MÉTODO Y SISTEMA DE ELIMINAR EL INHIBIDOR DE CITOQUINA EN PACIENTES.

Un dispositivo extracorporal a través del cual puede ser circulada sangre o plasma de un paciente antes de ser devuelta al paciente,

dicho dispositivo teniendo inmovilizados en él anticuerpos que se unen selectivamente a moléculas solubles de receptor 1 de TNF y anticuerpos que se unen selectivamente a moléculas solubles de receptor 2 de TNF, y en el que la unión de los anticuerpos a la molécula soluble de receptor de TNF elimina la molécula soluble de receptor de TNF de la sangre o plasma del paciente

Antecedentes de la Invención

La invención presente se ubica generalmente en el campo de la mejora de una respuesta inmune, y se refiere particularmente a la eliminación de inhibidores de TNF en un paciente, tal como un paciente de cáncer, para promover la inflamación y por ello inducir la remisión del cáncer. 5

La terapia convencional del cáncer se basa en el uso de medicamentos y/o radiaciones que destruyen las células replicantes, que se espera sea más rápido que el agente destruyendo las células normales del paciente. La cirugía se ha utilizado para reducir la dimensión del tumor, pero ha tenido poco impacto una vez que el tumor ha hecho metástasis. La radiación es únicamente efectiva en un área localizada.

Los tratamientos pueden por sí mismos matar al paciente en ausencia de una terapia de mantenimiento. Por 10 ejemplo, en el caso de algunos tipos de cáncer, los transplantes de médula ósea se han utilizado para mantener al paciente después del tratamiento con niveles de quimioterapia que podrían resultar fatales. Sin embargo no se ha probado su eficacia en el tratamiento de tumores sólidos. Para el tratamiento de cánceres agresivos se han utilizado los “cocteles” de diversos agentes quimio-terapéuticos y las combinaciones de dosis muy altas de quimioterapia con agentes restauradores, por ejemplo, el factor de estimulación de colonias granulocito-macrófago (”GM-CSF”), la 15 eritropoyetina, el factor de estimulación del granulocito de trombopoetina (“G-CSF”), el factor de estimulación de la colonia de macrófagos (“M-CSF”) y el factor de células madre (“SCF”), para restaurar los niveles de plaquetas y glóbulos blancos. Aún mediante el uso de terapia restrictiva o de apoyo, los efectos secundarios son severos.

Se han probado otros tratamientos en un intento por mejorar la mortalidad y la morbilidad. Se han intentado vacunas para estimular el sistema inmunológico del paciente, pero sin mucho éxito. Se han utilizado citoquinas 20 solas o en combinación, tales como el factor de necrosis del tumor, el interferón gamma y la interleuquina-2 (“IL-2”) para eliminar cánceres, pero no han producido su cura. Más recientemente, se han probado compuestos anti-angiogénicos tales como la talidomida, en casos de uso compasivo y han mostrado remisión del tumor. En estudios con animales, los compuestos que inducen un estado pro-coagulante, tales como un inhibidor de proteína C, se han utilizado para causar la remisión del tumor. Los nuevos estudios han mostrado que los inhibidores de los receptores 25 de citoquina, tales como los receptores del factor de necrosis del tumor (“TNFRs”) que se liberan de las células tumorales en forma soluble, en altas concentraciones con relación a células normales, pueden restaurar el ataque del sistema inmunológico a las células tumorales (Jablonska and Peitruska, Arch. Immunol. Ther.Exp. (Warsz) 1997, 45_(5,6), 449-453; Chen, et.al., J. Neuropathol, Exp. Neurol. 1997, 56_(5), 541-550)

La Patente E.E.U.U. No. 4 708 713 a Lentz (D1), describe un método alternativo para el tratamiento del 30 cáncer, que implica ultraforesis para eliminar compuestos basados en el peso molecular, lo que promueve un ataque inmunológico a los tumores a partir de los propios glóbulos blancos del paciente.

Selinsky et al (1998) Immunology 94:88-93 (D1) describen la inhibición polifacética de mecanismos inmunes antitumorales por el receptor tipo 1 soluble del factor de necrosis tumoral.

Gatanaga et al (1990) Proc Nal Acad Sci (USA 87: 8781-84 (D2) describe la purificación y caracterización de 35 un inhibidor (receptor soluble del factor de necrosis tumoral) para factor de necrosis tumoral y linfotoxina obtenida de ultrafiltrados de suero de pacientes humanos de cáncer.

