Un péptido aislado de un tamaño de 100 aminoácidos o menos que comprende una secuencia dirigida al tejido adiposo seleccionada de las secuencias SEQ ID NO: 47 a la SEQ ID NO: 55

CONTEXTO DE LA INVENCIÓN

Esta solicitud reivindica prioridad de la Solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos Nº 60/231,266 presentada el 8 de septiembre del 2000 y de la Solicitud de Patente de Estados Unidos Nº 09/765,101 presentada el 17 de enero del 2001. Esta invención se ha hecho con el apoyo gubernamental bajo las concesiones DAMD 17-98-1-8041 y 17-98-1-8581 del Ejército de Estados Unidos y concesiones 1R01CA78512-01A1, 1R1CA90810-01 y 1R01CA82976-01 del Instituto Nacional de Salud. El gobierno posee ciertos derechos sobre esta invención.

1. Campo de la Invención La presente invención hace referencia a los campos de medicina molecular y envío dirigido de agentes terapéuticos. Más en concreto, la presente invención hace referencia a composiciones y métodos para la identificación y uso de péptidos que de manera selectiva se dirigen a tejidos de órganos o tipos de células in vivo o in vitro; Descripción de la Técnica Relacionada

El tratamiento terapéutico de muchos estados enfermos está limitado por la toxicidad sistémica de los agentes terapéuticos empleados. En particular, los agentes terapéuticos del cáncer muestran un índice terapéutico muy bajo, con tejidos normales que crecen rápidamente como la piel o la médula ósea afectada en concentraciones de agente que no son mucho más granes que las concentraciones usadas para matar células tumorales. El tratamiento de cáncer y de otros tipos de enfermedades restringidos a órganos, tejidos o tipos de células se facilitaría en gran medida mediante el desarrollo de composiciones y métodos para un envío de un agente terapéutico dirigido a un órgano, tejido o tipo de célula deseado.

Recientemente, se ha desarrollado un sistema de selección in vivo que usa bibliotecas de expresión en fagos para identificar el tipo de órgano, tejido o célula al que se dirigen los péptidos en un sistema con modelo de ratón. Las bibliotecas de expresión en fagos que expresan péptidos transgénicos sobre la superficie del bacteriófago se desarrollaron inicialmente para trazar los puntos de enlace del epítopo de inmunoglobulinas (Smith y Scott, 1986, 1993). Dichas bibliotecas pueden generarse insertando oligonucleótidos al azar en cADNs que codifican una proteína con superficie de fago, generando colecciones de partículas de fago que demuestran péptidos únicos en 109 permutaciones. (Pasqualini y Ruoslahti, 1996, Arap et al., 1998a; Arap et al., 1998b).

La administración intravenosa de bibliotecas de expresión en fagos fue seguida de la recuperación de fagos de órganos individuales (Pasqualini y Ruoslahti, 1996). Se recuperaron los fagos que fueron capaces de alojarse de manera selectiva en las camas vasculares de diferentes tipos de órganos, tejidos y células de ratones, en base a las secuencias específicas de dirección de péptidos expresadas sobre la superficie externa de los fagos (Pasqualini y Ruoslahti, 1996). Mediante este método (Rajotte et al., 1998, 1999; Koivunen et al., 1999; Burg et al., 1999; Pasqualini, 1999) se han identificado una variedad de péptidos buscadores de órganos y tumores. Cada uno de estos péptidos guías se unió a diferentes receptores que se expresaron de manera selectiva sobre la vasculatura del tejido objetivo del ratón (Pasqualini, 1999; Pasqualini et al., 2000; Folkman, 1995; Folkman 1997). Los péptidos buscadores de tumores se unieron a receptores que se regularon de manera ascendente en la vasculatura angiogénica tumoral de los ratones ((Brooks et al., 1994; Pasqualini et al., 2000). Además de identificar péptidos guiados individuales selectivos de un tipo de órgano, tejido o célula ((Pasqualini y Ruoslahti, 1996; Arap et al, 1998a; Koivunen et al., 1999), este sistema se ha empleado para identificar marcadores de superficie celular endotelial que se expresan en ratones in vivo (Rajotte y Ruoslahti, 1999).

La unión de agentes terapéuticos con péptidos dirigentes dio como resultado el envío selectivo del agente al tipo de órgano, tejido

o célula deseado en el sistema con modelo de ratón. El envío dirigido de agentes quimioterapéuticos y péptidos proapoptóticos a receptores localizados en vasculatura angiogénica tumoral dio como resultado un incremento notable en la eficacia terapéutica y un descenso en la toxicidad sistémica en modelos de ratones con tumor (Arap et al., 1998a, 1998b; Ellerby et al., 1999).

Bajo el Número de Acceso Uniprot Q9R1H5 se describe un gen receptor de insulina de rata que consiste en 32 aminoácidos.

En algunos casos, métodos previos in vivo para selección de expresión de fagos resultaron en antecedentes relativamente altos de enlace de fago no específico. Esto fue particularmente cierto para tejidos que pertenecían al sistema reticuloendotelial.

También existe una necesidad de receptores objetivos para poblaciones celulares específicas en un tipo de órgano, tejido o célula. En muchos casos, los tejidos u órganos pueden contener poblaciones heterólogas de diferentes tipos de células.

Existe una necesidad de identificar parejas ligando-receptor en órganos y tejidos. Intentos anteriores por identificar receptores guiados y ligandos unidos a receptores han captado un único ligando en el momento de la investigación. La identificación de receptores previamente desconocidos y ligando previamente no caracterizados ha sido un proceso muy lento y laborioso. Estos nuevos receptores y ligandos pueden proporcionar la base para nuevas terapias para una variedad de enfermedades, como diabetes mellitus, enfermedades inflamatorias, artritis, aterosclerosis, cáncer, enfermedad autoinmune, infección bacteriana, infección viral, enfermedad cardiovascular y enfermedad degenerativa. RESUMEN DE LA INVENCION

La presente invención ofrece un método de envío dirigido a tejido adiposo que consiste en la administración del péptido de SEQ ID NO: 47-55 o fragmentos del mismo unidos a un agente a un sujeto.

En la presente invención se han identificado péptidos dirigidos a tejido adiposo.

En una realización, un péptido aislado de 100 aminoácidos o menos en tamaño consiste en secuencia dirigida a tejido adiposo seleccionado de SEQ ID NO: 47 a SEQ ID NO: 55.

En otra realización este péptido es 50 aminoácidos o menos en tamaño.

En otra realización este péptido es 25 aminoácidos o menos en tamaño.

En otra realización este péptido es 10 aminoácidos o menos en tamaño.

En otra realización este péptido es 7 aminoácidos o menos en tamaño.

En otra realización este péptido está unido a una molécula.

En otra realización esta molécula es un fármaco, un agente quimioterapéutico, un radioisótopo, un agente pro-apoptosis, un agente antiangiogénico, una hormona, una citoquina, un factor de crecimiento, un agente citotóxico, un péptido, una proteína, un antibiótico, un fragmento Fab de un anticuerpo, un agente visualizador, un factor de supervivencia, un agente anti-apoptótico, un antagonista de hormona o un antígeno.

En otra realización, dicho agente pro-apoptosis es gramicidina, magainina, mellitina, defensina, cecropina, (KLAKLAK) 2, (SEQ ID NO: 1), (KLAKKLA)2 (SEQ ID NO: 2), (KAAKKAA)2 (SEQ ID NO: 3) o (KLGKKLG)3 (SEQ ID NO: 4).

En otra realización este péptido se une a un complejo macromolecular.

En otra realización este complejo es un virus, un bacteriófago, una bacteria, un liposoma, una micropartícula, una gota magnética, una célula de levadura, una célula de mamífero o una célula.

En otra realización este péptido se une a un vector de expresión eucariótica.

En otra realización este vector es un vector de terapia genética.

En otra realización, un anticuerpo se enlaza de manera selectiva con un péptido aislado, consistiendo el péptido en una secuencia dirigida al tejido adiposo seleccionada de las secuencias SEQ ID NO: 47 a SEQ ID NO: 55.

En otra realización, el vector expresa una secuencia de péptido diana como parte de una proteína superficial, consistiendo el péptido diana en una secuencia dirigida al tejido adiposo seleccionada de las secuencias SEQ ID NO: 47 a SEQ ID NO: 55.

En otra realización, se usa un agente en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad, donde el agente se une a un péptido de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 5 para formar un complejo...

1ª. – Un péptido aislado de un tamaño de 100 aminoácidos o menos que comprende una secuencia dirigida al tejido adiposo seleccionada de las secuencias SEQ ID NO: 47 a la SEQ ID NO: 55.

2ª. – El péptido aislado de la reivindicación 1, donde dicho péptido tiene un tamaño de 50 aminoácidos o menos.

3ª. – El péptido aislado de la reivindicación 1, donde dicho péptido tiene un tamaño de 25 aminoácidos o menos.

4ª. – El péptido aislado de la reivindicación 1, donde dicho péptido tiene un tamaño de 10 aminoácidos o menos.

5ª. – El péptido aislado de la reivindicación 1, donde dicho péptido tiene un tamaño de 7 aminoácidos o menos.

6ª. – El péptido aislado de las reivindicaciones 1 a 5, donde dicho péptido se une a una molécula.

7ª. – El péptido aislado de la reivindicación 6, donde dicha molécula es un fármaco, un agente quimioterapéutico, un radioisótopo, un agente pro-apoptosis, un agente antiangiogénico, una hormona, una citoquina, un factor de crecimiento, un agente citotóxico, un péptido, una proteína, un antibiótico, un anticuerpo, un fragmento Fab de un anticuerpo, un agente visualizador, un factor de supervivencia, un agente anti-apoptótico, un antagonista de hormona

o un antígeno.

8ª. – El péptido aislado de la reivindicación 7, donde dicho agente pro-apoptosis es gramicidina, magainina, mellitina, defensina, cecropina, (KLAKLAK)2, (SEQ ID NO: 1), (KLAKKLA)2 (SEQ ID NO: 2), (KAAKKAA)2 (SEQ ID NO: 3) o (KLGKKLG)3 (SEQ ID NO: 4).

9ª. – El péptido aislado de las reivindicaciones 1 a 5, donde dicho péptido se une a un complejo macromolecular.

10ª. – El péptido aislado de la reivindicación 9, donde dicho complejo es un virus, un bacteriófago, una bacteria, un liposoma, una micropartícula, una gota magnética, una célula de levadura, una célula de mamífero o una célula.

11ª. -El péptido aislado de la reivindicación 9, donde dicho péptido se une a un vector de expresión eucariótica. 12ª. – El péptido aislado de la reivindicación 11, donde dicho

vector es un vector de terapia genética.

13ª. – Un anticuerpo que se enlaza de manera selectiva con un péptido aislado, consistiendo el péptido en una secuencia dirigida al tejido adiposo seleccionada de las secuencias SEQ ID NO: 47 a

5 SEQ ID NO: 55.

14ª. – Un vector de terapia genética, donde el vector expresa una secuencia de péptido diana como parte de una proteína superficial, consistiendo el péptido diana en una secuencia dirigida al tejido adiposo seleccionada de las secuencias SEQ ID NO: 47 a

10 SEQ ID NO: 55. 15ª. Uso de un agente en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad, donde el agente se une a un péptido de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 5 para formar un complejo para focalizar el envío hacia el tejido

15 adiposo. 16ª. – Uso de acuerdo con la reivindicación 15 donde el agente es un agente visualizador, un fármaco, un agente quimioterapéutico, un radioisótopo, un agente pro-apoptosis, un agente antiangiogénico, una enzima, una hormona, una citoquina, un factor de crecimiento,

20 un agente citotóxico, un péptido, una proteína, un antibiótico, un anticuerpo, un fragmento Fab de un anticuerpo, un antígeno, un factor de supervivencia, un agente anti-apoptótico, un antagonista de hormona, un virus, un bacteriófago, una bacteria, un liposoma, una micropartícula, una gota magnética, un microdispositivo, una célula

25 de levadura, una célula de mamífero, una célula o un vector de expresión. 17ª. – Uso de acuerdo con la reivindicación 16, donde dicho agente pro-apoptosis es gramicidina, magainina, mellitina, defensina, cecropina, (KLAKLAK)2, (SEQ ID NO: 1), (KLAKKLA)2 (SEQ ID NO:

30 2), (KAAKKAA)2 (SEQ ID NO: 3) o (KLGKKLG)3 (SEQ ID NO: 4).

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