Procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina que comprende combinar compuesto de tipo equinocandina con por lo menos un antidisolvente que hace que dicho compuesto precipite, y un soporte sólido

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención comprende procedimientos para purificar compuestos de tipo equinocandina, incluyendo pneumocandina B0, WF 11899A y equinocandina B.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 5

La pneumocandina B0, WF 11899A y equinocandina B son todos miembros de la familia de equinocandinas, que presentan la estructura general:

R

R1

R2

R3

R4

R5

R6

R7

Equinocandina B

Linoleoilo

OH

OH

OH

CH3

CH3

H

H

Aculeacina A

Palmitoilo

OH

OH

OH

CH3

CH3

H

CH3

Mulundocandina

12-Metil-miristoilo

OH

OH

OH

H

H

H

CH3

Esporiofungina A

10,12-Dimetil-miristoilo

OH

OH

OH

CH2CONH2

H

H

CH3

Pneumocandina B0

10,12-Dimetill-miristoilo

OH

OH

OH

CH2CONH2

CH3

H

H

WF11899A

Palmitoilo

OH

OH

OH

CH2CONH2

CH3

OSO3H

CH3

Son productos de fermentación que se usan para preparar productos semisintéticos, tales como 10 caspofungina, micafungina y anidulafungina, respectivamente. Todos tienen actividad antifúngica.

La caspofungina es la primera de una nueva clase denominada las equinocandinas, y funciona inhibiendo la síntesis de la pared celular. La caspofungina tiene el nombre químico 1-[(4R,5S)-5-[(2-aminoetil)amino]-N2-(10,12-dimetil-1-oxotetradecil)-4-hidroxi-L-ornitina]-5-[(3R)-3-hidroxi-L-ornitina]pneumocandina B0, el Número de Registro CAS, 179463-17-3, y la siguiente estructura química (Fórmula I). 15

Fórmula I

La caspofungina se describe en la patente US nº 5.378.804. La caspofungina se comercializa en forma de su sal de diacetato en los Estados Unidos de América por Merck & Co. Inc. con el nombre comercial CANCIDAS®. CANCIDAS® se administra intravenosamente para el tratamiento de infecciones tales como Aspergillus y Candida, y para la prevención de infecciones encontradas en pacientes inmunodeficientes. 5

La anidulafungina es comercializada en los Estados Unidos de América por Pfizer con el nombre comercial Eraxis®, y se administra intravenosamente para el tratamiento de infecciones tales como Candida.

La micafungina es comercializada en forma de su sal sódica en los Estados Unidos de América por Astellas con el nombre comercial Mycamine®, y se administra intravenosamente para el tratamiento de infecciones tales como Candida. 10

Los procedimientos para la preparación de caspofungina implican el uso de pneumocandina. La pneumocandina se describe en la patente US nº 5.194.377, y presenta la siguiente estructura química:

La pneumocandina se prepara mediante reacciones de fermentación, en las que los caldos de fermentación y mixtos generalmente contienen un número de subproductos relacionados, que pueden ser difíciles de separar del 15 producto deseado. La patente US nº 6.610.822 describe la purificación de los compuestos de tipo equinocandina, tales como pneumocandina, WF 11899 y equinocandina B, llevando a cabo varios procedimientos de extracción, el primero para eliminar impurezas no polares, el segundo para eliminar impurezas polares, y después “reextrayendo” el producto, opcionalmente en combinación con purificación cromatográfica. Por tanto, la patente US nº 6.610.822 proporciona un procedimiento de purificación prolongado y que consume tiempo. 20

La patente US nº 5.021.403 describe un procedimiento de purificación de compuestos de tipo equinocandina, tales como pneumocandina, WF 1899 y equinocandina B, llevando a cabo varias cromatografías. De este modo, este procedimiento no es adecuado para la fabricación a gran escala, no es económico, y consume tiempo.

La patente US nº 6.506.726 y la patente US nº 6.590.073 describen la purificación de compuestos de tipo equinocandina, especialmente de equinocandina B desacetilada, mediante cromatografía. Las sustancias purificadas 25 son núcleos de equinocandina, que contienen por lo menos un grupo amino que se puede protonar en presencia de un ácido. De este modo, este procedimiento no es adecuado para sustancias que no tengan un grupo amina que se protona, tal como pneumocandina, WF 1899 y equinocandina B.

