Método in vitro para el pronóstico o predicción de la respuesta por parte de pacientes con artritis reumatoide al tratamiento con agentes que reconocen el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B.

El método de la invención comprende la determinación en una muestra de sangre de dichos pacientes y mediante la cuantificación del nivel de expresión transcripcional (ARNm), antes de iniciar el tratamiento, de al menos uno de los genes seleccionado del grupo: ARG1, CPD, TRAF1, C1QA, LRRN3, HLA-DQA1, NLK, TLR4, LOC89944, TOM1L1, BACH, NCALD, EIF2C2, NFIC, PCDHB7, FLJ32770, ARID3A, C14ORF9, CSNK1E, BCAS1, TEAD2, C6orf145 y SNTA1; y la comparación de dicho nivel de expresión con respecto a los valores de expresión previamente obtenidos de pacientes que demostraron ser respondedores al tratamiento o no respondedores al mismo

Método in vitro para el pronóstico o predicción de la respuesta por parte de pacientes con artritis reumatoide al tratamiento con agentes que reconocen el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método in vitro (en adelante método de la invención) para el pronóstico o predicción de la respuesta al tratamiento con agentes que reconocen el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B, como por ejemplo rituximab, por parte de pacientes con Artritis Reumatoide (AR). Así, la presente invención puede englobarse dentro del campo de la medicina personalizada, de la reumatología o de la genética humana como campo que estudia las enfermedades de base genética.

Estado de la técnica

La AR es una de las enfermedades autoinmunes más frecuentes en el mundo (prevalencia mundial ∼ 1%). La AR conduce a la inflamación crónica de las articulaciones sinoviales y al desarrollo de daño articular progresivo que puede dar lugar a una marcada incapacidad funcional. Además, la AR es una enfermedad muy heterogénea y compleja en todos sus aspectos, incluyendo tanto sus manifestaciones clínicas como la variabilidad en su respuesta a las diferentes terapias.

Fruto de la intensa investigación llevada a cabo durante los últimos años, se han identificado varios tratamientos para el control de la AR. Rituximab es un anticuerpo monoclonal que reconoce el receptor de membrana CD20, específico de linfocitos B. La unión de rituximab con CD20 provoca una depleción transitoria de los linfocitos B. En principio, el fármaco se diseñó para el tratamiento de los linfomas B de tipo No Hodgkin. Recientemente, se ha podido comprobar que también es un tratamiento eficaz para controlar la AR [Edwards, J. C. et al. Efficacy of B-cell-targeted therapy with rituximab in patients with rheumatoid arthritis. N Engl J Med 350, 2572-81 (2004)].

Sin embargo, existe un porcentaje de pacientes que no responden al tratamiento con agentes que reconocen el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B y deben ser redirigidos hacia terapias alternativas. Por lo tanto, los métodos para el pronóstico o predicción de los pacientes que se pueden beneficiar de este tratamiento y su diferenciación de los pacientes no respondedores a dicho tratamiento que serán focalizados hacia terapias alternativas, son una necesidad creciente dirigida hacia el reto que supone la medicina individualizada.

El artículo [Dass, S. et al. Highly sensitive B cell analysis predicts response to rituximab therapy in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 58, 2993-9 (2008)] divulga la asociación entre el nivel de depleción de linfocitos B y la respuesta clínica al cabo de varias semanas. En particular, los individuos en los que la depleción es incompleta, la respuesta a rituximab es peor. La asociación es estadísticamente significativa pero no muy fuerte (P = 0.01). Además, la predicción en este estudio se realiza después de realizar el tratamiento.

En el documento [Teng, Y. K. et al. Immunohistochemical analysis as a means to predict responsiveness to rituximab treatment. Arthritis Rheum 56, 3909-18 (2007)] se divulga la positividad para los anticuerpos anti-péptidos citrulinados (anti_CCPs) en suero en aquellos pacientes con una alta infiltración de linfocitos B CD79a+ en la membrana sinovial. El problema de este método es que sólo permite predecir un subgrupo de pacientes y, además, requiere la obtención de una biopsia sinovial. Comparado con la extracción de sangre, la extracción de biopsias sinoviales es un método altamente invasivo para el paciente y muy poco práctico (pocos centros clínicos cuentan con el personal entrenado y la tecnología para realizarlo).

