MÉTODO EN TIEMPO REAL PARA DETECTAR TRASTORNOS INFLAMATORIOS AGUDOS.

Un método para diagnosticar o monitorear lupus eritematoso sistémico (SLE) en un individuo,

el método caracterizado porque comprende: (a) determinar el nivel de un componente de trayectoria del complemento C4d en un reticulocito del individuo y (b) comparar el nivel del componente de trayectoria del complemento C4d con un nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d, en donde una diferencia del nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d indica que el individuo tiene SLE

CAMPO DE LA INVENCION

Esta invención se refiere al diagnóstico y/o supervisión de pacientes con enfermedades o condiciones inflamatorias, que incluyen lupus eritematoso sistémico, particularmente para el diagnóstico de la etapa aguda de la enfermedad, que incluye métodos y kits para llevar a cabo esta actividad. Esta descripción presenta el descubrimiento sorprendente de que los niveles de componentes de trayectoria del complemento en los reticulocitos se pueden usar para diagnosticar, monitorear o predecir la ocurrencia de episodios agudos de enfermedades o condiciones inflamatorias crónicas. ANTECEDENTES DE LA INVENCION

Esta invención se refiere al diagnóstico y/o supervisión de pacientes con un episodio agudo de una enfermedad o condición inflamatoria. En algunas modalidades la enfermedad o condición inflamatoria es lupus eritematoso sistémico (SLE). La invención también proporciona un medio para predecir el inicio de un episodio agudo de una enfermedad o condición inflamatoria, que incluye SLE.

La supervisión de la actividad de la enfermedad también es problemática en el cuidado de pacientes con enfermedades o condiciones inflamatorias. Las enfermedades o condiciones inflamatorias crónicas progresan frecuentemente en una serie de reacciones eritematosas, o períodos de enfermedad aguda, seguido por remisiones. A través del tiempo, sin embargo, estas reacciones eritematosas pueden conducir al daño irreversible de órganos. A fin de minimizar este daño, la detección temprana y más precisa de reacciones eritematosas de la enfermedad no únicamente expedirían tratamiento apropiado, sino reducirían la frecuencia de intervenciones innecesarias. Desde un punto de vista de investigación, la capacidad de describir uniformemente “grado de inflamación” o actividad de enfermedad en los sistemas de órganos individuales o como una medición general es una herramienta de búsqueda invaluable. Adicionalmente, se puede usar una medición de actividad de la enfermedad como una respuesta variable en un análisis terapéutico. De esta manera, existe una necesidad por métodos confiables para diagnosticar o predecir la etapa aguda de la enfermedad o condición inflamatoria, que incluye

SLE. La presente invención cumple estas y otras necesidades.

La técnica antecedente relevante se puede encontrar en las siguientes referencias: Lach E y colaboradores: “Complement receptor 1 (CD35) on human reticulocytes” Experimental and Clinical Immunogenetics, vol. 14, no. 1, (1997), página 75. Meliconi R y colaboradores; “Complement activation products in Idiopathic Pulmonary Fibrosis relevance of fragment BA to disease severity” Clinical Immunology and Immunopathology, San Diego, CA US, Vol. 57, no. 1 (1990) páginas 64 -73. Tsuboi Y y colaboradores: “Increased concentration of C4d complement protein CSF in amyotrophic lateral scierosis” Journal of Neurology Neurosurgery and Psychiatry, vol. 57 (1994) páginas 859-861.

El documento WO 03 022223 contiene la descripción que se relaciona con el diagnóstico y supervisión de lupus eritematoso sistémico y escleroderma. Lach-Trifilieff y colaboradores; “Complement receptor 1 (CD35) on human reticulocytes: Normal expression in Systemic Lupus Erythematosus and HIC-Infected patients” Journal of Innunology. Vol. 162 no. 12, (1999) páginas 75497554. Tausk y colaboradores: “The expression of C3b receptors in the differentiation of Discoid Lupus Erythematosus and Systemic Lupus Erythematosus “Arthritis Rheum. Vol. 33, no. 6 (1990) páginas 999-892. Yamada y colaboradores: “Complement-activated oligodendroglia; a new pathogenic entity identified by immunostaining with antibodies to human complement proteins C3d and C4d” Neuroscy Lett. Vol. 112 (1990) páginas 161-166. BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION

La presente invención proporciona:

(1) Un método para diagnosticar o monitorear lupus eritematoso sistémico (SLE) en un individuo, el método que comprende:

(a) determinar el nivel de un componente de trayectoria del complemento C4d en un reticulocito del individuo y

(b) comparar el nivel del componente de trayectoria del complemento C4d con un nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d, en

donde una diferencia del nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d indica que el individuo tiene SLE.

(2) Un método para predecir lupus eritematoso sistémico (SLE) en un individuo, el método que comprende:

(a) determinar el nivel de un componente de trayectoria del complemento C4d en un reticulocito del individuo y

(b) comparar el nivel del componente de trayectoria del complemento C4d con un nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d, en donde una diferencia del nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d indica que el individuo tiene SLE.

(3) El método del (1) o (2), en donde el nivel de más de un componente de trayectoria del complemento se determina y se compara a un control.