A pesar de todos estos esfuerzos, muchos pacientes mueren de cáncer; otros son terriblemente mutilados. Es poco probable que sea efectiva una terapia única para la cura de todo tipo de cánceres.

Es por tanto objetivo de la invención presente aportar un sistema para el tratamiento de tumores sólidos. 40

Como objetivo adicional de la invención presente se aporta un sistema que no involucra quimioterapia sistémica no-selectiva, extremadamente tóxica.

Resumen de la Invención

Se ha desarrollado un método para tratar trastornos caracterizados por la producción de receptores solubles de TNF, tales como muchos tipos de cáncer, y ciertas enfermedades tales como VIH, donde la enfermedad 45 inmunosuprime al paciente. Como aquí se describe, la sangre del paciente es pasada a través de una columna que tiene anticuerpos inmovilizados en ella, que ligan y eliminan las moléculas de receptor soluble de TNF. El proceso puede realizarse solamente o en combinación con otras terapias, incluyendo radiación, quimioterapia (local o sistémica, por ejemplo, tratamientos usando agentes alquilantes, doxirubicina, carboplatino, cisplatino, y taxol, y otros medicamentos que pueden ser sinérgicos en efecto con citoquinas “desbloqueadas”; o factores anti-50 angiogénicos. Se usan anticuerpos que son inmunoreactivos con el receptor-1 del factor de necrosis de tejido (“TNFR-1”) y el receptor-2 del factor de necrosis de tejido (“TNFR-2”),

El paciente es preferiblemente tratado diariamente durante al menos tres semanas, y realizados ensayos diagnósticos para verificar que ha habido contracción de los tumores, después el régimen de tratamiento se repite según se necesite. La invención es definida por las reivindicaciones. 55

Descripción Detallada de la Invención

Los mecanismos de eliminación innatos, naturales y específicos para antígenos representan el mejor arsenal para tratar con las células de melanoma in vitro y in vivo. Es fundamental para estos mecanismos destructores celulares el factor de necrosis de tumor (TNF-), una citoquina inflamatoria producida por macrófagos y células mononucleares más tempranas y TNF-, una citoquina relacionada producida y secretada por linfocitos T asesinos 5 con receptores específicos para antígenos altamente selectivos, Old L.J., Antitumor activity of microbial products and tumos necrosis factor, y Bonavida B. et al., (eds): Tumor Necrosis Factor/Cachecin and Related Cytikines, Basell, Karger, 1988, p 7; Haranaka K., et al, Cytotoxic activity of tumor necrosis factor (TNF) on human cancer cells in Vitro, Jpn. J Exp. Med. 1981; 51: 191; Urban J.L.II, et al, Tumor necrosis factor: A potent effector molecule for tumor cell killing by activated macrophages, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986; 83-5233; Philip R., et el., Tumor necrosis factor 10 as immunomodulator and mediator of monocyte cytotoxicity induced by itself, Gamma-interferon and Interleukin-1, Nature 1986; 323:86; Ziegler-Heitbrock H.W., et el., Tumor necrosis factor as effector molecule in monocyte-mediated cytotoxicity, Cancer Res. 1986; 46:5947; y Feinman R., et al., Tumor necrosis factor is a important mediator of tumor cell killing by human monocytes, J Immunol, 1987; 138:365. Derivan de miles de millones de clones, cada uno con su especificidad propia. Así, un clon de estos linfocitos derivados del timo da lugar a asesinos T (linfocitos 15 citotóxicos), u otras clases funcionales, cada una con una especificad del clon padre. Sus mecanismos están relacionados a ambas toxicidades de tumor celular dependiente e independiente de anticuerpos.Los receptores para TNF en células neoplásicas, infectadas por virus, maduras u otras que sean por otra parte objetivo para destrucción pueden ser a la vez una bendición y una maldición. En un papel positivo, permiten la unión de TNF a la superficie para internalización y destrucción de la célula. Desgraciadamente esta hipótesis receptora tiene un doble filo. Ciertas 20 células neoplásicas tales como melanomas activos secretan grandes cantidades de estos receptores (sTNF-R1 y sTNF-R2) que rápidamente captan TNF antes que pueda situarse en la proximidad de la célula. Haranaka K., et al., Cytotoxic activity of tumor necrosis factor (TNF) on human cancer cells in Vitro, Jpn. J Exp. Med. 1981; 51:191; Urban J.L.II, et al, Tumor necrosis factor: A potent effector molecule for tumor cell killing by activated macrophages, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986; 83-5233; Philip R., et el., Tumor necrosis factor as immunomodulator and mediator 25 of monocyte cytotoxicity induced by itself, Gamma-interferon and Interleukin-1, Nature 1986; 323:86; Ziegler-Heitbrock H.W., et el., Tumor necrosis factor as effector molecule in monocyte-mediated cytotoxicity,... [Seguir leyendo]

