NUEVOS MEDIOS Y MÉTODOS PARA EL TRATAMIENTO DE LA PÉRDIDA DE LA AUDICIÓN Y LA ESCUCHA DE SONIDOS.

Una composición farmacéutica que comprende (a) Una siARN que enlaza específicamente un ácido nucleico que codifica una proteína NOX3,

en donde dicha proteína NOX3 (i) incluye o consiste de la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID Nos: 1, 3 ó 5, o (ii) es codificada por un ácido nucleico que incluye o consiste de la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nos: 2, 4, 6, 23 ó 24, o (iii) es un fragmento de la proteína NOX3 de acuerdo con (i) o (ii) y exhibe actividad de NADPH oxidasa, o (iv) tiene una secuencia al menos 75% idéntica con la proteína NOX3 de acuerdo con (i) o (ii) o con el fragmento de acuerdo con (iii) y exhibe actividad de NADPH oxidasa; y (b) un agente ototóxico seleccionado del grupo que consiste de salicilatos, antiinflamatorios no esteroideos, antibióticos, diuréticos, citostáticos, derivados de quinina y fármacos gastroprotectores

de

La discapacidad auditiva es una deficiencia sensorial severa y muy generalizada. Es la tercera discapacidad crónica más prevaleciente en el grupo de las personas con edad por encima de los 65, pero también se encuentra en personas más jóvenes. Un poco más del 1 por ciento de la gente por debajo de los 17 años tiene problemas auditivos, la prevalencia alcanza el 12 por ciento entre los 45 y los 64 años, hasta un 24 por ciento entre los 65 y los 74 años, y hasta un 39 por ciento para edades superiores a los 75 años. Existen tres causas principales de pérdida de la audición: pérdida de la audición causada por ruido, pérdida de la audición relacionada con medicamentos y pérdida de la audición relacionada con la edad. De manera muy interesante, parece existir un mecanismo común para estas tres causas principales de pérdida de la audición, a saber, destrucción del epitelio sensorial y especies oxigenadas reactivas a través de las neuronas cocleares. En términos de tratamiento, no existen hasta el momento tratamientos eficientes con fármacos o profilaxis para la pérdida de la audición y la única opción actualmente es el uso de audífonos. Esta situación se agrava más por la limitada comprensión del proceso molecular involucrado en la pérdida de la audición y la escasez de objetivos moleculares adecuados para intervención terapéutica.

El oído interno es una estructura altamente compleja involucrada en la audición y el equilibrio. La conversión de sonido en señales eléctricas se presenta dentro de la cóclea, en el órgano de Corti, y las señales eléctricas son conducidas por medio de los axones de las neuronas ganglionares en espiral hasta el cerebro. El movimiento lineal de la cabeza es detectado por los órganos otolitos (utrículo y sáculo) y los movimientos giratorios por las ámpulas de los canales semicirculares. Las señales generadas en el sistema vestibular son trasmitidas por las neuronas del ganglio vestibular al sistema nervioso central.

La discapacidad auditiva debida a la pérdida de la función coclear se presenta muy frecuentemente, si no es que invariablemente en el transcurso de la vida. El ruido y los compuestos químicos ototóxicos pueden conducir a una pérdida rápida y precoz de la audición, mientras que la edad conduce por si misma a una pérdida crónica más insidiosa de la audición. La investigación durante las últimas décadas ha identificado especies reactivas de oxígeno (ROS1) como el factor principal que media en la pérdida de la audición [1]. ROS se genera dentro de la cóclea después de una exposición a fármacos ototóxicos (por ejemplo cisplatina [2, 3], antibióticos aminoglicósidos [3])

o a ruido [4]. Las señales de estrés oxidativo, tales como daño del ADN y peroxidación de lípidos, han sido documentadas in vivo en respuesta a aquellos retos [5, 6], así como en el envejecimiento coclear [7]. El sistema vestibular también se daña por fármacos ototóxicos [8, 9] en un proceso que incluye la producción excesiva de una ROS [10, 11].

2 1Las abreviaturas utilizadas son: bp, pares de bases; DPI, difenilén yodonio; DUOX, dominio doble de oxidasa; 5-FU, 5-Fluorouracilo; GAPDH, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa; gp91phox , subunidad de glicoproteína de 91 kDa de la fagocito NADPH oxidasa; NOX, NADPH oxidasa; NOXA1, activador NOX 1; NOXO1, organizador NOX 1; PMA, forbol 12-miristato 13-acetato; PCR, reacción en cadena de la polimerasa; ROS, especie reactiva de oxígeno; RT-PCR, PCR de transcripción inversa; SOD, superóxido dismutasa. Aunque el papel del estrés oxidativo en el daño del oído interno está bien establecido, su fuentes poco conocida. Se ha sugerido el papel de generación no enzimática de una ROS por compuestos ototóxicos [12]. La posibilidad de poder localizar una enzima para generación de superóxido dentro del oído interno, y que por lo tanto cuente para el daño oxidativo de este órgano, ha recibido poca atención. Durante la última década, se ha probado que la expresión de NADPH oxidasas que generan superóxido no está restringida a fagocitos. Además de la subunidad catalítica bien conocida del fagocito NADPH oxidasa, gp91phox/NOX2 (para revisión ver [13]), se han identificado otras seis enzimas productoras de superóxido en mamíferos [14, 15]. Para la mayoría de enzimas NOX y DUOX, se ha descrito la localización predominante en el tejido, por ejemplo epitelio de colon para NOX1 [16, 17], corteza de riñón para NOX4 [18], órganos linfoideos y testículos para NOX5 [19], y la glándula tiroides para DUOX1 y DUOX2 [20, 21]. Para NOX3, con la excepción de algún nivel muy bajo de expresión en el riñón embrionario [22], no se ha encontrado una localización convincente en el tejido hasta ahora. Nuestro conocimiento de los mecanismos de activación de miembros de la familia NOX/DUOX varía considerablemente entre enzimas individuales. NOX1 y gp91phox/NOX2 son enzimas que dependen de una subunidad que requieren de un ensamblaje con una subunidad activadora (NOXA1 y p67phox, respectivamente) y una subunidad organizadora (NOXO1 y p47phox , respectivamente) para generar superóxido [23-26]. NOX5, DUOX1 y DUOX2, por otro lado, tienen motivos de enlazamiento de Ca2+ N terminal (dominios de mano EF), y hasta el momento uno de ellos, NOX5, se ha demostrado que se activa por una mayor concentración de Ca2+ [27]. El mecanismo de activación de NOX4 es menos claro. Hay indicios de que podría ser una enzima constitutivamente activa [18]. Tinnitus, también conocido como escucha de sonidos inexistentes, es una queja médica común y en algunos casos incapacitante. Actualmente, la patofisiología de la enfermedad es poco conocida y no se ha probado un tratamiento disponible de la causa. Existe sin embargo evidencia de que especies reactivas de oxígeno puedn jugar un papel en la patofisiología del tinnitus (Neri S. Tinnitus and oxidative stress in a selected series of elderly patients. Arch Gerontol Geriatr. 2002; 35 Suppl: 219 -23) y existen al menos algunos reportes que sugieren un efecto benéfico de medicamentos antioxidantes tales como el extracto de Gingko en el curso de la enfermedad (por ejemplo, Schneider D y colaboradores. Gingko biloba (Rokan) therapy in tinnitus patients and measurable interactions between tinnitus and vestibular disturbances. Int Tinnitus J. 2000; 6(1): 56 62). Por lo tanto, NOX3 puede estar involucrado también en la patofisiología de tinnitus y el uso de un modulador o inhibidor de NOX3 es un interesante concepto nuevo para el tratamiento de tinnitus. US-A1 20040001818 y WO-A1 0230453 describen métodos para inhibir angiogénesis, migración de células endoteliales o proliferación de células endoteliales utilizando inhibidores de NADPH oxidasa. EP-A2 1410798 describe una composición farmacéutica que incluye y utiliza inhibidores de la producción o la liberación de metabolitos reactivos de oxígeno (ROM) y de compuestos efectivos

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para depurar los ROM. Los usos están dirigidos a la fabricación de un medicamento para el tratamiento del Síndrome de Dificultad Respiratoria en Adultos (ARDS), isquemia o reperfusión, enfermedad infecciosa, enfermedades autoinmunes o inflamatorias, y enfermedades neurodegenerativas. Los compuestos efectivos para inhibir la producción o liberación enzimática de ROM incluyen inhibidores de NADPH oxidasa.

