PHEP, UNA PERMEASA DE AMINOÁCIDO DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS.

Phep, una permeasa de aminoácido de staphylococcus aureus La invención se refiere a polipéptidos antigénicos expresados por microbios patogénicos, a vacunas que comprenden los polipéptidos antigénicos y a anticuerpos terapéuticos dirigidos a los polipéptidos antigénicos. Los organismos microbianos causan una serie de enfermedades mortales y debilitantes que afectan a muchos millones de personas de todo el mundo. Los procedimientos actuales para controlar los organismos microbianos incluyen el uso de agentes microbianos (antibióticos) y desinfectantes. Se ha demostrado que éstos son problemáticos, ya que la exposición a estos agentes introduce una presión de selección significativa que tiene como resultado la creación de microbios resistentes que pueden evitar los efectos del (los) agentes antimicrobianos. Por ejemplo, se ha descubierto que los organismos microbianos se han convertido en resistentes a triclosán, un agente añadido a muchos desinfectantes usados en ambientes domésticos e industriales. Un problema mayor problema argumentable es la revolución de las cepas resistentes a antibióticos de una serie de microbios patogénicos significativos. Un ejemplo de un organismo patogénico que ha desarrollado resistencia a antibióticos es Staphylococcus aureus. S.aureus es una bacteria cuyo hábitat normal es el revestimiento epitelial de la nariz en aproximadamente el 20-40 % de las personas sanas normales y también se suele encontrar en la piel de las personas, normalmente si causar daños. No obstante, en ciertas circunstancias, en particular cuando existen daños en la piel, este germen puede causar infección. Este es un problema concreto en hospitales, donde los pacientes pueden estar sometidos a procedimientos quirúrgicos y/o estar tomando fármacos inmunosupresores. Estos pacientes son mucho más vulnerables a la infección por S.aureus por el tratamiento que han recibido. En los últimos años han aparecido cepas resistentes de S.aureus. Las cepas resistentes a meticilina son prevalentes y muchas de estas cepas resistentes también son resistentes a varios otros antibióticos. En la actualidad no existe un procedimiento de vacunación eficaz para S.aureus. En EE.UU., las infecciones por S.aureus son la causa del 13 % de los dos millones de infecciones hospitalarias anuales. Esto representa 260.000 personas con una infección por S.aureus, de las cuales 60-80.000 mueren. Por tanto, S.aureus es un patógeno humano fundamental capaz de causar una amplia gama de enfermedades potencialmente mortales, incluidas septicemia, endocarditis, artritis y shock séptico. Esta capacidad viene determinada por la versatilidad del organismo y su arsenal de componentes implicados en la virulencia. La patogenicidad es multifactorial y ni un componente se ha demostrado responsable de una infección concreta, véase Projan, S.J. & Novick, R.P. (1997) en The Staphylococci in Human Disease (Crossley, K.B. & Archer, G.L., eds.) pp.55-81. Al principio de la infección y a medida que progresa, las necesidades y el entorno del organismo cambian y esto se traduce en una correspondiente alteración en los determinantes de virulencia que produce S. aureus. Al principio de la infección es importante que el patógeno se adhiera a los tejidos huésped y, por tanto, se forma un gran repertorio de proteínas de fijación asociadas con la superficie celular. Estas incluyen proteínas de unión a colágeno, fibrinógeno y fibronectina. El patógeno también tiene la capacidad de evadir las defensas de huésped mediante la producción de factores que reducen la fagocitosis o interfieren en la capacidad de las células para ser reconocidas por los anticuerpos en circulación. A menudo se desarrolla un foco de infección y un absceso, y aumenta el número de organismos. S. aureus tiene la capacidad de controlar su propia densidad celular mediante la producción de un quórum del péptido de sensibilización. La acumulación del péptido, asociada con cambios fisiológicos producidos mediante el comienzo de la inanición de las células, provoca un cambio en la producción del determinante de virulencia desde las adhesinas a los componentes implicados en la invasión y la penetración en el tejido. Estas incluyen un amplio abanico de hemolisinas, proteasas y otras enzimas de degradación. Durante el procedimiento de cualquier infección, los determinantes de virulencia producidos por S. aureus se producen en respuesta a estímulos ambientales y fisiológicos. Estos estímulos dependerán del nicho dentro del cuerpo y cambiarán a medida que la infección progrese. Se conoce poco de las condiciones in vivo y es probable que algunos componentes se produzcan únicamente en este ambiente. Por tanto, estos son posibles componentes de vacunas que no se descubrieron en las técnicas previas. Muchas vacunas se producen con patógenos inactivados o atenuados que se inyectan en un individuo. El individuo inmunizado responde produciendo una respuesta humoral (anticuerpos) y celular (linfocitos T citolíticos, CTL). Por ejemplo, las vacunas para la hepatitis se fabrican inactivando el virus con calor y tratándolo con un agente de reticulación tal como formaldehído. Un ejemplo de un patógeno atenuado útil como vacuna está representado por las vacunas contra la polio, que se producen atenuando un patógeno vivo. No obstante, el uso de organismos atenuados en vacunas para ciertas enfermedades es problemático debido a la ausencia de conocimientos sobre la patología de la afección y la naturaleza de la atenuación. Para ciertos agentes virales, esto es un problema concreto ya que los virus, en concreto