Una composición que es isotónica con respecto a los seres humanos y/o está liofilizada,

composición que comprende una combinación de dos o más antígenos GBS, en la que dicha combinación incluye: i) GBS 80 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 2 o un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma; y ii) al menos uno entre GBS 91 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 11, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 104 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 19, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 184 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 24, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 276 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 27, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 305 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 32, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 322 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 37, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 330 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 40, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 338 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 42, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 361 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 45, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 404 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 48, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 690 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 50, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma, GBS 691 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 53, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma

Campo de la invención

La invención se refiere a un antígeno inmunógeno derivado de Streptococcus agalactiae (“GBS”) y a su uso en combinaciones con otros antígenos GBS para proporcionar una cobertura más amplia entre las diferentes cepas del GBS. En concreto, la invención se refiere a una composición según lo expuesto en las reivindicaciones que comprende una combinación de dos o más antígenos GBS, en la que la combinación incluye GBS 80 o un fragmento del mismo. La combinación incluye GBS 80 y, al menos, otro antígeno GBS. Por ejemplo, la combinación puede incluir GBS 80 y hasta trece antígenos GBS. En una realización preferida, la combinación puede incluir GBS 80 y hasta diez antígenos GBS. En una realización preferida más, la combinación puede incluir GBS 80 y hasta cinco antígenos GBS. En una realización, la combinación puede consistir en dos a trece antígenos GBS seleccionados de un grupo de antígenos que consiste en GBS 80, GBS 91, GBS 104, GBS 184, GBS 276, GBS 305, GBS 322, GBS 330, GBS 338, GBS 361, GBS 404, GBS 690 y GBS 691. Preferiblemente, la combinación incluye GBS 80 en combinación con uno o más de GBS 104 y GBS 322.

Antecedentes de la invención

El GBS ha surgido en los últimos 20 años como la principal causa de septicemia y meningitis neonatal, afectando a 0,5–3 de cada 1.000 nacidos vivos, y como una causa importante de morbilidad entre el grupo de mayor edad, afectando a 5–8 de cada 100.000 miembros de la población. Las estrategias actuales de tratamiento de esta enfermedad se basan en la administración de antibióticos durante el parto y en la monitorización neonatal, lo que ha reducido la mortalidad en los casos neonatales de más del 50% en los años setenta a menos del 10% en los años noventa. No obstante, todavía existe una morbilidad y una mortalidad considerables, y su tratamiento es caro. Del 15–35% de las mujeres embarazadas son portadoras asintomáticas y están en alto riesgo de transmitir la enfermedad a sus bebés. El riesgo de infección neonatal está asociado con bajos anticuerpos maternos específicos de determinados serotipos, siendo los altos títulos considerados como protectores. Además, cada vez se reconocen más casos de ancianos con la enfermedad invasiva por GBS que padecen una enfermedad subyacente, tal como la diabetes o el cáncer.

La “B” de “GBS” se refiere a la clasificación de Lancefield, que se basa en la antigenicidad de un hidrato de carbono que es soluble en ácido diluido y se denomina hidrato de carbono C. Lancefield identificó 13 tipos de hidratos de carbono C, denominados A a O, que podrían estar serológicamente diferenciados. Los organismos que infectan más comúnmente a seres humanos se encuentran en los grupos A, B, D y G. En el grupo B, las cepas se pueden dividir en al menos 9 serotipos (Ia, Ib, Ia/c, II, III, IV, V, VI, VII y VIII) en base a la estructura de su cápsula de polisacárido. En el pasado, los serotipos Ia, Ib, II y III se extendieron de igual manera en el vehículo vaginal normal y en la septicemia de aparición temprana en recién nacidos. Sin embargo, el GBS de tipo V ha surgido como una causa importante de infección por GBS en EE.UU., y las cepas de los tipos VI y VIII se han extendido entre las mujeres japonesas.

Se ha publicado la secuencia del genoma de una cepa del serotipo V 2603 V/R (Ref. 1) y se han identificado diversos polipéptidos para su uso como antígenos para vacunas (Ref. 2). Sin embargo, las vacunas que se encuentran actualmente en ensayo clínico se basan en antígenos de polisacárido. Sus desventajas son la especificidad del serotipo y su baja inmunogenicidad, y por tanto, existe la necesidad de vacunas eficaces contra la infección de S. agalactiae.

