La presente invención se refiere a un sistema para el transporte de células.

Dicho sistema permite el transporte de células garantizando su integridad y viabilidad durante todo el proceso siendo adaptable a una gran variedad de formatos y cubriendo un amplio rango de aplicaciones. El sistema de la invención permite suministrar células listas para su utilización, con un requerimiento de manipulación y conocimientos mínimos en técnicas de biología celular. En particular la invención hace referencia a una mezcla de agarosa más agarasa que cubre o envuelve, dependiendo del formato del sistema de transporte seleccionado, el cultivo celular protegiéndolo durante el proceso de transporte, así como a la metodología de recuperación celular de las células transportadas en el sistema proporcionando un cultivo celular listo para su uso

Sistema de transporte de células.

Sector técnico de la invención

La presente invención se refiere a un sistema para el transporte celular. Dicho sistema permite el transporte de células garantizando su integridad y viabilidad durante todo el proceso siendo adaptable a una gran variedad de formatos y cubriendo un amplio rango de aplicaciones. El sistema de la invención permite suministrar células listas para su utilización, con un requerimiento de manipulación y conocimientos mínimos en técnicas de biología celular. En particular la invención hace referencia a una mezcla de agarosa más agarasa que cubre o envuelve, dependiendo del formato del sistema de transporte seleccionado, el cultivo celular protegiéndolo durante el proceso de transporte, así como a la metodología de recuperación celular de las células transportadas en el sistema proporcionando un cultivo celular listo para su uso.

Antecedentes de la invención

Existe un interés en el Estado de la Técnica en conseguir sistemas de transporte que, manteniendo la integridad y viabilidad de las células, no requieran del manejo de metodologías complicadas, tanto en su transporte como en la recuperación de las células.

Actualmente el transporte celular se lleva a cabo de dos formas distintas, transportando las células en estado crioconservadas o cultivadas.

Las células pueden ser transportadas en cultivo, adheridas o en suspensión, en frascos con medio de cultivo líquido. En esta metodología, las condiciones de transporte deben ser extremadamente cuidadosas, ya que pequeños movimientos sostenidos en el tiempo influyen de forma definitiva en la integridad y capacidad de adhesión celular y por lo tanto en su viabilidad. Este hecho provoca que la gran mayoría de los cultivos así transportados no lleguen al lugar de destino en condiciones de viabilidad apta para ser utilizadas en los distintos proyectos de investigación, entendiendo por viabilidad celular que no se produzcan alteraciones morfológicas y/o funcionales en las células.

Es por ello que un sistema de transporte de cultivos celulares efectivo debe asegurar que durante todo el proceso la integridad celular se mantenga de forma óptima (referencias 15-19), es decir, que la viabilidad de las mismas no se vea afectada durante todo el proceso.

El transporte en forma crioconservada implica el transporte de viales celulares en estado de criocongelación, lo que conlleva que el lugar de destino cuente con instalaciones y personal especializado en el cultivo celular, así como una laboriosa manipulación que incluye la amplificación y el mantenimiento celular, y la disposición de las células en los formatos requeridos para el desarrollo de las técnicas de testado.

Así, un aspecto a tener en cuenta en el transporte celular es la temperatura a la cual las células son transportadas, ya que esta temperatura afecta directamente al mantenimiento de la integridad celular, debido a que la mayoría de las líneas y tipos celulares son sensibles frente a los cambios de temperatura.

La crioconservación implica unas temperaturas de transporte muy bajas y constantes, difíciles de mantener durante todo el tiempo de transporte. Este hecho implica que el transporte tenga que darse en unas condiciones muy específicas, es decir, los viales deben de mantenerse a temperaturas inferiores a -80ºC durante todo el proceso de transporte, ya que sino la viabilidad celular se vería gravemente afectada.

La temperatura óptima de crecimiento de los cultivos animales es de 36-38ºC. Superado este rango de temperatura (condiciones de hipertermia) la viabilidad celular se ve afectada dañando la integridad de las células del cultivo, de manera irreversible y provocando la muerte celular.

Las temperaturas por debajo del rango de temperatura óptima (condiciones de hipotermia) son mejor toleradas por los cultivos celulares que las temperaturas altas. Así, en el caso de la aplicación de una temperatura inferior a la óptima recomendada, se produce una disminución en el metabolismo celular, es decir, las reacciones celulares (proliferación, metabolismos, crecimiento,...) se ralentizan pero la célula mantiene su integridad, y cuando se reestablecen las condiciones térmicas óptimas de crecimiento, las células recuperan su actividad celular. En el estado de la técnica la hipotermia es una metodología ampliamente empleada para la ralentización del crecimiento de microorganismos y células tumorales. El sistema descrito en la presente invención se vale de dicha característica de manera que las células presentan su metabolismo ralentizado durante el transporte, ayudando al mantenimiento de su integridad.