Existe en la técnica la necesidad de procedimientos adicionales para purificar compuestos de tipo equinocandina, usando técnicas que son factibles para uso en una escala industrial. 30

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención comprende un procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina, incluyendo pneumocandinas.

En una forma de realización, la invención comprende un procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina, que comprende combinar un compuesto de tipo equinocandina con por lo menos un antidisolvente y un 35 soporte sólido.

En otra forma de realización, la invención comprende un procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina, que comprende: (a) extraer el compuesto de tipo equinocandina de un caldo de fermentación o de un micelio filtrado obtenido a partir de un caldo de fermentación con un disolvente orgánico inmiscible con agua, para obtener un sistema bifásico que comprende una fase acuosa y una fase orgánica; (b) recuperar el compuesto de tipo 40

equinocandina; y (c) combinar el compuesto de tipo equinocandina recuperado con por lo menos un antidisolvente y un soporte sólido para obtener un compuesto de tipo equinocandina purificado.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Y REALIZACIONES PREFERIDAS

La invención comprende un procedimiento para purificar pneumocandina u otros compuestos de tipo equinocandina. Como se usa aquí, excepto que se defina de otro modo, la expresión “compuestos de tipo 5 equinocandina” se refiere a compuestos que tienen la siguiente estructura general:

en la que R es un hidrógeno o -C(O)R'; R' es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo alquinilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo que tiene unido al mismo por lo menos un grupo amino que se puede protonar en presencia de un ácido; R1 es -H o -OH; R2 es -H o -CH3; R3 es -H, CH3, -CH2CONH2 o -CH2CH2NH2; R4 es -H o -OH; R5 es -OH, -10 OPO3H2, o -OSO3H; R6 es -H o -OSO3H, y R7 es -H o -CH3.

Preferentemente, R es linoleoilo, 10,12-dimetil-miristoilo, o palmitoilo. Preferentemente, R1, R4 y R5 son OH. Preferentemente, R3 es Me, o CH2CONH2.

Preferentemente, cuando R es linoleoilo, R1, R5 y R4 son OH, R3 y R7 son Me, y R6 es H, es decir, el compuesto es equinocandina B. 15

Preferentemente, cuando R es 10,12-dimetil-miristoilo, R1, y R4 son OH, R3 es CH2CONH2, R5 es OH, y R6 es H y R7 es CH3, es decir, el compuesto es pneumocandina B0.

Preferentemente, cuando R es palmitoilo, R1, y R4 son OH, R3 es CH2CONH2, R5 es OH, R6 es OSO3H, y R7 es CH3, es decir, el compuesto es WF11899A.

Preferentemente, los compuestos de tipo equinocandina son pneumocandina B0, WF-11899 y equinocandina. 20 Estos productos no son muy solubles en disolventes convencionales, tales como ésteres, alcoholes inferiores y agua. De este modo, son difíciles de purificar mediante extracciones convencionales. Por lo tanto, los procedimientos conocidos para su purificación son habitualmente complicados e ineficaces, especialmente cuando se manipulan grandes cantidades de estos compuestos....

1. Procedimiento para purificar un compuesto de tipo equinocandina que comprende combinar compuesto de tipo equinocandina con por lo menos un antidisolvente que hace que dicho compuesto precipite, y un soporte sólido.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el compuesto de tipo equinocandina de partida se obtiene a partir de extracciones del caldo de fermentación.

3. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para purificar un compuesto de tipo 5 equinocandina, que comprende:

(a) extraer el compuesto de tipo equinocandina de un caldo de fermentación o de un micelio filtrado obtenido a partir de un caldo de fermentación con un disolvente orgánico inmiscible con agua, para obtener un sistema bifásico que comprende una fase acuosa y una fase orgánica, o para obtener una fase orgánica que contiene agua; 10

(b) recuperar el compuesto de tipo equinocandina; y

(c) combinar el compuesto de tipo equinocandina recuperado con por lo menos un antidisolvente y un soporte sólido para obtener un compuesto de tipo equinocandina purificado.

4. Procedimiento según la reivindicación 3, en el que el disolvente orgánico inmiscible con agua en la etapa (a) es un alcohol inmiscible con agua, preferentemente el alcohol inmiscible con agua es un alcohol de C4-6, más 15 preferentemente isobutanol o n-butanol.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 4, en el que la extracción en la etapa (a) se lleva a cabo a un pH de aproximadamente 2 a aproximadamente 8.

6. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que el pH es de aproximadamente 5 a aproximadamente 7.

7. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que el pH es de aproximadamente 2 a aproximadamente 4, 20 y la extracción se lleva a cabo mientras se enfría hasta una temperatura menor que aproximadamente 10ºC, preferentemente aproximadamente 0ºC a aproximadamente 10ºC.

8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7, en el que se repite la etapa (a) de extracción.

9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8, que comprende además una etapa de 25 lavado del compuesto de tipo equinocandina recuperado, antes de combinar el compuesto de tipo equinocandina recuperado con un antidisolvente y un soporte sólido en la etapa c).

10. Procedimiento según la reivindicación 9, en el que la etapa de lavado comprende combinar con agua el compuesto de tipo equinocandina recuperado.

11. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que la etapa de lavado comprende dos etapas, una que 30 usa agua que tiene un pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 6,5, y una segunda, que usa agua que tiene un pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 6,5.

12. Procedimiento según la reivindicación 11, en el que el primer lavado se efectúa con agua que tiene un pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 4,5, y el segundo lavado se efectúa con agua que tiene un pH de aproximadamente 6 a aproximadamente 6,5. 35

13. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en el que el lavado elimina aproximadamente 20 a aproximadamente 50% en peso de residuos sólidos que se originan del caldo de fermentación.

14. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 13, que comprende además una etapa de tratar con carbón activo el compuesto de tipo equinocandina recuperado antes de combinar el compuesto de tipo equinocandina recuperado con un antidisolvente y un soporte sólido como en la etapa c). 40

15. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además la etapa de cristalizar el compuesto de tipo equinocandina, que comprende combinarlo con por lo menos un antidisolvente y un soporte sólido para obtener un compuesto de tipo equinocandina purificado.

16. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el soporte sólido se selecciona de entre el grupo constituido por carbón activo, tierra de diatomeas, harina de trigo, almidón de maíz, almidón 45 de patata, bentonita, perlita, avicel, perlita hidrófoba, harinas de lignita activa, carbonos, y productos celulósicos.

17. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el antidisolvente se selecciona de entre el grupo constituido por acetato de etilo, acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, acetato de terc-

butilo, acetato de isopropilo, acetona, acetonitrilo (ACN), mezclas de acetonitrilo con acetato de etilo y mezclas de acetonitrilo (ACN) con acetato de isobutilo.

18. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la recuperación del compuesto de tipo equinocandina comprende filtrar la mezcla del compuesto de tipo equinocandina, el soporte sólido y el antidisolvente y suspender el soporte sólido filtrado, al cual está absorbido el compuesto de tipo equinocandina, en un 5 disolvente seleccionado de entre el grupo constituido por acetonitrilo, acetona o una mezcla de dos disolventes orgánicos.

19. Procedimiento según la reivindicación 18, en el que la mezcla de dos disolventes orgánicos comprende un primer disolvente seleccionado de entre el grupo constituido por acetato de isobutilo, acetato de isopropilo, acetato de etilo, octano, y un segundo disolvente seleccionado de entre el grupo constituido por acetonitrilo o acetona. 10

20. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el compuesto de tipo equinocandina se separa del soporte sólido, que comprende la etapa de combinar el soporte sólido, al cual está absorbido el compuesto de equinocandina, con un disolvente en el que el compuesto de tipo equinocandina es soluble.

21. Procedimiento según la reivindicación 20, en el que el disolvente en el que el compuesto de tipo equinocandina es soluble se selecciona de entre el grupo constituido por metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-15 butanol, isobutanol, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), una mezcla de los mismos, y una mezcla de los mismos en agua.

22. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además la etapa de convertir el compuesto de tipo equinocandina purificado en caspofungina, anidulafungina o micafungina.

23. Uso de un procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la preparación de una 20 equinocandina antifúngica.

24. Uso según la reivindicación 23, en el que la equinocandina antifúngica es caspofungina, micafungina y anidulafungina.