Un objeto de la invención consiste en proporcionar más y mejores composiciones para proporcionar inmunidad contra la enfermedad y/o la infección por GBS. Las composiciones se basan en una combinación de dos o más (p.ej., tres o más) antígenos GBS.

Resumen de la invención

Los solicitantes han descubierto que un antígeno GBS inmunógeno, el GBS 80, es particularmente adecuado a efectos de inmunización, especialmente, cuando se usa en combinación con otros antígenos GBS. La combinación puede incluir GBS 80 y, al menos, otro antígeno GBS o hasta trece de otros antígenos GBS según lo expuesto en las reivindicaciones. En una realización preferida, la combinación puede incluir GBS 80 y hasta 10 antígenos GBS. En una realización preferida más, la combinación incluye GBS 80 y hasta cinco antígenos GBS. En concreto, la invención se refiere a una composición que comprende una combinación de dos o más antígenos GBS, en la que la combinación incluye GBS 80 o un fragmento del mismo. En una realización, la combinación puede consistir en dos a trece antígenos GBS seleccionados del grupo que consiste en GBS 80, GBS 91, GBS 104, GBS 184, GBS 276, GBS 305, GBS 322, GBS 330, GBS 338, GBS 361, GBS 404, GBS 690 y GBS 691. Preferiblemente, la combinación consiste en GBS 80, GBS 104 y GBS 322.

**(Ver fórmula)**

En lugar del antígeno de longitud completa, la combinación puede comprender un fragmento inmunógeno del antígeno GBS seleccionado y/o una secuencia polipeptídica que tenga identidad secuencial con el antígeno seleccionado.

Preferiblemente, la combinación de antígenos GBS está constituida por tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez antígenos GBS. Todavía más preferiblemente, la combinación de antígenos GBS está constituida por tres, cuatro o cinco antígenos GBS.

Descripción detallada de la invención

La práctica de la presente invención empleará, a no ser que se indique lo contrario, procedimientos convencionales de Química, Bioquímica, Biología Molecular, Inmunología y Farmacología pertenecientes al ámbito de la técnica. Tales técnicas se explican de manera completa en la bibliografía. Véase, p.ej., “Remington's Pharmaceutical Sciences”, Mack Publishing Company, Easton, Pa., XIX Edición (1995); “Methods In Enzymology” (S. Colowick y N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.); y “Handbook of Experimental Immunology”, Vols. I–IV (D.M. Weir y C.C. Blackwell, eds., 1986, Blackwell Scientific Publications); Sambrook, et al., “Molecular Cloning: A Laboratory Manual” (II Edición, 1989); “Handbook of Surface and Colloidal Chemistry” (Birdi, K.S. ed., CRC Press, 1997); “Short Protocols in Molecular Biology”, IV ed. (Ausubel et al. eds., 1999, John Wiley & Sons); “Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course”, (Ream et al., eds., 1998, Academic Press); PCR (Introduction to Biotechniques Series), II ed. (Newton & Graham eds., 1997, Springer Verlag); Peters y Dalrymple, Fields Virology (II ed), Fields et al. (eds.), B.N. Raven Press, Nueva York, NY.

Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citadas en la presente memoria se encuentran incorporadas en el presente documento por referencia en su totalidad.

Antígenos GBS

Según lo tratado anteriormente, la invención proporciona una composición inmunógena según lo expuesto en las reivindicaciones que comprende una combinación de dos o más antígenos GBS, en la que dicha combinación incluye GBS 80 o un fragmento del mismo.

