Un procedimiento para el diagnóstico de una enfermedad inmunorelacionada seleccionada entre enfermedad inflamatoria intestinal o psoriasis en un mamífero,

comprendiendo dicho procedimiento detectar el nivel de expresión de un gen que codifica un polipéptido que tiene al menos una identidad de secuencia de aminoácidos del 80% con una secuencia de aminoácidos del polipéptido mostrado en la figura 2 (a) en una muestra de ensayo de células tisulares obtenidas a partir del mamífero, y (b) en una muestra de control de células tisulares normales conocidas del mismo tipo celular, en el que un nivel más alto de expresión de dicho gen en la muestra de ensayo que cuando se compara con la muestra de control es indicativa de la presencia de la enfermedad inmunorelacionada en el mamífero a partir del cual se obtuvieron las células tisulares del ensayo

Campo de la invención

La presente invención se refiere a procedimientos útiles para el diagnóstico de enfermedades inmunorelacionadas.

Antecedentes de la invención

Las enfermedades inmunorelacionadas e inflamatorias son la manifestación o consecuencia de rutas biológicas bastante complejas, a menudo múltiples interconectadas que en la fisiología normal son críticas para responder a un traumatismo o lesión, iniciar la reparación de un traumatismo o lesión, y preparan la defensa innata y adquirida frente a organismos extraños. La enfermedad o patología aparece cuando estas rutas fisiológicas normales provocan un traumatismo o lesión adicional ya sea relacionado directamente con la intensidad de la respuesta, o como consecuencia de una regulación anormal o una estimulación excesiva, o una reacción al mismo,

o como una combinación de estos.

Aunque la génesis de estas enfermedades a menudo implica rutas multietapas y a menudo sistemas/rutas biológicas múltiples diferentes, la intervención en los puntos críticos en una o más de estas rutas puede tener un efecto de mejora o terapéutico. La intervención terapéutica puede darse por antagonismo de un procedimiento/ruta perjudiciales o la estimulación de un procedimiento/ruta beneficiosos.

Se conocen muchas enfermedades inmunorelacionadas y se han estudiado de forma exhaustiva. Dichas enfermedades incluyen enfermedades inflamatorias mediadas por mecanismos inmunes, enfermedades inflamatorias no mediadas por mecanismos inmunes, enfermedades infecciosas, enfermedades de inmunodeficiencia, neoplasia, etc.

Los linfocitos T (células T) son un componente importante de una respuesta inmune de un mamífero. Los linfocitos T reconocen los antígenos que están asociados con una auto-molécula codificada por los genes del complejo principal de histocompatibilidad (MHC). El antígeno puede mostrarse junto con las moléculas de MHC en la superficie de células que presentan antígenos, células infectadas por virus, células cancerosas, injertos, etc. El sistema de linfocitos T elimina estas células alteradas que representan una amenaza para la salud del mamífero hospedador. Los linfocitos T incluyen linfocitos T colaboradores y linfocitos T citotóxicos. Los linfocitos T colaboradores proliferan de manera extensiva a raíz del reconocimiento de un complejo antígeno-MHC en un antígeno que presenta la célula. Los linfocitos T colaboradores también secretan una diversidad de citocinas, es decir, linfocinas, que desempeñan un papel central en la activación de linfocitos B, linfocitos T citotóxicos y una diversidad de otras células que participan en la respuesta inmune.

Las enfermedades inmunorelacionadas pueden tratarse por supresión de la respuesta inmune. El uso de anticuerpos neutralizantes que inhiban las moléculas que tienen actividad estimulante inmune sería beneficioso en el tratamiento de enfermedades inflamatorias y mediadas por mecanismos inmunes. Pueden utilizarse moléculas que inhiben la respuesta inmune (proteínas directamente o a través del uso de anticuerpos agonistas) para inhibir la respuesta inmune y mejorar de este modo la enfermedad inmunorelacionada.

Se sabe que los linfocitos T CD4+ son importantes reguladoras de la inflamación. En este documento, los linfocitos T CD4+ se activaron y se analizó el perfil de los genes expresado de forma diferencial tras la activación. Propiamente dicha, la activación de genes específicos puede ser una diana terapéutica potencial. Es necesaria la co-estimulación in vivo para obtener una respuesta inmune proliferativa productiva. La lista de moléculas coestimuladoras es bastante extensa y todavía no está claro qué moléculas coestimuladoras juegan únicamente funciones críticas en los diferentes tipos de fases de la inflamación. En esta solicitud, la atención se centra en un gen específicamente regulado por aumento mediante la estimulación con anti-CD3/ICAM, o anti-CD3/anti-CD28 y puede ser útil en la dirección de los procedimientos inflamatorios.

Varias enfermedades de la piel se correlacionan con una respuesta inmune aberrante a la autoinmunidad. Las enfermedades, tales como la psoriasis, se distinguen por angioedema, escamación de la piel, edema y la presencia de anticuerpos que se unen a proteínas de la piel. En esta solicitud, los experimentos determinan que un gen se regula por aumento en la piel psoriásica frente a la piel normal.

La expresión trastorno inflamatorio intestinal ("TII") describes un grupo de trastornos inflamatorios crónicos de causas desconocidas en los que el intestino (grueso) se inflama, provocando con frecuencia espasmos

o diarrea. Se estima que la prevalencia del TII en los Estados Unidos es de aproximadamente 200 casos por cada

100.000 personas. Los pacientes con TII pueden dividirse en dos grupos principales, aquellos con colitis ulcerosa ("CU") y aquellos con enfermedad de Crohn ("EC").

En pacientes con CU, existe una reacción inflamatoria que afecta esencialmente a la mucosa del colon. La inflamación es típicamente uniforme y continua sin intervenir en zonas de la mucosa normal. Las células de la mucosa superficial, así como el epitelio de las criptas y la submucosa están implicados en una reacción inflamatoria con infiltración neutrófila. Finalmente, esta situación progresa típicamente hasta provocar un daño epitelial con pérdida de células epiteliales, dando como resultado múltiples ulceraciones, fibrosis, displasia y la retracción longitudinal del colon.

La EC difiere de la CU en que la inflamación se extiende a través de todas las capas de la pared intestinal e incluye el mesenterio, así como los nódulos linfáticos. La EC puede afectar a cualquier parte del canal alimentario desde la boca hasta el ano. A menudo, la enfermedad es discontinua, es decir, los segmentos gravemente afectados por la enfermedad del intestino se separan de las zonas aparentemente no afectadas por la enfermedad. En la EC, la pared intestinal también se espesa, lo que conduce a obstrucciones. Además, no son comunes las fístulas ni las fisuras.

Clínicamente, el TII se caracteriza por diversas manifestaciones que a menudo dan como resultado un curso crónico e impredecible. A menudo, la diarrea sanguinolenta y el dolor abdominal se acompañan de fiebre y pérdida de peso. No es común la anemia, como lo es la fatiga severa. Las manifestaciones articulares varían de artralgia a artritis aguda, así como las anormalidades en la función hepática se asocian comúnmente con TII. Los pacientes con TII también tienen un riesgo mayor de padecer carcinomas de colon en comparación con la población general. Durante los "ataques" agudos de TII, normalmente el trabajo y otras actividades normales son imposibles de realizar, y a menudo el paciente es hospitalizado.

Aunque todavía se desconoce la causa de los TII, están implicados varios factores, tales como factores genéticos, infecciosos y la susceptibilidad inmunológica. El TII es mucho más común en caucásicos, especialmente aquellos con ascendencia judía. La naturaleza inflamatoria crónica de la dolencia ha impulsado una búsqueda intensa de una posible causa infecciosa. Aunque se han descubierto agentes que estimulan la inflamación aguda, no se ha descubierto que ninguno de estos provoque la inflamación crónica asociada con el TII. La hipótesis de que el TII es una enfermedad autoinmune se apoya por la manifestación extraintestinal que se ha mencionado previamente del TII como artritis en las articulares, y la respuesta positiva conocida del TII por el tratamiento con agentes terapéuticos, tales como glucocorticoides adrenales, ciclosporina y azatioprina, que se sabe que suprimen la respuesta inmune. Además, el tracto GI, más que cualquier otro órgano del cuerpo, está expuesto continuamente a sustancias antigénicas potenciales, tales como proteínas procedentes de la comida, subproductos bacterianos (LPS), etc.

Además, el riesgo de padecer cáncer de colon es altamente elevado en pacientes con colitis ulcerosa severa, particularmente si la enfermedad ha existido durante varios años. Aproximadamente el 20-25% de los pacientes con TII requieren finalmente cirugía para eliminar el colon, debido a hemorragias masivas, enfermedad crónica debilitante, perforación del colon, o riesgo de cáncer. A veces, la cirugía también se realiza cuando otros tratamientos médicos fallan, o cuando los efectos secundarios de los esteroides u otros medicamentos dañan la salud del paciente. Ya que... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para el diagnóstico de una enfermedad inmunorelacionada seleccionada entre enfermedad inflamatoria intestinal o psoriasis en un mamífero, comprendiendo dicho procedimiento detectar el nivel de expresión de un gen que codifica un polipéptido que tiene al menos una identidad de secuencia de aminoácidos del 80% con una secuencia de aminoácidos del polipéptido mostrado en la figura 2 (a) en una muestra de ensayo de células tisulares obtenidas a partir del mamífero, y (b) en una muestra de control de células tisulares normales conocidas del mismo tipo celular, en el que un nivel más alto de expresión de dicho gen en la muestra de ensayo que cuando se compara con la muestra de control es indicativa de la presencia de la enfermedad inmunorelacionada en el mamífero a partir del cual se obtuvieron las células tisulares del ensayo.

2. Un procedimiento según la reivindicación 1, el que la enfermedad inmunorelacionada es enfermedad inflamatoria intestinal.

3. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que la enfermedad inmunorelacionada es psoriasis.

4. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el polipéptido tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2.

5. Un procedimiento para el diagnóstico de una enfermedad inmunorelacionada seleccionada entre enfermedad inflamatoria intestinal o psoriasis en un mamífero, comprendiendo dicho procedimiento (a) poner en contacto un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido que tiene al menos una identidad de secuencia de aminoácidos del 80% con una secuencia de aminoácidos del polipéptido mostrado en la figura 2 con una muestra de ensayo de células tisulares obtenidas a partir de dicho mamífero y (b) detectar la formación de un complejo entre el anticuerpo y el polipéptido en la muestra de ensayo, en la que una gran cantidad de complejos formados en la muestra de ensayo es indicativa de la presencia de la enfermedad inmunorelacionada en el mamífero a partir del cual se obtuvieron las células tisulares de ensayo.

6. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que enfermedad inmunorelacionada es enfermedad inflamatoria intestinal.

7. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que la enfermedad inmunorelacionada es psoriasis.

8. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en el que el anticuerpo se une específicamente un polipéptido con la secuencia de aminoácidos del polipéptido maduro mostrado en la figura 2.