Un método para producir una construcción tubular de tejidos, que comprende (i) permitir el contacto del borde de por lo menos una población de células con el borde de por lo menos otra población de células distinta mantenida en cultivo,

formando cada población de células una hoja de tejido vivo, durante un período de tiempo suficiente para la unión de los bordes de las citadas poblaciones de células para obtener una construcción continua simple de tejidos, y (ii) arrollar la citada construcción continua simple de tejidos para producir una construcción tubular de tejidos

Método para preparar construcciones de tejidos.

Campo técnico

La presente invención se refiere a ingeniería de tejidos. También se refiere a la producción in vitro de construcciones de tejidos diseñadas biológicamente que contienen poblaciones separadas espacialmente de células vivas con matriz extracelular, y a un método de preparación de aquellas.. Este método se puede aplicar a la construcción de una amplia gama de construcciones de tejidos que requieren dominios distintos espacialmente con poblaciones de células específicas, matriz extracelular y propiedades mecánicas.

Antecedentes

La ingeniería de tejidos es la técnica de reconstruir tejidos a partir de células aisladas y componentes de matriz extracelular. Una manera eficiente de reconstruir tejidos y órganos es producir primero hojas de tejidos vivos. Estas hojas, compuestas de células vivas y matriz extracelular, se pueden usar como material de partida para el anhelo de construcciones diseñadas de tejidos. Cuando se unen mecánicamente con la resistencia apropiada a la tracción y la forma deseada, las células continuarán secretando proteínas de la matriz y las hojas adyacentes se fusionarán entre sí formando una estructura sólida. Además, estas construcciones se pueden hacer a partir de células autólogas, evitando así el rechazo inmunitario del injerto.

Se pueden obtener por varios métodos hojas de tejidos vivos suficientemente resistentes para ser manipuladas. La matriz extracelular de la hoja de tejido puede ser añadida exógenamente o ser producida por las propias células. Se pueden sembrar células junto con componentes de la matriz extracelular exógena para formar una hoja de tejido (ref. Bell). También, células cultivadas pueden sintetizar su propia matriz extracelular cuando se incuban en presencia de reactivos apropiados. Desde hace tiempo se sabe que el ion ascorbato estimula la producción de colágeno en células cultivadas de origen mesenquimal. Cuando se cultivan sobre una superficie de plástico en presencia de ácido ascórbico, los fibroblastos y células de músculos lisos forman hojas que finalmente se separan del sustrato de cultivo. Este método de autounión da tejido con propiedades mecánicas iguales a las de órganos y desprovisto de material sintético, haciéndolo perfectamente compatible con el organismo vivo al que debe ser implantado, como indican L'Heureux et al. (FASEB J., 1998, 12, 47-57).

Cuando se ha de producir un tejido reconstruido con capas de diferentes tipos de células, la unión sucesiva de las diferentes hojas separadas incrementa el tiempo de producción del producto final. Además, pueden aparecer artefactos de tejido en el punto de unión entre las hojas preparadas en la técnica.

Resumen de la invención

Un objeto de la presente invención es proporcionar un método de unir hojas de tejidos vivos para formar una construcción continua de tejidos, método que comprende las etapas de:

1. Un método para producir una construcción tubular de tejidos, que comprende (i) permitir el contacto del borde de por lo menos una población de células con el borde de por lo menos otra población de células distinta mantenida en cultivo, formando cada población de células una hoja de tejido vivo, durante un período de tiempo suficiente para la unión de los bordes de las citadas poblaciones de células para obtener una construcción continua simple de tejidos, y (ii) arrollar la citada construcción continua simple de tejidos para producir una construcción tubular de tejidos.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que las citadas poblaciones de células son confluentes total o parcialmente.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que las citadas poblaciones de células están embebidas en un gel antes de ser colocadas en cultivo para permitir el contacto de los bordes.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el citado gel es un gel de colágeno.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que por lo menos una de las citadas poblaciones de células es una capa simple de células, una construcción tridimensional de tejidos o un injerto de tejido.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que por lo menos una de las citadas poblaciones de células comprende células transformadas genéticamente.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que las citadas poblaciones de células están separadas por un separador.

8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el citado separador es impermeable o permite el paso selectivo de componentes contenidos en un medio de cultivo.

9. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la citada construcción tubular de tejidos es un vaso sanguíneo.

10. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que las citadas hojas de tejidos vivos están compuestas de poblaciones de células seleccionadas del grupo que consiste en tipos homólogos o heterólogos de células, células de mamíferos y células mesenquimales, células musculares o fibroblastos.

11. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que por lo menos una de las citadas poblaciones de células está compuesta de células de músculos lisos.

12. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que por lo menos una hoja de tejido vivo comprende por lo menos un tipo de células.

13. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la citada hoja de tejido vivo comprende por lo menos una capa de células.

14. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que las citadas hojas de tejidos vivos se colocan en contacto por los bordes después de la eliminación de un separador para formar la citada construcción continua de tejido, o poniendo en contacto las poblaciones de células.

15. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el citado separador es impermeable o permite el paso selectivo de componentes contenidos en un medio de cultivo en el que se mantienen las citadas hojas de tejidos vivos.