1. Un dispositivo extracorporal a través del cual puede ser circulada sangre o plasma de un paciente antes de ser devuelta al paciente,

dicho dispositivo teniendo inmovilizados en él anticuerpos que se unen selectivamente a moléculas solubles de receptor 1 de TNF y anticuerpos que se unen selectivamente a moléculas solubles de receptor 2 de TNF, 5

y en el que la unión de los anticuerpos a la molécula soluble de receptor de TNF elimina la molécula soluble de receptor de TNF de la sangre o plasma del paciente.

2. El dispositivo extracorporal de la Reivindicación 1, en el que los anticuerpos y el dispositivo han sido esterilizados y se ha eliminado endotoxina de los anticuerpos y el dispositivo.

3. El dispositivo extracorporal de cualquiera de las Reivindicaciones 1 o 2, en el que el dispositivo es una 10 columna adsorbente que elimina selectivamente dichas moléculas solubles del receptor de citoquina de la sangre o plasma.

4. El dispositivo extracorporal de la Reivindicación 3, en el que la columna puede adsorber los receptores solubles de TNF presentes en 600 ml de plasma.

5. El dispositivo extracorporal de la Reivindicación 3, en el que la columna puede adsorber los receptores 15 solubles de TNF presentes en 4.000 ml de plasma.

6. El dispositivo extracorporal de cualquiera de las Reivindicaciones 1 o 2, en el que el dispositivo comprende un filtro sobre el que se inmovilizan los anticuerpos.

7. El dispositivo extracorporal de cualquiera de las Reivindicaciones 1-6 que además comprende un filtro o centrifugador primario para separar ultrafiltrado o plasma de la sangre de un paciente. 20

8. El dispositivo extracorporal de cualquiera de las Reivindicaciones 1-7 que además comprende una cánula y tubos adecuados para conectar el dispositivo al paciente.

9. El dispositivo extracorporal de cualquiera de las Reivindicaciones 1-8, en el que los anticuerpos son anticuerpos monoclonales, fragmentos de anticuerpo o anticuerpos de cadena simple.

10. Uso de anticuerpos que se unen selectivamente a moléculas solubles de receptor 1 de TNF y anticuerpos 25 que se unen selectivamente a moléculas solubles de receptor 2 de TNF, en la fabricación de un dispositivo extracorporal que tiene dichos anticuerpos inmovilizados en él para inducir una respuesta inmune contra tejido transformado, infectado o enfermo en un paciente mediante circulación de sangre o plasma del paciente a través del dispositivo de manera que dichos anticuerpos se unen a las moléculas solubles de receptor de citoquina en la sangre o plasma del paciente, eliminando por ello las moléculas solubles de 30 receptor de TNF de la sangre o plasma del paciente, y devolviendo la sangre o plasma al paciente.

11. El uso de la Reivindicación 10, en el que los anticuerpos y el dispositivo han sido esterilizados y se ha eliminado endotoxina de los anticuerpos y el dispositivo.

12. El uso de cualquiera de las 1. u 11, en el que el dispositivo es una columna adsorbente que elimina selectivamente dichas moléculas solubles del receptor de citoquina de la sangre o plasma. 35

13. El uso de la Reivindicación 12, en el que la columna puede adsorber el receptor soluble de TNF presente en 600 ml de plasma.

14. El uso de la Reivindicación 12, en el que la columna puede adsorber el receptor soluble de TNF presente en 4.000 ml de plasma.

15. El uso de cualquiera de las 1. u 11, en el que el dispositivo comprende un filtro sobre el 40 que se inmovilizan los anticuerpos.

16. El uso de cualquiera de las Reivindicaciones 10ª 15, en el que los anticuerpos son anticuerpos monoclonales, fragmentos de anticuerpo o anticuerpos de cadena simple