MÉTODO PARA PREPARAR CONSTRUCCIONES DE TEJIDOS.
Un método para producir una construcción tubular de tejidos, que comprende (i) permitir el contacto del borde de por lo menos una población de células con el borde de por lo menos otra población de células distinta mantenida en cultivo,
formando cada población de células una hoja de tejido vivo, durante un período de tiempo suficiente para la unión de los bordes de las citadas poblaciones de células para obtener una construcción continua simple de tejidos, y (ii) arrollar la citada construcción continua simple de tejidos para producir una construcción tubular de tejidos
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CA2003/000617.
Solicitante: ORGANOGENESIS INC..
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 150 DAN ROAD CANTON, MA 02021 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: BERGERON,FRANCOIS, AUGER,FRANCOIS A, GERMAIN,LUCIE.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 24 de Abril de 2003.
Fecha Concesión Europea: 29 de Septiembre de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N5/06B28A
- C12N5/06T
Clasificación PCT:
- C12N5/071 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células o tejidos de vertebrados, p.ej. células o tejidos humanos.
Clasificación antigua:
- C12N5/06
- C12N5/08
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
![MÉTODO PARA PREPARAR CONSTRUCCIONES DE TEJIDOS.](https://patentados.com/img/2011/03/metodo-para-preparar-construcciones-de-tejidos.jpg)
Fragmento de la descripción:
Método para preparar construcciones de tejidos.
Campo técnico
La presente invención se refiere a ingeniería de tejidos. También se refiere a la producción in vitro de construcciones de tejidos diseñadas biológicamente que contienen poblaciones separadas espacialmente de células vivas con matriz extracelular, y a un método de preparación de aquellas.. Este método se puede aplicar a la construcción de una amplia gama de construcciones de tejidos que requieren dominios distintos espacialmente con poblaciones de células específicas, matriz extracelular y propiedades mecánicas.
Antecedentes
La ingeniería de tejidos es la técnica de reconstruir tejidos a partir de células aisladas y componentes de matriz extracelular. Una manera eficiente de reconstruir tejidos y órganos es producir primero hojas de tejidos vivos. Estas hojas, compuestas de células vivas y matriz extracelular, se pueden usar como material de partida para el anhelo de construcciones diseñadas de tejidos. Cuando se unen mecánicamente con la resistencia apropiada a la tracción y la forma deseada, las células continuarán secretando proteínas de la matriz y las hojas adyacentes se fusionarán entre sí formando una estructura sólida. Además, estas construcciones se pueden hacer a partir de células autólogas, evitando así el rechazo inmunitario del injerto.
Se pueden obtener por varios métodos hojas de tejidos vivos suficientemente resistentes para ser manipuladas. La matriz extracelular de la hoja de tejido puede ser añadida exógenamente o ser producida por las propias células. Se pueden sembrar células junto con componentes de la matriz extracelular exógena para formar una hoja de tejido (ref. Bell). También, células cultivadas pueden sintetizar su propia matriz extracelular cuando se incuban en presencia de reactivos apropiados. Desde hace tiempo se sabe que el ion ascorbato estimula la producción de colágeno en células cultivadas de origen mesenquimal. Cuando se cultivan sobre una superficie de plástico en presencia de ácido ascórbico, los fibroblastos y células de músculos lisos forman hojas que finalmente se separan del sustrato de cultivo. Este método de autounión da tejido con propiedades mecánicas iguales a las de órganos y desprovisto de material sintético, haciéndolo perfectamente compatible con el organismo vivo al que debe ser implantado, como indican L'Heureux et al. (FASEB J., 1998, 12, 47-57).
Cuando se ha de producir un tejido reconstruido con capas de diferentes tipos de células, la unión sucesiva de las diferentes hojas separadas incrementa el tiempo de producción del producto final. Además, pueden aparecer artefactos de tejido en el punto de unión entre las hojas preparadas en la técnica.
Resumen de la invención
Un objeto de la presente invención es proporcionar un método de unir hojas de tejidos vivos para formar una construcción continua de tejidos, método que comprende las etapas de:
Las poblaciones de células de la etapa (a) pueden estar compuestas de tipos homólogos o heterólogos de células y preferiblemente son células de mamíferos seleccionadas del grupo que consiste en células mesenquimales, células musculares, células de músculos lisos o fibroblastos.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar una construcción continua simple de tejidos compuesta de por lo menos dos hojas de tejidos vivos, en la que las hojas de tejidos vivos se colocan en contacto por los bordes durante un período de tiempo suficiente para originar la unión de las hojas de tejidos vivos formando una construcción continua simple de tejidos.
Las hojas de tejidos vivos usadas en la preparación de la construcción continua simple de tejidos pueden estar compuestas de tipos homólogos o heterólogos de células.
La población de células puede comprender por lo menos un tipo de células.
La hoja de tejido vivo puede comprender por lo menos una capa de células.
Los tejidos vivos pueden estar separados por un separador, que puede ser impermeable o puede permitir el paso selectivo de componentes contenidos en un medio de cultivo en el que se mantienen las poblaciones de células, hoja de tejido vivo, construcciones tridimensionales de tejidos o injertos de tejidos.
