil) bencimidazol-4-carboxamida, 8-hidroxi-2metilquinazolin-4-[3H] ona, 6(5H) fenantridinona, 3-amnobenzamida, bencimidazol-4-carboxamidas e indoles de lactama tricíclica. 32. Un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 31 en el que las células cancerosas defectivas en la RH son parcialmente deficientes en la RH. 33. Un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 31 en el que las células cancerosas defectivas en la RH son totalmente deficientes en la RH. 34. Un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 33 en el que las células cancerosas que se van a tratar se seleccionan entre el grupo constituido por células de cáncer de pulmón, colon, páncreas, gástrico, de ovarios, de cuello de matriz, mama y próstata. 14 35. Un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 34 en el que las células cancerosas que se van a tratar son células de cáncer hereditario vinculadas a genes. 36. Un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con la reivindicación 35 en el que las células cancerosas que se van a tratar son células de cáncer de mama. ES 2 367 433 T3 37. un inhibidor de la PARP para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 36 en el que las células cancerosas que se van a tratar son defectivas en la expresión de BRCA1 o BRCA2. ES 2 367 433 T3 16 ES 2 367 433 T3 17 ES 2 367 433 T3 18 ES 2 367 433 T3 19 ES 2 367 433 T3 ES 2 367 433 T3 21 ES 2 367 433 T3 22 ES 2 367 433 T3 23 ES 2 367 433 T3 24 ES 2 367 433 T3 ES 2 367 433 T3 26 ES 2 367 433 T3 27 ES 2 367 433 T3 28 ES 2 367 433 T3 29 ES 2 367 433 T3 ES 2 367 433 T3 31 ES 2 367 433 T3 32 ES 2 367 433 T3 33 ES 2 367 433 T3 34 ES 2 367 433 T3