Un método ex vivo para incrementar la proliferación de células B no tumorigénicas comprendiendo administrar una cantidad efectiva de PCDGF a dichas células donde la proliferación de dichas células es aumentada por encima del nivel basal de proliferación celular

Métodos para incrementar la proliferación de células B.

Campo de la invención

Referencias

Diversas publicaciones están mencionadas aquí. Citas completas para estas publicaciones son proporcionadas abajo.

Antecedentes de la invención

La proliferación y diferenciación de células en organismos multicelulares es sujeto a procesos altamente regulados. Una faceta típica de las células de cáncer es la ausencia de control sobre el proceso; la proliferación y diferenciación se vuelven desreguladas resultando en un crecimiento incontrolado. Importantes esfuerzos de investigación han sido dirigidos hacia un mejor entendimiento de esta diferencia entre células normales y de tumor. Un área de foco de investigación es los factores de crecimiento y más concretamente, la estimulación del crecimiento autocrino.

Los factores de crecimiento son polipéptidos que llevan mensajes a las células acerca del crecimiento, la diferenciación, la migración y la expresión de genes. Normalmente, los factores de crecimiento son producidos en una célula y actúan en otra célula para estimular la proliferación. Sin embargo, ciertas células malignas, en cultivo, demuestran una mayor o absoluta dependencia de un mecanismo de crecimiento autocrino. Las células malignas que observan este comportamiento autocrino sortean la norma de producción del factor de crecimiento por otras células y están por consiguiente desreguladas en su crecimiento.

El desarrollo de las células B está compuesto de dos fases: independiente de antígeno y dependiente de antígeno. La fase independiente de antígeno del desarrollo de la célula B ocurre en la médula ósea donde los progenitores de células B se distinguen en células B inmaduras presentando IgM de superficie de célula. La fase dependiente de antígeno de la diferenciación de células B ocurre en la periferia secundaria de los órganos linfoides donde las células B específicas de antígeno proliferan y se distinguen dentro de células de plasma que segregan anticuerpos específicos tras la activación.

Durante la fase independiente de antígeno del desarrollo de las células B, el reajuste secuencial de segmentos génicos de inmunoglobina genera un diverso repertorio de antígenos. Las células pro-B, las primeras células de línea B derivadas de progenitores de células B, están caracterizada por la aparición de proteínas de la superficie celular del linaje de primeras células B y por el reajuste de genes inmunoglobulina del locus de cadena pesada. La etapa de células es seguida por la etapa de célula pre-B la cuál está caracterizada por el reajuste de los genes de cadena ligera de inmoglubina. El reajuste exitoso de tanto las cadenas ligera y pesada lleva a la presencia de molécula IgM intactas sobre la superficie de célula en la etapa inmadura de la célula B.

Los células B inmaduras se someten a selección para autotolerancia en una serie de puntos de seguridad provocados por antígenos y la selección para la capacidad de sobrevivir en los tejidos linfoides periféricos. Los células B que sobreviven a la selección para autotolerancia y capacidad para sobrevivir en los tejidos linfoides periféricos se diferencian además para hacer que las células B maduras expresen IgD superficial además de IgM superficial [Burrows, 1997]. Las células B maduras recirculan a través de tejidos linfoides periféricos donde pueden encontrar antígenos. Los células B activadas por antígenos pueden distinguirse en células de plasma y segregar una enorme cantidad de anticuerpos [Duchosal, 1997]. IgM, IgD, IgG, IgA, and IgE. IgM es la primera molécula inmunoglobulina que se sintetiza y se expresa.

La diferenciación y desarrollo de las células B dependientes de antígeno comienzan con el enlace de antígenos en células B. La activación de células B requiere dos señales; enlace de antígenos a la inmunoglobulina de la superficie celular B e interacción de las células B con células T auxiliares específicas de antígeno. La inmoglobulina de superficie sirviendo como receptor de antígeno de la célula B (RCB, receptor de células B) tiene un papel importante en la activación de la célula B. Después de ligar el antígeno, el RCB y el complejo de antígeno es interiorizado y la proteína de antígeno se deteriora. El antígeno digerido vuelve a las superficie celular B como péptidos ligados a moléculas de clase II MHC [Parker, 1993].

