ESTABILIZACIÓN DE CONJUGADOS QUE COMPRENDEN UNA MOLÉCULA CONECTORA DE TIOUREA.

Estabilización de conjugados que comprenden una molécula conectora de tiourea Antecedentes de la invención La presente invención da a conocer una composición que contiene un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea y tiourea o un derivado de la misma en forma libre. Asimismo, se refiere a un método para estabilizar un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea, comprendiendo el método las etapas de proporcionar el conjugado, añadir al mismo tiourea o un derivado de la misma en forma libre, y estabilizar de esta manera el conjugado, y a la utilización de una composición que contiene un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea y tiourea o un derivado de la misma en forma libre. El químico dispone de una gran diversidad de moléculas conectoras homobifuncionales y heterobifuncionales para unir covalentemente entre sí dos grupos de interés mediante dicha molécula conectora. La tiourea es una molécula conectora corta homobifuncional. Puede intentarse la utilización de la tiourea como molécula conectora tras evaluar las moléculas conectoras homobifuncionales para su aplicabilidad a la unión de dos grupos entre sí con el fin de obtener un conjugado de estos dos grupos unidos entre sí covalentemente mediante la molécula conectora de tiourea. En algunos casos la utilización de la tiourea comporta efectos deseados y ventajosos adicionales. Dichas propiedades ventajosas de una molécula conectora de tiourea han sido descritas en, por ejemplo, la patente US nº 6.586.460. Una molécula conectora de tiourea también puede suponer, por ejemplo, que ésta mantenga la distancia correcta entre dos grupos de interés. En otros casos determinados, los grupos reactivos presentes en los grupos que deben unirse entre sí justifican la utilización de tiourea. Alternativamente, puede ocurrir que se sintetice un primer producto intermediario que comprenda uno de los grupos de interés y tiourea ya unida al mismo, permitiendo de esta manera el acoplamiento a un segundo grupo de interés a través del grupo amino libre de tiourea todavía disponible para dicho acoplamiento. Samuel Achilefu et al. (J. Med. Chem. 45:2003-2015, 2002) informan de un conjugado entre la fluoresceína y un péptido carbocianina que comprende tiourea como molécula conectora. La patente WO nº 2006/032441 describe, por ejemplo, conjugados entre el isotiocianato de fluoresceína y la celobiosa o manosa, respectivamente. Con frecuencia, una molécula conectora de tiourea simplemente representará la molécula conectora homobifuncional de elección más conveniente. Una molécula conectora de tiourea, en el caso de que un conjugado que comprenda dicha molécula conectora se almacene con cuidado, habitualmente será bastante estable. Sin embargo, en los casos en que no puedan controlarse extensivamente las condiciones de almacenamiento, por ejemplo durante el transporte en una cadena de transporte no refrigerada, un conjugado que comprenda una molécula conectora de tiourea podría deteriorarse. También pueden ponerse de manifiesto efectos negativos de estrés térmico, que requieran medidas compensatorias bajo condiciones de estrés durante el transporte. En el caso de que, por ejemplo, se utilice a modo de material denominado trazador en un inmunoensayo un conjugado que comprende dos grupos, por ejemplo un analito y un marcaje unido covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea, dicho reactivo debería ser estable durante el máximo tiempo posible, tanto durante el transporte como también cargado en un analizador. Evidentemente resultaría bastante ventajoso evitar el deterioro de un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea y se protegiera o estabilizara de esta manera el conjugado. Mediante dicha estabilización se reduciría el deterioro del conjugado. Esto podría conducir, por ejemplo, a una estabilidad mejorada durante el envío de dicho conjugado o bajo condiciones de almacenamiento de largo plazo. Ahora se ha encontrado y se ha establecido que la tiourea en forma libre o un derivado apropiado de la misma, en caso de que se añade a un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea, resulta muy efectiva en la reducción del deterioro de dicho conjugado. Las composiciones y métodos descritos en la presente invención aparentemente resultan apropiados para mejorar la estabilidad de un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea, tanto bajo condiciones de transporte como cargado en un analizador. 2   Descripción resumida de la invención La presente invención da a conocer una composición que contiene un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea y tiourea o un derivado de la misma en forma libre. Se describe un método para estabilizar un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea, comprendiendo el método las etapas de proporcionar el conjugado, añadir al mismo tiourea o un derivado de la misma en forma libre y estabilizar de esta manera el conjugado. También se da a conocer la amplia aplicabilidad y utilización de la tiourea o de un derivado apropiado de la misma como estabilizador de un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea. Descripción detallada de la invención En una primera realización, la presente invención se refiere a una composición que contiene un conjugado purificado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea y tiourea o un derivado de la misma según se define en las reivindicaciones en forma libre. Tal como se ha indicado anteriormente, los inventores de la presente invención han encontrado que la tiourea en forma libre puede estabilizar un conjugado que comprende un enlace tiourea, siendo esto especialmente cierto en el caso de que el conjugado