los retrovirus, tienen un ciclo de replicación sensible a error que tiene como resultado mutaciones viables en los genes que comprenden el virus. Esto puede dar 2   como resultado alteraciones de los determinantes antigénicos previamente usados como vacunas. El desarrollo de las denominadas vacunas de subunidad (vacunas en las que el inmunógeno es un fragmento o subunidad de una proteína o complejo expresado por un organismo patogénico concreto) ha sido el centro de considerables investigaciones médicas. La necesidad de identificar moléculas candidatas útiles en el desarrollo de vacunas de subunidad es evidente, no menos porque recientemente el desarrollo de resistencia a antibióticos ha obstaculizado los abordajes quimioterapéuticos para controlar los organismos patogénicos La invención se refiere a polipéptidos antigénicos de permeasa de fenilalanina (PheP) que se expresan durante una infección por un microbio patogénico y su uso en la vacunación. El documento US 2003/054436 A1 divulga polipéptidos de permeasa y su uso en vacunas. Un polipéptido antigénico codificado por una secuencia de ácido nucleico aislada seleccionada del grupo que consiste en: i) una secuencia de ácido nucleico como se muestra en la SEC ID Nº 9 de la Figura 1 o la SEC ID Nº 15 de la Figura 9; ii) una secuencia de ácido nucleico como se indica en (i) que codifica un polipéptido expresado por Staphylococcus aureus; iii) una secuencia de ácido nucleico que hibrida en condiciones de hibridación rigurosas y que es estable tras lavar en 0,1 x SSC, 0,1 % de SDS a 60 ºC con la secuencia identificada en los puntos (i) o (ii) anteriores; y iv) una secuencia de ácido nucleico que es degenerada como resultado del código genético de la una secuencia de ácido nucleico definida en (i), (ii) o (iii) para uso como medicamento. En una realización preferida de la invención, el medicamento es una vacuna. El ácido nucleico que codifica el polipéptido antigénico del primer aspecto de la invención puede hibridar en condiciones de hibridación rigurosas con la secuencia de ácido nucleico mostrada en la Figura 1 o la Figura 2 o con su hebra complementaria. Las condiciones de hibridación/lavado rigurosas son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, los híbridos de ácido nucleico que son estables después de lavar en 0,1 x SSC, 0,1 % de SDS a 60 ºC. En la técnica se sabe bien que las condiciones de hibridación óptimas se pueden calcular si se conocen las secuencias del ácido nucleico. Por ejemplo, las condiciones de hibridación se pueden determinar con el contenido de GC del ácido nucleico objeto de hibridación. Véase Sambrook y col. (1989) Molecular Cloning; A Laboratory Approach. Una fórmula habitual para calcular las condiciones rigurosas requeridas para conseguir la hibridación entre las moléculas de ácido nucleico de una homología especificada es: Tm= 81,5 ºC + 16,6 Log [Na + ] + 0,41 [% G+ C]-0,63 (% formamida). El ácido nucleico que codifica el polipéptido antigénico del primer aspecto de la invención puede comprender la secuencia expuesta en la Figura 1 o 2 o una secuencia que es al menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, por ejemplo 98% o 99%, idéntica a la secuencia de ácido nucleico indicada en la Figura 1 o 2 a nivel... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido antigénico codificado por una secuencia de ácido nucleico aislada seleccionada del grupo que consiste en: i) una secuencia de ácido nucleico como se muestra en la SEC ID Nº 9 de la Figura 1 o la SEC ID Nº 15 de la Figura 9; ii) una secuencia de ácido nucleico como se indica en (i) que codifica un polipéptido expresado por Staphylococcus aureus; iii) una secuencia de ácido nucleico que hibrida en condiciones de hibridación rigurosas y que es estable tras lavar en 0,1 x SSC, 0,1 % de SDS a 60 ºC con la secuencia identificada en los puntos (i) o (ii) anteriores; y iv) una secuencia de ácido nucleico que es degenerada como resultado del código genético de la una secuencia de ácido nucleico definida en (i), (ii) o (iii) para uso como medicamento. 2. Un polipéptido antigénico de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el medicamento es una vacuna. 3. Un polipéptido antigénico de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el polipéptido tiene actividad como permeasa. 4. Un polipéptido antigénico de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el polipéptido tiene actividad como permeasa de fenilalanina. 5. Un polipéptido antigénico de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el polipéptido es expresado por Staphylococcus aureus. 6. Un polipéptido antigénico de acuerdo con la reivindicación 1, en el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº 10 de la Figura 1 o la SEC ID Nº 16 de la Figura 3. 7. Una vacuna que comprende al menos un polipéptido antigénico de acuerdo con la reivindicación 1. 8. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 7, en la que la vacuna comprende un vehículo y/o adyuvante. 9. Uso de un polipéptido antigénico de acuerdo con la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un trastorno asociado con Staphylococcus aureus. 10. Uso de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el trastorno asociado con Staphylococcus aureus incluye septicemia, tuberculosis, bacterias asociadas con intoxicación alimentaria, peritonitis; endocarditis, osteomielitis; sepsis, trastornos cutáneos, meningitis; neumonía; úlceras de estómago, gonorrea, estreptococos en la garganta, shock séptico asociado con estreptococos, fascitis necrotizantes, impétigo, histoplasmosis, enfermedad de Lyme; gastroenteritis, disentería y shigelosis. 8   9     11   12   13