El Estado de la Técnica comprende varios sistemas para el transporte de células en cultivo. En determinados documentos, los cultivos celulares son cubiertos con medios de cultivo al 1-20% de gelatina líquida que tras su solidificación pueden ser transportados sin que las células sufran daños. Otros documentos, sin embargo, describen dispositivos específicos para el cultivo, almacenamiento y transporte de cultivos celulares.

La solicitud de patente P200301526 describe un método para el almacenamiento y el transporte de cultivos celulares bidimensionales en el cual las células son inmovilizadas sobre un soporte asimétrico, tipo transwell, el cual se cubre con una solución de gelatina a una concentración del 1 a 5% que se solidifica por enfriamiento, facilitando así que el sistema pueda ser transportado manteniendo la integridad celular del cultivo. Ya en el laboratorio de destino se incuba la placa a 37ºC durante 4 horas para que la gelatina se licue y poder retirarla del cultivo celular, así las células quedan listas para llevar a cabo los ensayos de migración oportunos. Este sistema, sin embargo, no permite el empleo del cultivo celular para otras aplicaciones que no sean ensayos en los soportes asimétricos de tipo transwell.

Así, la invención propuesta en el presente documento es adaptable a cualquier formato de cultivo celular y permite que la recuperación celular se de en un tiempo no superior a 3 horas, tiempo inferior al descrito por la solicitud de patente española (4 horas). Por otro lado, el cultivo celular recuperado del sistema de transporte de la presente invención puede ser empleado para cualquier tipo de ensayo, ya sea en el propio sistema de transporte o una vez extraído del mismo.

La patente europea EP0702081 describe un método para el almacenamiento y transporte de tejidos tridimensionales. La invención descrita en este documento, consiste en situar un cultivo tridimensional de piel fijado sobre dos tipos de esponja cubiertas por una solución de gelatina del 1-20%, preferentemente del 5-10%, de manera que cuando la solución gelifica por enfriamiento se facilita su transporte y almacenamiento. Al igual que en la solicitud de patente española mencionada anteriormente, este documento describe el método empleado para retirar la gelatina del cultivo tridimensional que consiste en aumentar la temperatura hasta un máximo de 37ºC para licuarla preservando la integridad celular del sistema. El documento, especifica que el uso de agarosa no sería adecuado para este sistema, ya que el punto de fusión de la agarosa se encuentra entorno a los 60ºC, es decir, muy por encima de la temperatura a la que las células se mantienen viables. El sistema descrito por este documento no permite la recuperación del cultivo celular para su empleo fuera del mismo.

La solicitud de patente internacional W02007/080600 describe un dispositivo desechable para el cultivo y/o almacenamiento y transporte de células adherentes viables. En dicho dispositivo las células se siembran sobre membranas, geles o sustratos microporosos sujetas al dispositivo sobre el que después se añadirá un medio que proveerá a las células con los nutrientes necesarios para mantener su crecimiento. El dispositivo se cierra de forma segura evitando pérdidas de líquido y entrada de aire al compartimento donde se cultivan las células. Una vez el dispositivo llega a su destino, se extrae y limpia la membrana, gel o sustrato sobre el que las células están sembradas y se puede proceder al transplante del mismo. Sin embargo, el documento no indica en ningún caso que las células sean separadas de la membrana sobre las que se cultivan, de manera que éstas no pueden ser empleadas de forma independiente. El dispositivo descrito por este documento además, no permite el transporte de cultivos celulares que no sean adherentes.

Así la presente invención presenta como medio...

1. Sistema de transporte celular caracterizado porque comprende un soporte celular, células de cualquier tipo y una mezcla de agarosa y agarasa, que garantiza la integridad y viabilidad celular durante el proceso de transporte.

2. Sistema de transporte celular según reivindicación 1 caracterizado porque dichas células se seleccionan del grupo de células adherentes, células semi-adherentes y células no adherentes.

3. Sistema de transporte según reivindicaciones anteriores caracterizado porque las células son de origen animal.

4. Sistema de transporte según reivindicaciones anteriores caracterizado porque las células se seleccionan entre el grupo de células humanas, murinas, caninas, bovinas y/o ovinas.