Las combinaciones de antígenos GBS pueden incluir fragmentos polipeptídicos de los antígenos GBS identificados. La longitud del fragmento puede variar en función de la secuencia de aminoácidos del antígeno GBS específico, pero el fragmento es preferiblemente de al menos 7 aminoácidos consecutivos (p.ej., 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200 o más). Preferiblemente, el fragmento comprende uno o más epítopos de la secuencia. Otros fragmentos preferidos incluyen (1) los péptidos señal N–terminales de cada antígeno GBS identificado; (2) los antígenos GBS identificados sin sus péptidos señal N–terminales y (3) cada antígeno GBS identificado en el que se han eliminado hasta 10 residuos de aminoácido (p. ej. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25

o más) del terminal N y/o el terminal C, p.ej., puede estar eliminado el residuo de aminoácido N–terminal. Otros fragmentos omiten uno o más dominios de la proteína (p.ej., la omisión de un péptido señal, de un dominio citoplasmático, de un dominio transmembrana o de un dominio extracelular).

Las combinaciones de antígenos GBS pueden incluir secuencias polipeptídicas... [Seguir leyendo]

1. Una composición que es isotónica con respecto a los seres humanos y/o está liofilizada, composición que comprende una combinación de dos o más antígenos GBS, en la que dicha combinación incluye:

i) GBS 80 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 2 o un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma; y

ii) al menos uno entre

GBS 91 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 11, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 104 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 19, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 184 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 24, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 276 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 27, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 305 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 32, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 322 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 37, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 330 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 40, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 338 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 42, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 361 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 45, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 404 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 48, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 690 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 50, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma,

GBS 691 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 53, un fragmento inmunógeno de la misma o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad secuencial del 80% o mayor con la misma.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que dicha combinación de antígenos GBS demuestra tener una mejor inmunogenicidad medida mediante el ensayo de inmunización materna activa, en la que dicho ensayo de inmunización materna activa mide los títulos en suero de ratones hembra durante un calendario de inmunizaciones y la tasa de supervivencia (%) de las crías tras la prueba de provocación.

3. La composición de la reivindicación 2, en la que la tasa de supervivencia (%) de las crías sometidas a la prueba de provocación es de al menos 2 puntos porcentuales superior a la tasa de supervivencia (%) de las crías sometidas a la prueba de provocación que proceden de ratones hembra inmunizadas con un solo antígeno distinto del GBS 80.

4. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1–3, en la que dicha combinación consiste en dos a trece antígenos GBS seleccionados entre GBS 80, GBS 91, GBS104, GBS184, GBS276, GBS305, GBS322, GBS330, GBS338, GBS361, GBS404, GBS690 y GBS691, fragmentos inmunógenos de dichos antígenos GBS, o secuencias polipeptídicas que tienen una identidad secuencial del 80% o superior con dichos antígenos GBS.

5. La composición de la reivindicación 4, en la que dicha combinación consiste en dos, tres, cuatro o cinco de dichos antígenos GBS.

6. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1–5, en la que el fragmento de GBS 80 comprende la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEC ID N.º 3, 4, 5, 6, 7, 8 y 9.

7. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1–6, en la que dicha combinación incluye GBS 80, GBS

104 y GBS 322, o fragmentos inmunógenos de dichos antígenos GBS, o secuencias polipeptídicas que tienen una identidad secuencial del 80% o mayor con dichos antígenos GBS.

8. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1–7, en la que el antígeno GBS 80, un fragmento inmunógeno o una secuencia polipeptídica que tiene una identidad del 80% o mayor con GBS 80 se expresa como

**(Ver fórmula)**

5 un polipéptido de fusión con al menos un antígeno GBS seleccionado entre GBS 91, GBS 104, GBS 184, GBS 276, GBS 305, GBS 322, GBS 330, GBS 338, GBS 361, GBS 404, GBS 690 o GBS 691, fragmentos inmunógenos de los mismos o secuencias polipeptídicas que tienen una identidad del 80% o mayor con dichos antígenos GBS.

9. La composición de la reivindicación 8 que comprende un polipéptido de fusión que consiste esencialmente en el

antígeno GBS 80 y el antígeno GBS 322, o fragmentos inmunógenos de los mismos, o secuencias polipeptídicas 10 que tienen una identidad del 80% o mayor con dichos antígenos GBS.

10. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1–9 para su uso en terapia.

11. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1–9 para el tratamiento terapéutico o profiláctico de la infección por GBS.

12. El uso de una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1–9 en la fabricación de un medicamento 15 para el tratamiento o la prevención de una infección por GBS.