EP-A2 0914821 se relaciona con un método para el diagnóstico de aterosclerosis que involucra la medición de la actividad de NADPH oxidasa.

WO-A2 9719679 describe el uso de inhibidores de NADPH oxidasa para la fabricación de de un medicamento para la prevención de aterosclerosis.

US-A1 20040009901 se relaciona con un método para tratar un mamífero que tiene una condición autoinmune que involucra deficiencia de NADPH oxidasa. También, se describe...

1. Una composición farmacéutica que comprende

(a) Una siARN que enlaza específicamente un ácido nucleico que codifica una proteína NOX3, en donde dicha proteína NOX3

(i) incluye o consiste de la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID Nos: 1, 3 ó 5, o

(ii) es codificada por un ácido nucleico que incluye o consiste de la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nos: 2, 4, 6, 23 ó 24, o

(iii) es un fragmento de la proteína NOX3 de acuerdo con (i) o (ii) y exhibe actividad de NADPH oxidasa, o

(iv) tiene una secuencia al menos 75% idéntica con la proteína NOX3 de acuerdo con

(i) o (ii) o con el fragmento de acuerdo con (iii) y exhibe actividad de NADPH oxidasa; y

(b) un agente ototóxico seleccionado del grupo que consiste de salicilatos, antiinflamatorios no esteroideos, antibióticos, diuréticos, citostáticos, derivados de quinina y fármacos gastroprotectores.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicho agente ototóxico es un antibiótico aminoglicósido, preferiblemente gentamicina.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicho agente ototóxico es un citostático, preferiblemente cisplatina.

4. El uso de un modulador de una proteína NOX3 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento y/o prevención de la pérdida de la audición y/o la escucha de sonidos inexistentes, en donde dicha proteína NOX3

(i) incluye o consiste de la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID Nos: 1, 3 ó 5,o

(ii) es codificada por un ácido nucleico que incluye o consiste de la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nos: 2, 4, 6, 23 ó 24, o

(iii) es un fragmento de la proteína NOX3 de acuerdo con (i) o (ii) y exhibe actividad de NADPH oxidasa, o

(iv) tiene una secuencia al menos 75% idéntica con la proteína NOX3 de acuerdo con (i)

o (ii) o con el fragmento de acuerdo con (iii) y exhibe actividad de NADPH oxidasa; y en donde dicho modulador es un siARN que enlaza específicamente un ácido nucleico que codifica dicha proteína NOX3.

5. Un modulador de una proteína NOX3 para uso en el tratamiento y/o la prevención de la pérdida de la audición y/o de la escucha de sonidos inexistentes, en donde dicha proteína NOX3

(i) incluye o consiste de la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID Nos:1, 3 ó 5, o

(ii) es codificada por un ácido nucleico que incluye o consiste de la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nos: 2, 4, 6, 23 ó 24, o

(iii) es un fragmento de la proteína NOX3 de acuerdo con (i) o (ii) y exhibe actividad de NADPH oxidasa, o

(iv) tiene una secuencia al menos 75% idéntica con la proteína NOX3 de acuerdo con (i)

o (ii) o con el fragmento de acuerdo con (iii) y exhibe actividad de NADPH oxidasa,

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y en donde dicho modulador es un siARN que enlaza específicamente un ácido nucleico que codifica dicha proteína NOX3.

6. El uso de la reivindicación 4 o del modulador de la reivindicación 5, en donde dicha pérdida de la audición es una pérdida de la audición relacionada con fármacos, ruido o con la edad.

“Siguen 10 páginas de dibujos”