En el documento [Cohen, S. B. et al. Rituximab for rheumatoid arthritis refractory to anti-tumor necrosis factor therapy: Results of a multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled, phase III trial evaluating primary efficacy and safety at twenty-four weeks. Arthritis Rheum 54, 2793-806 (2006)] se divulga uno de los primeros estudios donde se evaluaba la eficacia y seguridad de rituximab en AR. Encuentran una leve asociación de la respuesta con el Factor Reumatoide aunque con poca significación.

En [Roll, P., Dorner, T. & Tony, H. P. Anti-CD20 therapy in patients with rheumatoid arthritis: predictors of response and B cell subset regeneration after repeated treatment. Arthritis Rheum 58, 1566-75 (2008)] se lleva a cabo un análisis de citometría de flujo pero, como en Dass et al, encuentran avocaciones débiles de subgrupos de linfocitos con la respuesta clínica después del tratamiento.

Ninguno de los documentos localizados en el estado de la técnica describe los genes, cuyo nivel de expresión es analizado en la presente invención, con el objetivo de pronosticar la respuesta al tratamiento con agentes que reconocen el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B, como por ejemplo rituximab, por parte de pacientes con AR. Por lo tanto, no se ha localizado en el estado de la técnica ninguna evidencia relacionada con la utilización de los genes citados en la presente invención, los cuales, tal y como se explica en la descripción, han sido específicamente seleccionados mediante un exhaustivo proceso de cribado entre miles de genes.

Así, la presente invención soluciona los problemas planteados en el estado de la técnica presentando un método para el pronóstico o predicción de los pacientes que se pueden beneficiar del tratamiento con agentes que reconocen el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B y su diferenciación de los pacientes no respondedores a dicho tratamiento que serán focalizados hacia terapias alternativas.

Descripción de la invención

La presente invención se refiere a un método in vitro para el pronóstico o predicción de la respuesta al tratamiento con agentes que reconocen el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B por parte de pacientes con AR, que comprende la determinación en una muestra de sangre de dichos pacientes y mediante la cuantificación del nivel de expresión transcripcional (ARNm), antes de iniciar el tratamiento, de al menos uno de los genes seleccionado de las Tablas 1 a 3, particularmente del grupo: ARG1, CPD, TRAF1, C1QA, LRRN3, HLA-DQA1, NLK, TLR4, LOC89944, TOM1L1, BACH, NCALD, EIF2C2, NFIC, PCDHB7, FLJ32770, ARID3A, C14ORF9, CSNK1E, BCAS1, TEAD2, C6orñ45 y SNTA1; y la comparación de dicho nivel de expresión con respecto a los valores de expresión previamente obtenidos de pacientes que demostraron ser respondedores al tratamiento o no respondedores al mismo.

En una realización preferida de la invención dicho pronóstico se realiza a través del valor de expresión resultante del ratio ARG1/TRAF1 en sangre total. En los pacientes no respondedores la expresión de ARG1 es superior a TRAF1 (ratio positivo) y en todos los pacientes respondedores es al revés (ratio negativo). A su vez, la elevada expresión de ARG1 está claramente asociada a la falta de respuesta así como la elevada expresión de TRAF1 es predictiva de una respuesta clínica a rituximab favorable.

Tal y como se observa en las Tablas 1 a 3, debe tenerse en cuenta que, de entre los genes particularmente preferidos, los genes sobre-expresados en pacientes respondedores o infra-expresados en pacientes no-respondedores antes de iniciar el tratamiento son:

• TRAF1, LRRN3 y NLK en sangre total.

• TLR4, TOM1L1, PCDHB7 y FLJ32770 en células CD4+T.

• C14ORF9, CSNK1E, BCAS1, TEAD2, C6orf145 y SNTA1 en células B.

Además, de entre los genes particularmente preferidos, los genes infra-expresados en pacientes respondedores o sobre-expresados en pacientes no-respondedores antes de iniciar el tratamiento son:

• ARG1, CPD, C1QA y HLA-DQA1 en sangre total.

• LOC89944, BACH, NCALD, EIF2C2 y NFIC en células CD4+T.

• ARID3A en células B.

Así, el problema técnico resuelto por la presente invención se refiere a un método in vitro para el pronóstico o predicción de la respuesta al tratamiento con agentes que reconocen el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B (como por ejemplo rituximab) por parte de pacientes aquejados de AR, a partir de células sanguíneas tomadas de muestras de sangre total de dichos pacientes (comprenden el 100% de las poblaciones celulares en ella presentes y no sólo de las células PBMCs), que... [Seguir leyendo]

1. Método in vitro para el pronóstico o predicción de la respuesta al tratamiento con agentes que reconocen el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B por parte de pacientes con artritis reumatoide, que comprende la determinación en una muestra de células sanguíneas de dichos pacientes del nivel de expresión de al menos uno, de cualquier combinación o de la totalidad de los genes seleccionados del grupo: ARG1, CPD, TRAF1, C1QA, LRRN3, HLA-DQA1, NLK, TLR4, LOC89944, TOM1L1, BACH, NCALD, EIF2C2, NFIC, PCDHB7, FLJ32770, ARID3A, C14orf9, CSNK1E, BCAS1, TEAD2, C6orf145 y SNTA1; y la comparación de dicho nivel de expresión con respecto a los valores de expresión obtenidos de pacientes respondedores al tratamiento y no respondedores al mismo.

2. Método in vitro, según la reivindicación 1, caracterizado porque la determinación del nivel de expresión de los genes ARG1, CPD, TRAF1, C1QA, LRRN3, HLA-DQA1 y NLK se realiza en muestras de sangre total.

3. Método, según la reivindicación 1, caracterizado porque el pronóstico se realiza atendiendo al valor de expresión obtenido del ratio ARG1/TRAF1, sin necesidad de comparar el valor del ratio con respecto a los valores de expresión obtenidos de pacientes respondedores al tratamiento y no respondedores al mismo, donde un ratio ARG1/TRAF1 positivo predice de forma directa que los pacientes no responderán al tratamiento y un ratio ARG1/TRAF1 negativo predice de forma directa que los pacientes responderán al tratamiento.

4. Método in vitro, según la reivindicación 1, caracterizado porque la determinación del nivel de expresión de los genes TLR4, LOC89944, TOM1L1, BACH, NCALD, EIF2C2, NFIC, PCDHB7 y FLJ32770 se realiza en células CD4+T.

5. Método in vitro, según la reivindicación 1, caracterizado porque la determinación del nivel de expresión de los genes ARID3A, C14ORF9, CSNK1E, BCAS1, TEAD2, C6orf145 y SNTA1 se realiza en células B.

6. Método in vitro, según la reivindicación 1, que comprende la determinación del nivel de expresión del conjunto de genes: ARG1, TRAF1, TLR4 y ARID3A.

7. Método in vitro, según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque los genes TRAF1, LRRN3 y NLK están sobre-expresados en sangre total, el grupo de genes TLR4, TOM1L1, PCDHB7 y FLJ32770 están sobre-expresados en células CD4+T y el grupo de genes C14ORF9, CSNK1E, BCAS1, TEAD2, C6orf145 y SNTA1 están sobre-expresados en células B; en pacientes respondedores antes de iniciar el tratamiento.

8. Método in vitro, según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque los genes ARG1, CPD, C1QA y HLA-DQA1 están infra-expresados en sangre total, el grupo de genes LOC89944, BACH, NCALD, EIF2C2 y NFIC están infra-expresados en células CD4+T y el gen ARID3A están infra-expresados en células B; en pacientes respondedores antes de iniciar el tratamiento.

9. Método, según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque el nivel de expresión de los genes es determinado mediante la cuantificación del nivel de ARNm en la muestra de células sanguíneas.

10. Método in vitro, según la reivindicación 1, caracterizado porque el agente que reconoce el receptor de membrana CD20 de los linfocitos B es rituximab.