que requiere estabilización ha sido almacenado en forma líquida. Tal como apreciará el experto en la materia, dicho efecto estabilizador no requiere necesariamente la utilización de tiourea libre, debido a que también pueden utilizarse derivados de tiourea que muestran propiedades químicas similares con respecto a la estabilización. El experto en la materia podrá seleccionar fácilmente los derivados de tiourea apropiados. Son ejemplos apropiados, aunque no limitativos, de derivados de tiourea, ditiobiurea, N-acetiltiourea, 2-imidazolintiona, N,N'-dimetiltiourea, 1-metil-2-tiourea y 1,1,3,3-tetrametil-2-tiourea. Preferentemente el derivado de tiourea se encontrará en la forma alquilada de tiourea, en la que uno, dos, tres o la totalidad de los cuatro átomos de hidrógeno de la tiourea se sustituyen con alquilo inferior, es decir, con un alquilo de seis o menos átomos de carbono. Preferentemente dicho alquilo será metilo y/o etilo. Otros sustituyentes preferentes en uno o ambos nitrógenos de la tiourea comprenden acetilo, alquenilo C1-C6 y tiourea. En un derivado de tiourea preferente adicional, se encuentra presente un puente alquilo o alquileno entre los dos átomos de nitrógeno, presentando dos o tres átomos de C. Tal como apreciará el experto en la materia, también resulta posible utilizar una mezcla de tiourea libre y un derivado de tiourea, o utilizar una mezcla de diferentes derivados de tiourea con el fin de estabilizar un conjugado que comprenda una molécula conectora de tiourea. El término "purificado" se refiere al nivel del conjugado deseado en comparación con el nivel de los intermediarios de reacción y de los productos secundarios de reacción. Un conjugado purificado es una preparación de dicho conjugado que consiste de por lo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o por lo menos 99% del conjugado de interés. Los niveles de pureza preferentes son por lo menos 90%, por lo menos 95% o por lo menos 98%, respectivamente. Los grupos unidos covalentemente mediante un puente tiourea pueden ser cualquier grupo de interés en la química orgánica o en la bioquímica. Preferentemente, por lo menos un grupo presentará un peso molecular de 100 daltons o más, o también preferentemente 150 ó 200 daltons o más. También preferentemente, ambos grupos presentarán un peso molecular de 100 daltons o más, o también preferentemente 150 ó 200 daltons o más. Preferentemente, por lo menos uno de los grupos grupos unidos mediante una molécula conectora de tiourea presentará un peso molecular de 20.000 daltons o inferior, también preferentemente de 10.000 daltons o inferior, o de 5.000 daltons o inferior. Preferentemente, el conjugado comprendido en una composición según... [Seguir leyendo]

1. Composición que contiene: a) un conjugado purificado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea, y b) tiourea o un derivado de la misma en forma libre, en la que dicho derivado de tiourea se selecciona de entre ditiobiurea, tiourea alquilada que presenta uno, dos, tres o la totalidad de los cuatro átomos de hidrógeno de la tiourea sustituidos con alquilo de seis o menos átomos de carbono, tiourea que presenta uno o ambos nitrógenos con acetilo o alquenilo C1-C6, y tiourea que presenta un puente alquilo o alquileno entre los dos átomos de nitrógeno de dos o tres átomos de C. 2. Composición según la reivindicación 1, en la que dicho conjugado comprende por lo menos un primer grupo que es capaz de unirse a una pareja de unión. 3. Composición según la reivindicación 2, en la que dicho grupo es capaz de unirse a un anticuerpo. 4. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicho conjugado comprende por lo menos un segundo grupo que es un grupo de marcaje. 5. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la tiourea en forma libre se encuentra presente en por lo menos concentración equimolar a la de la molécula conectora de tiourea comprendida en el conjugado. 6. Método para estabilizar un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea, comprendiendo el método: a) proporcionar el conjugado, b) añadir al mismo tiourea o un derivado de la misma en forma libre, y c) estabilizar de esta manera el conjugado, en el que dicho derivado de tiourea se selecciona de entre ditiobiurea, tiourea alquilada que presenta uno, dos, tres o la totalidad de los cuatro átomos de hidrógeno de la tiourea sustituidos con alquilo de seis o menos átomos de carbono, tiourea que presenta uno o ambos nitrógenos con acetilo o alquenilo C1-C6, y tiourea que presenta un puente alquilo o alquileno entre los dos átomos de nitrógeno de dos o tres átomos de C. 7. Método según la reivindicación 6, en la que dicho conjugado comprende por lo menos un primer grupo que es capaz de unirse a una pareja de unión. 8. Método según la reivindicación 6 ó 7, en el que dicho conjugado comprende por lo menos un segundo grupo que es un grupo de marcaje. 9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en el que se añade la tiourea en forma libre, resultando en una concentración final que es por lo menos una concentración equimolar a la de la molécula conectora de tiourea comprendida en el conjugado. 10. Utilización de tiourea o de un derivado de la misma como estabilizador para un conjugado que comprende dos grupos unidos covalentemente mediante una molécula conectora de tiourea, en la que dicho derivado de tiourea se selecciona de entre ditiobiurea, tiourea alquilada que presenta uno, dos, tres o la totalidad de los cuatro átomos de hidrógeno de la tiourea sustituidos con alquilo de seis o menos átomos de carbono, tiourea que presenta uno o ambos nitrógenos con acetilo o alquenilo C1-C6, y tiourea que presenta un puente alquilo o alquileno entre los dos átomos de nitrógeno de dos o tres átomos de C. ---   11   12   13   14