5. Sistema de transporte según reivindicaciones anteriores caracterizado porque las células se seleccionan entre el grupo de células del sistema nervioso central, células del sistema nervioso periférico, células del sistema dermo-epitelial, células del sistema osteoarticular, células progenitoras pluripotenciales de origen embrionario, células progenitoras pluripotenciales adultas, células progenitoras multipotenciales de origen embrionario, células progenitoras multipotenciales adultas, células del sistema hematopeyético, células del sistema inmunitario y/o células del sistema muscular.

6. Sistema de transporte según reivindicaciones 1-5 caracterizado porque las células se seleccionan entre el grupo de neuronas, células de la glía, células no gliales, osteoblastos, osteocitos, osteoclastos, condroblastos, condrocitos, fibroblastos, queratinocitos, melanocitos, células glandulares, células corneales, células retinianas, células madre mesenquimales, células madre hematopoyéticas, células madre embrionarias, células endoteliales, plaquetas, timocitos, linfocitos, monocitos, macrófagos, miocitos, hepatocitos, células renales, células uretrales, cardiomiocitos, mioblastos y/o células germinales.

7. Sistema de transporte según reivindicaciones 1-6 caracterizado porque las células están genéticamente modificadas.

8. Sistema de transporte según reivindicaciones 1-7 caracterizado porque las células son neuronas.

9. Sistema de transporte según reivindicaciones 1-8 caracterizado porque las células son neuronas genéticamente modificadas.

10. Sistema de transporte celular según reivindicaciones anteriores caracterizado porque las células se cultivan en forma de monocapa sobre la cual se añade la mezcla de agarosa y agarasa.

11. Sistema de transporte celular que comprende células según reivindicaciones anteriores caracterizado porque las células se cultivan en suspensión embebidas en la mezcla de agarosa y agarasa.

12. Sistema de transporte celular según reivindicaciones anteriores caracterizado porque el soporte celular presenta cualquier formato de cultivo celular.

13. Sistema de transporte celular según reivindicación 11 caracterizado porque dicho formato se selecciona del grupo que comprende placas, frascos, tubos, cámaras de cultivos y/o botellas.

14. Sistema de transporte celular según reivindicaciones 11-12 caracterizado porque la superficie del soporte opcionalmente incluye componentes de la matriz extracelular que incrementan la capacidad de adherencia de las células al soporte permitiendo el cultivo monocapa de células.

15. Sistema de transporte celular según reivindicaciones anteriores caracterizado porque la concentración de agarasa en el medio de transporte es de entre 60 y 70 Unidades por mililitro de agarosa al 1%.

16. Sistema de transporte celular según reivindicación 15 caracterizado porque la concentración de agarasa en el medio de transporte es preferentemente 60 Unidades por mililitro de agarosa al 1%.

17. Sistema de transporte según reivindicaciones anteriores caracterizado porque la agarosa empleada es agarosa de bajo punto de fusión.

18. Sistema de transporte según reivindicación 17 caracterizado porque el punto de fusión de la agarosa es próximo a los 42ºC.

19. Sistema de transporte celular según reivindicaciones anteriores caracterizado porque la concentración final de agarosa en el medio de transporte es del 0,2 a 0,6%.

20. Sistema de transporte celular según reivindicaciones anteriores caracterizado porque comprende una mezcla de agarosa de bajo punto de fusión a una concentración del 0,2 a 0,6% y agarasa a una concentración de 60 Unidades por mililitro de agarosa al 1%.

21. Sistema de transporte que comprende una mezcla de agarosa y agarasa según reivindicaciones anteriores, caracterizada porque la mezcla de agarosa y agarasa permanece en estado semi-sólido a temperaturas no superiores a 25ºC.

22. Sistema de transporte celular según reivindicaciones anteriores porque la mezcla de agarosa y agarasa permanece en estado líquido al ser digerida la agarosa por la agarasa.

23. Sistema de transporte celular según reivindicaciones anteriores caracterizado porque la mezcla de agarosa y agarasa se elimina del soporte celular dejando el cultivo celular listo para ser empleado en distintas aplicaciones.

24. Sistema de transporte celular según reivindicaciones anteriores caracterizado porque permite la extracción de las células del sistema de transporte mediante técnicas de cultivo celular básicas.

25. Sistema de transporte celular según reivindicaciones anteriores, caracterizada porque garantizando la viabilidad e integridad celular de al menos el 85% de las células cultivadas.

26. Método para el transporte de células que implica la preparación del sistema de transporte según reivindicaciones 1-24, transporte y recuperación de las células.

27. Método para el transporte de células según reivindicación 26 caracterizado porque la etapa de preparación del sistema de transporte celular comprende las siguientes etapas: