COMPOSICIONES ÚTILES COMO LIGANDOS PARA EL RECEPTOR DE TIPO RECEPTOR 1 DE PÉPTIDOS FORMILADOS Y MÉTODOS DE USO DE LAS MISMAS.

Composiciones útiles como ligandos para el receptor de tipo Receptor 1 de péptidos formilados y métodos de uso de las mismas. Campo de la invención La invención se refiere a composiciones útiles como ligandos para el receptor de Tipo Receptor 1 de Péptidos formilados y a los métodos de uso de las mismas. Antecedentes Las quimioquinas (citoquinas quimiotácticas) actúan como balizas moleculares para el reclutamiento y la activación de linfocitos T, neutrófilos y macrófagos, marcando los campos de batalla con patógenos. El reclutamiento de leucocitos, los glóbulos blancos de la sangre responsables de la lucha contra las infecciones depende de los gradientes de quimioquinas. Las quimioquinas son una superfamilia de proteínas pequeñas (8-10 KD) que median diversos procesos biológicos incluyendo el tráfico y retorno de leucocitos, la inmunorregulación, la hematopoyesis y la angiogénesis. Hasta la fecha, se conocen 24 receptores de quimioquinas. Las quimioquinas juegan un papel fundamental en la inmunidad innata y las reacciones inflamatorias (Baggiolini et al. (1994); Baggiolini et al. (1997); Rollins (1997).) Se han descrito cuatro subfamilias de quimioquinas, basándose en la distancia entre los dos primeros residuos de cisteína conservados: C, CC, CXC, y CX3C. Todas las quimioquinas conocidas señalizan a través de cuatro grupos de receptores de siete dominios transmembrana que pertenecen a los receptores acoplados a proteína G y proteínas G heterotriméricas sensibles a la toxina de pertussis de la familia Gi: XCR, CCR, CXCR y CX3CR. (Murphy et al. (2000)). Los eventos de unión extracelular pueden activar las rutas de transducción de la señal específicas que conducen a diferentes respuestas, tales como la quimiotaxis. En el sistema de quimioquinas, múltiples quimioquinas pueden activar un único receptor de quimioquina; por ejemplo, el receptor CCR1 liga las quimioquinas RANTES (regulada en la activación de células T normales expresadas), MIP-1 (una proteína inflamatoria de macrófagos) y MIP-1ß. Del mismo modo, una única quimioquina puede activar varios receptores (Mantovani (1999)). Los monocitos y neutrófilos, que juegan un importante papel en la patogénesis de la inflamación y en la presentación de antígenos, responden a las quimioquinas (Lee et al. (2000)). Los monocitos expresan los receptores de quimioquinas CCR1, CCR2, CCR5, CCR8, CXCR2, y CXCR4. (Uguccioni et al. (1995); Weber et al. (2000)). Se ha informado sobre los ligandos MIP-1 y la Proteína 1 Quimioatrayente de Monocitos (MCP1) como activadores de monocitos potentes in vitro. (Fantuzzi et al. (1999).) Los neutrófilos son cruciales durante muchas respuestas inflamatorias agudas, y también pueden jugar un papel en la orientación de la inmunidad hacia las respuestas Th1. (Bonecchi et al. (1999).) Responden principalmente a algunas quimioquinas CXC pero no migran para la mayor parte de las quimioquinas CC. Los neutrófilos humanos expresan dos receptores de IL-8 de alta afinidad, CXCR1 y CXCR2. La quimioquina CKß8, también conocida como CCL23; hmrp-2a; factor inhibidor de los progenitores mieloides 1 (MPIF-1); SCYA23 (nomenclatura actual y sistema ID Genoma), es una quimioquina CC de 99 aminoácidos que contiene seis cisteínas. Es expresada constitutivamente en hígado, pulmón, páncreas, y médula ósea. La CKß8 tiene actividad quimiotáctica sobre monocitos, células dendríticas, y linfocitos en reposo (Forssmann et al. (1997)) e inhibe la formación de colonias de las células formadoras de colonias potenciales poco proliferativas derivadas de médula ósea. (Patel et al. (1997)). Se ha informado sobre CKß8-1, una forma de empalme alternativa de CKß8 que tiene 116 aminoácidos de longitud. Ambas formas maduras CKß8 y CKß8-1 han sido asignadas como ligandos para el receptor CCR1. (Youn et al. (1998)). Los estudios de desensibilización cruzada tanto en monocitos como en eosinófilos indican que CKß8-1 se une predominantemente a CCR1. El procesamiento adicional en el extremo NH2 de CKß8 da como resultado proteínas de 76 o 75 residuos que son significativamente más activos sobre las células que expresan CCR1 (Macphee et al. (1998), Berkhout et al. (2000)). Además de los receptores de quimioquinas, los neutrófilos y monocitos también expresan el receptor de Péptidos Nformilados acoplados a proteína G (FPR) y su receptor de tipo 1 de Péptidos N-formilados (FPRL1) homólogo. Puesto que los ligandos para FPRL1 eran desconocidos cuando fue clonado originalmente, FPRL1 fue definido inicialmente como un receptor de orfano. (Bao et al. (1992); Murphy et al. (1992); Ye et al. (1992).) Fue asignado como un receptor de LXA4 puesto que se une a lipoxina A4 (Fiore et al. (1994).) Además, se ha informado de que varios péptidos/proteínas diferentes se unen a FPRL1 con una baja afinidad (véase la Figura 1). Se ha informado de que un amiloide A del suero, una proteína secretada durante la fase aguda de la inflamación, ha sido referida como ligando funcional de afinidad media (Su et al. (1999)). Un fragmento ß-amiloide (1-42) y un péptido priónico neurotóxico 106-126 también son ligandos de baja afinidad, indicando que FPRL1 puede jugar un papel en las enfermedades neurodegenerativas (Le et al. (2001)). Algunos otros ligandos de baja afinidad incluyen: péptidos derivados de las proteínas de la envoltura del VIH (Su et al. (1999), Deng et al. (1999)); y un péptido de Helicobacter pylori, Hp (2-20). Algunos péptidos sintéticos, tales como Trp-Lys-Tyr-Met-Val-D-Met- NH2 (WKYMVm) y Trp-Lys- 2   Tyr-Met-Val-Met-NH2 (WKYMVM) ("péptidos W 1 y 2"), han sido referidos como ligandos potentes para el receptor. (Christophe et al. (2001); Baek et al. (1996)). No obstante, no se ha demostrado que estos péptidos de origen no natural derivados de genotecas de hexapéptidos al azar sean fisiológicamente relevantes. Compendio Los autores de la invención han descubierto que la variante por truncamiento de CKß8-1, CKß8- (25-116), está implicada en las reacciones inflamatorias y la inmunidad innata por medio de su papel como ligando funcional para el receptor de péptidos formilados de tipo 1 (FPRL1). Además, los autores de la presente invención han descubierto un exón de empalme alternativo de CKß8-1, denominado SHAAGtido, y las variantes truncadas y otras variantes de SHAAGtido, junto con CKß8-1 (25-116), son funcionales en ambas células que se sabe que expresan FPRL1. Los SHAAGtidos funcionales generan un flujo de calcio tras la unión receptor-ligando en leucocitos y atraen monocitos, neutrófilos, células dendríticas maduras (CDm), y células dendríticas inmaduras (CDi). En una realización, la invención incluye SHAAGtidos así como proteínas y péptidos que comprenden SHAAGtidos, con la excepción de CKß8-1 (25-116). En particular, la presente invención proporciona una proteína o polipéptido aislado que modula la actividad del receptor FPRL 1 que comprende una secuencia en su extremo N, teniendo la secuencia una identidad de al menos 90% con el SEQ ID No. 1 en toda su longitud, donde la proteína o polipéptido no es uno de los SEQ ID No. 15 y 16. Además, la invención también incluye ácidos nucleicos que codifican proteínas y péptidos que comprenden SHAAGtidos, anticuerpos que se unen específicamente a SHAAGtidos, y proteínas de fusión que comprenden SHAAGtidos. En otra realización, la invención incluye composiciones que comprenden SHAAGtidos o proteínas o péptidos que comprenden una secuencia de SHAAGtido. Tales composiciones incluyen aquellas adecuadas para la administración a un sujeto para intensificar la actividad de FPRL1. En una realización adicional, la invención incluye kits que comprenden tales composiciones. Tales kits pueden ser ensamblados para facilitar la administración, por ejemplo, de composiciones farmacéuticas. Asimismo se describen los métodos para tratar a un sujeto por un trastorno que comprende modular la actividad de un receptor FPRL1 administrando un compuesto que comprende un SHAAGtido o proteínas o péptidos que comprenden una secuencia de SHAAGtido. En un aspecto adicional, la invención incluye los métodos y también están incluidos en la presente invención los kits útiles para la identificación de tales antagonistas. Tales métodos comprenden la etapa de poner en contacto un receptor FPRL1 con una composición que comprende un SHAAGtido biológicamente activo, o una proteína o péptido que comprende una secuencia de SHAAGtido, en presencia de una molécula antagonista candidato. Los antagonistas para la función del receptor FPRL1 pueden ser identificados como aquellos compuestos que reducen la actividad del receptor en comparación con la observada en ausencia del compuesto candidato. DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura 1. Tabla que muestra los ligandos de baja afinidad endógenos FPRL1 referidos y los ligandos no naturales. Figura 2. Figura... [Seguir leyendo]