El contacto de las poblaciones de células de la etapa (b) lo puede originar la retirada del separador entre por lo menos dos hojas de tejidos vivos o colocando en contacto las hojas de tejidos vivos.
De acuerdo con la presente invención, se proporciona una construcción tubular de tejidos que es un vaso sanguíneo.
De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método de formar una construcción tubular de tejidos vivos, método que comprende permitir el contacto en los bordes de por lo menos dos poblaciones distintas de células mantenidas en cultivo, formando cada población de células una hoja de tejido vivo, durante un período de tiempo suficiente para unir las poblaciones de células formando una construcción continua simple de tejidos.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un método para producir rápidamente una hoja de tejido vivo con dos o más dominios distintos o poblaciones de células, que se fusionan perfectamente o se unen entre sí biológicamente.
Otro aspecto de la presente invención es que las células que forman las poblaciones de células, las hojas de tejidos vivos o las construcciones tridimensionales de tejidos pueden consistir en células transformadas genéticamente.
De acuerdo con la presente invención, también se proporciona un método que permite la creación de compartimentos estancos en un matraz de cultivo de tejidos. Cada uno de estos compartimentos se puede sembrar por separado con diferentes tipos de células y matriz extracelular, originándose la creación de una hoja compuesta de tejido que se puede doblar, apilar, cortar o arrollar para crear las deseadas construcciones tridimensionales de tejidos. Para conseguir la separación entre las diferentes poblaciones de células se puede usar un dispositivo separador de silicona o caucho que se coloca en la cubeta de cultivo antes de la siembra de las células. Después de que las células se hayan unido a su parte respectiva de la superficie de la cubeta (1 a 24 horas, dependiendo del tipo de células), se retira el separador y se deja que las poblaciones de células crezcan y cierren el espacio vacío entre ellas. La hoja compuesta de células que se forma por este método está desprovista completamente de artefactos de sutura y sus diferentes partes están perfectamente fusionadas entre sí. La forma del separador se puede diseñar para permitir la producción de un motivo particular de capas de células y su posterior unión formando una construcción tridimensional. Se pueden usar varios separadores para generar varios dominios de células en cada hoja.
Se debe entender que las poblaciones de células pueden estar embebidas en un gel, preferiblemente, pero sin carácter limitativo, un gel de colágeno, antes de colocarlas en cultivo para permitir el contacto por los bordes.
Breve descripción del dibujo
La figura 1 es una representación esquemática del método de preparar construcciones de tejidos de acuerdo con una realización de la presente invención.
Modos de realizar la invención
A continuación se describe con más detalle la presente invención haciendo referencia al dibujo adjunto, en el que se muestran realizaciones preferidas de la invención. Sin embargo, esta invención se puede ser realizar de muchas formas diferentes y no se debe considerar limitada a las realizaciones especificadas en la presente memoria. Al contrario, se proporcionan estas realizaciones para que esta descripción sea minuciosa y completa y exprese completamente el alcance de la invención...
Reivindicaciones:
1. Un método para producir una construcción tubular de tejidos, que comprende (i) permitir el contacto del borde de por lo menos una población de células con el borde de por lo menos otra población de células distinta mantenida en cultivo, formando cada población de células una hoja de tejido vivo, durante un período de tiempo suficiente para la unión de los bordes de las citadas poblaciones de células para obtener una construcción continua simple de tejidos, y (ii) arrollar la citada construcción continua simple de tejidos para producir una construcción tubular de tejidos.
2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que las citadas poblaciones de células son confluentes total o parcialmente.
3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que las citadas poblaciones de células están embebidas en un gel antes de ser colocadas en cultivo para permitir el contacto de los bordes.
4. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el citado gel es un gel de colágeno.
5. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que por lo menos una de las citadas poblaciones de células es una capa simple de células, una construcción tridimensional de tejidos o un injerto de tejido.
6. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que por lo menos una de las citadas poblaciones de células comprende células transformadas genéticamente.
7. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que las citadas poblaciones de células están separadas por un separador.
8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el citado separador es impermeable o permite el paso selectivo de componentes contenidos en un medio de cultivo.
9. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la citada construcción tubular de tejidos es un vaso sanguíneo.
10. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que las citadas hojas de tejidos vivos están compuestas de poblaciones de células seleccionadas del grupo que consiste en tipos homólogos o heterólogos de células, células de mamíferos y células mesenquimales, células musculares o fibroblastos.
11. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que por lo menos una de las citadas poblaciones de células está compuesta de células de músculos lisos.
12. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que por lo menos una hoja de tejido vivo comprende por lo menos un tipo de células.
13. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la citada hoja de tejido vivo comprende por lo menos una capa de células.
14. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que las citadas hojas de tejidos vivos se colocan en contacto por los bordes después de la eliminación de un separador para formar la citada construcción continua de tejido, o poniendo en contacto las poblaciones de células.
15. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el citado separador es impermeable o permite el paso selectivo de componentes contenidos en un medio de cultivo en el que se mantienen las citadas hojas de tejidos vivos.
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