(4) El método del (1) o (2), en donde el nivel del componente de trayectoria del complemento C4d se determina usando un anticuerpo específico para el componente de trayectoria del complemento C4d.

(5) El método de (4), en donde se etiqueta el anticuerpo C4d.

(6) El método de (4), en donde se detecta el anticuerpo C4d usando el análisis citométrico de flujo.

(7) Un medio legible por computadora ejecutable por una computadora digital para el uso en el método de cualquiera de (1) al (6), el medio legible por computadora que comprende:

(a) un código para recibir datos que corresponden a una determinación del componente de trayectoria del complemento C4d depositado sobre las superficies de los reticulocitos;

(b) un código para recuperar un valor de referencia para el nivel del componente de trayectoria del complemento C4d depositado sobre las superficies de los reticulocitos de los individuos;

(c) un código para comparar los datos en (a) con el valor de referencia en (b). BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

La Figura 1 proporciona una gráfica que representa los valores de los valores medios de fluorescencia para los pacientes con SLE y controles saludables. R-C4 se refiere a niveles C4d sobre la superficie de los reticulocitos. Los valores para los pacientes con SLE se muestran a la izquierda; los valores para los controles saludables se muestran a la derecha. La Figura 2 proporciona datos de citometría de flujo de dos colores de cada uno de los tres pacientes individuales con SLE. Los niveles C4d se muestran en los paneles de la derecha, mientras que los controles de isotipo igualado se muestran en los paneles de la izquierda. Se realizó la citometría de flujo de dos colores usando un anticuerpo anti-Cd4 etiquetado (eje Y) y un anticuerpo receptor de anti-transferina etiquetado (eje X). Los reticulocitos positivos de C4d se muestran en el cuadrante derecho superior de los paneles. Se muestran los resultados de tres pacientes con SLE. 93%, 47.8% y 14.5% de reticulocitos exhibieron tinción de C4d. Los anticuerpos de control no se enlazan a los reticulocitos, lo que indica que el enlace del anticuerpo C4d es específico.

La Figura 3 proporciona datos que muestran niveles de C4d en los reticulocitos de un paciente con SLE en tres puntos de tiempo: Febrero de 2002 (fila superior), Julio de 2002 (fila del medio) y Agosto de 2002 (fila de abajo). La tinción de C4d en los glóbulos rojos no fraccionados, por ejemplo, eritrocitos y reticulocitos, se muestra en la columna de la izquierda. La columna de en medio muestra la citometría de flujo de dos colores que usa un anticuerpo antiCd4 etiquetado (eje Y) y un anticuerpo receptor de anti-transferina etiquetado (eje X) en diferentes puntos de tiempo. Los reticulocitos positivos de C4d se muestran en el cuadrante derecho superior de los paneles. La columna de la derecha muestra una comparación de los niveles de C4d en los eritrocitos y los reticulocitos en diferentes puntos de tiempo. Los eritrocitos y los reticulocitos se separaron mediante centrifugación gradiente de densidad. La elución de las células más viejas comienza en las fracción 1. Los reticulocitos se encuentran con la elución de las células más jóvenes en la fracción 15. El eje vertical muestra los niveles de C4d sobre la superficie de las células.

Las Figuras 4A-4D muestran que los niveles de C4d del reticulocito son significativamente elevados en pacientes con SLE y fluctúan a través del tiempo. (A) Los reticulocitos de pacientes con SLE tienen niveles significativamente más altos de C4d que aquellos de los pacientes con otras enfermedades o controles saludables....

1. Un método para diagnosticar o monitorear lupus eritematoso sistémico (SLE) en un individuo, el método caracterizado porque comprende:

(a) determinar el nivel de un componente de trayectoria del complemento C4d en un reticulocito del individuo y

(b) comparar el nivel del componente de trayectoria del complemento C4d con un nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d, en donde una diferencia del nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d indica que el individuo tiene SLE.

2. Un método para predecir lupus eritematoso sistémico (SLE) en un individuo, el método caracterizado porque comprende:

(a) determinar el nivel de un componente de trayectoria del complemento C4d en un reticulocito del individuo y

(b) comparar el nivel del componente de trayectoria del complemento C4d con un nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d, en donde una diferencia del nivel de control del componente de trayectoria del complemento C4d indica que el individuo tiene SLE.

3. El método de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque el nivel de más de un componente de trayectoria del complemento se determina y se compara con un control.

4. El método de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque el nivel del componente de trayectoria del complemento C4d se determina usando un anticuerpo específico para el componente de trayectoria del componente C4d.

5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el anticuerpo C4d se etiqueta.

6. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el anticuerpo C4d se detecta usando análisis citométrico de flujo.

7. Un medio legible por computadora ejecutable por una computadora digital para el uso en el método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, el medio legible por computadora caracterizado porque comprende:

5 (a) un código para recibir datos que corresponden a una determinación del componente de trayectoria del complemento C4d depositado sobre las superficies de los reticulocitos;

(b) un código para recuperar un valor de referencia para el nivel del

componente de trayectoria del complemento C4d depositado sobre las 10 superficies de los reticulocitos de los individuos;

(c) un código para comparar los datos en (a) con el valor de referencia en (b).