Cuando las células B se desarrollan desde células pro-B a células de plasma, expresan proteínas superficiales de la célula distintas a la inmoglubina que son marcadores útiles para las células de linaje B en diferentes etapas del desarrollo. Una de las primeras proteínas identificables expresadas sobre la superficie de las células de linaje B es CD45R (también conocida como B220) [Osmond, 1998; Hardy, 2001]. CD45R, una proteína tirosina fosfatasa que funciona en señalación de receptor de célula B, es expresada por medio del desarrollo de la célula B a partir de células pro-B hasta células de plasma [Osmond, 1998; Hardy, 2001]. CD43 (el leucosialina de mucina) es también expresada en la etapa de la célula pro B pero su expresión se pierde a medida que las células pasan a células inmaduras B [Hardy, 2001]. CD43 es una molécula multifuncional con funcionalidad contradictoria inmediata [Ostberg, 1998]. Por ejemplo, CD43 puede actuar como una molécula de adhesión que puede guiar interacciones célula-célula de precursores de célula B con células del estroma [Ostberg, 1998]. Sin embargo, CD43 tiene también funciones de antiadhesión [Ostberg, 1998]. CD43 tiene un importante papel en señalización de células e interacción citosqueletal [Ostberg, 1998]. CD19 es otro marcador celular de superficie expresado a partir de células pro-B a través de la etapa de la célula de plasma [Hardy, 2001]. CD19 está involucrado en la señalización del receptor de la célula B y reduce el umbral para la estimulación del receptor del antígeno de las células B [LeBien, 1998]. Otras moléculas de superficie celular expresadas durante distintas etapas del desarrollo de la célula B incluyen el antígeno estable al calor HSA, CD10, CD20, CD22, CD38, y CD40 [Duchosal, 1997; Hardy, 2001].

El desarrollo de la célula B y la diferenciación de la fase independiente del antígeno están fuertemente regulados por el linaje y los factores de crecimiento específicos de la etapa y las moléculas de adhesión celular. La interleucina 7 (IL-7), segregada por células del estroma, es un factor esencial de crecimiento para el desarrollo inicial de la célula B. IL-7 puede estimular la proliferación de células pro y pre B [Duchosal, 1997]. Neutralizar el anticuerpo anti-IL-7 puede inhibir la proliferación inducida por IL-7 de células pro y pre B [Duchosal, 1997]. La profilerización de la célula B dependiente de IL-7 es potenciada por la insulina como factor de crecimiento-1 y factor de célula madre, dos factores de crecimiento del estroma [Duchosal, 1997]. Interferones (IFNs)-α/β, segregados por macrófagos en médula ósea, pueden inhibir el crecimiento de células B inducidas por IL-7 por apoptosis [Burrows, 1997]. El factor 1 derivado de células del estroma o el factor estimulante de crecimiento de células pre B (SDF-1/PBSF), producidas constitutivamente por células del estroma de médula ósea, estimula la proliferación de células pro y pre B [Nagasawa, 1996]. Experimentos en vivo muestran que ratones carentes de PBSF/SDF-1 murieron perinatalmente [Nagasawa, 1996]. IL-3 estimula la proliferación de células pre B por medio de la interacción con el receptor IL-3 en células B. [Duchosal, 1997]. IL-3 es una citoquina derivada de célula T y junto con IL-6, puede estimular células madre multipotenciales y progenitores de células B [Kincade, 1989]. Neuroleucina, un homologo de isómero de forsato 6 de glucosa, tiene la capacidad de estimular el desarrollo de células B [Kincade, 1989].

Existen diversos factores de crecimiento que regulan negativamente el desarrollo de células B. IL-1 inhibe la generación de células pre B a partir de las primeras células pro B [Ryan, 1994]. Sin embargo, IL-1 incrementa la generación de células B secretoras de Ig en cultivo de médula espinal humana [Ryan, 1994]. TNF-α y IL-4 inhiben colonias de progenitor de linfoide humano [Ryan, 1994]. Las moléculas de adhesión de células también son importantes para el desarrollo temprano de células B. El factor de célula madre (FCM), presente en la superficie celular de células del estroma, interactúa con el receptor tirosina Kinasa de la superficie... [Seguir leyendo]

1. Un método ex vivo para incrementar la proliferación de células B no tumorigénicas comprendiendo administrar una cantidad efectiva de PCDGF a dichas células donde la proliferación de dichas células es aumentada por encima del nivel basal de proliferación celular.

2. El método de la Reivindicación 1 donde dichas células son de sangre periférica, ganglios linfáticos, médula espinal, sangre de cordón umbilical o el bazo.

3. Los métodos de la Reivindicación 1 o 2, que además comprenden administrar una cantidad efectiva de un mitógeno de célula B donde la proliferación de células B es incrementada por encima de el nivel basal de proliferación celular.

4. Un método ex vivo de estimular síntesis de ADN en células B no tumorigénicas comprendiendo administrar una cantidad efectiva de PCDGF a dichas células en donde la síntesis de ADN es incrementada por encima del nivel basal de síntesis de ADN celular.

5. El método de la Reivindicación 4, en donde dichas células son de sangre periférica, ganglios linfáticos, médula espinal, sangre de cordón umbilical o el bazo.

6. Los métodos de la Reivindicación 4 o 5, que además comprenden administrar una cantidad efectiva de un mitógeno de células B en donde la síntesis de ADN es incrementada por encima del nivel basal de síntesis de ADN celular.

7. El método de la Reivindicación 1 donde dichas células son un cultivo de células B primarias.