1. Una proteína o polipéptido aislados que modulan la actividad del receptor FPRL1 que comprenden una secuencia en su extremo N, teniendo la secuencia una identidad de al menos 90% con el SEQ ID No. 1 a lo largo de toda su longitud, donde la proteína o el polipéptido no es uno de los SEQ ID Nos. 15 y 16. 2. La proteína o polipéptido aislados de la reivindicación 1, donde dicha secuencia N-terminal tiene una identidad de al menos 95% con el SEQ ID No. 1. 3. La proteína o polipéptido aislados de la reivindicación 1, donde la secuencia N-terminal tiene una identidad de secuencia del 100% con el SEQ ID No. 1. 4. La proteína o polipéptido aislados de la reivindicación 1, donde dicha secuencia N-terminal es el SEQ ID No. 1 o el SEQ ID No. 6. 5. Una proteína o polipéptido aislados que comprenden una secuencia que corresponde al SEQ ID NO. 3 en el extremo N terminal, donde el polipéptido no es uno de los SEQ ID No. 15 y 16. 6. Un kit que comprende una composición farmacéutica que comprende la proteína o polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, un portador farmacéuticamente aceptable, y una jeringa. 7. Un ácido nucleico aislado que codifica la proteína o polipéptido de la reivindicación 1. 8. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 7 que comprende una secuencia de ácido nucleico que tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID No. 20. 9. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 7, que comprende una secuencia de ácido nucleico que tiene una identidad de al menos 95% con el SEQ ID No. 20. 10. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 7, que comprende una secuencia de ácido nucleico que tiene una identidad de al menos 99% con el SEQ ID No. 20. 11. Un ácido nucleico aislado que tiene una secuencia complementaria al ácido nucleico de la reivindicación 10. 12. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 10, que comprende el SEQ ID No. 20 o el SEQ ID No. 25. 13. Una proteína de fusión que comprende la proteína o polipéptido de la reivindicación 1 fusionados a una proteína o polipéptido que no son la proteína o polipéptido del SEQ ID No. 1. 14. Un método de identificación de un modulador de la unión de una proteína o polipéptido que comprende una secuencia N-terminal, donde la secuencia N-terminal tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID No. 1, a un receptor FPRL1, que comprende: poner en contacto una célula que expresa un receptor FPRL1 con un compuesto candidato en presencia de una proteína o polipéptido marcados que comprenden una secuencia N-terminal, donde la secuencia N- terminal tiene una identidad de al menos 90% con el SEQ ID No. 1; y comparar el nivel de unión de dicha proteína o polipéptido con el receptor FPRL1 en presencia del compuesto candidato con el nivel de unión de dicha proteína o polipéptido con el receptor FPRL1 en ausencia del compuesto candidato, donde la disminución de la unión indica que el compuesto candidato es un inhibidor de la unión, y un incremento de la unión indica que el compuesto candidato es un potenciador de la unión. 15. El método de la reivindicación 14, donde el compuesto candidato es un anticuerpo, un péptido, un ácido nucleico o una molécula pequeña. 16. El método de la reivindicación 14, donde la célula es un neutrófilo, un monocito, un linfocito T o una célula dendrítica. 28 Figura 1 Ligandos de FPRL1 Referidos   Ligandos Flujo de Calcio (CE50) Migración (CE50) Unión (CE50) 2-10 nM para H 3 -LPX 250 nM para I 125 -SSA ? >0,2 M 10 M 25-50 M 5-10 M 0,1 nM (sobre 293-FPRL1) 3 ? >0,2 M >2 M >2 M >5 M ? Ligandos Endógenos: Lipoxina A4 Amiloide A del Suero ß-Amiloide(1-42) Péptido Priónico PrP(106-126) LL-37 1 83 nM para I 125- D2D3(88-274) D2D3(88-274) 2 >0,5 M 5-10 M >0,5 M 5-10 M 10 M >5 M Codificados por Virus y Bacterias: T21/DP107 (gp41 VIH) gp120(414-434) VIH Péptido de H. pylori, Hp(2-20) 4 fMLP 10 nM para I 125 -Péptido W >10 nM para I 125 -Péptido W 0,1-1 nM 1-10 nM poco nM 0,1-1 nM 1-10 nM poco nM Ligandos No Naturales: WKYMVm WKYMVM MMK-1 Notas: 1. Péptido bacteriano derivado de catelicidina humana, LL-37. 2. Activador de plasminógeno tipo uroquinasa (uPA), D2D3(88-274). 3. En neutrófilos, ni uPA ni D2D3(88-274) inducen flujo de calcio. 4. Péptido de helicobacter pylori, Hp(2-20).