COMPOSICIÓN DE VACUNA CONTRA LA ALERGIA, PROCEDIMIENTO DE PRODUCCIÓN DE LA MISMA Y USO DE LA MISMA EN EL TRATAMIENTO DE ALERGIAS.

Composición de vacuna contra la alergia, procedimiento de producción de la misma y uso de la misma en el tratamiento de alergias. La presente invención se refiere al campo de la inmunología, específicamente a la rama de la inmunoalergia y, en particular, al uso de compuestos adyuvantes o transportadores capaces de modular la respuesta inmune a los alérgenos. El objetivo es inducir cambios en esta respuesta específica que puedan reducir o prevenir su efecto patógeno. La alergia es una patología muy frecuente, principalmente en los países industrializados. En la alergia intervienen diversos mecanismos inmunopatológicos y particularmente la denominada hipersensibilidad anafiláctica de tipo I. La fisiopatogenia de la hipersensibilidad de tipo I se basa en la producción aumentada de IgE, un anticuerpo citotrófico. Los anticuerpos IgE se inducen contra sustancias extrañas, denominadas alérgenos, después de una primera exposición, denominada sensibilización. Los anticuerpos IgE pueden unirse a los receptores de IgE presentes en la superficie de basófilos de la sangre y mastocitos de tejidos, prolongando su vida media desde pocas horas en la sangre a varios meses en tejidos. Los contactos posteriores de los alérgenos con los anticuerpos IgE unidos a células pueden provocar el entrecruzamiento de anticuerpos vecinos, lo cual desencadena una cascada de señales en el citoplasma celular, que conducen a la desgranulación celular y liberación de mediadores inflamatorios tales como histamina, serotonina y quininas. Las enfermedades alérgicas más comunes son rinitis, asma y dermatitis atópica. El asma alérgica es un trastorno inflamatorio crónico. En la inmunopatogénesis del asma están implicados no solamente mecanismos dependientes de IgE (responsables de la respuesta anafiláctica de Tipo I), sino también linfocitos T y, particularmente, la denominada subserie de células Th2. Los linfocitos Th2 inducen y mantienen la respuesta inflamatoria por medio del reclutamiento y la activación de otras células y, particularmente, mediante la producción de IL-5, que es responsable del reclutamiento y la activación de eosinófilos. Los eosinófilos desempeñan un papel importante en el desarrollo de hiperreactividad bronquial, que es una característica esencial del asma. Son alérgenos comunes el polen, los ácaros del polvo doméstico, mohos, fármacos, alimentos y pelo y caspa de animales. Los alérgenos de interior y especialmente, los ácaros del polvo doméstico, son una causa muy importante de alergia respiratoria y asma. Las manifestaciones clínicas de los trastornos alérgicos normalmente se tratan con antihistamínicos, ß-agonistas, cromoglicato sódico y corticosteroides. Generalmente, estos tratamientos son inadecuados debido a que son meramente sintomáticos y no influyen en la etiopatogenia de la enfermedad. Actualmente se reconoce ampliamente la necesidad de estrategias de tratamiento más eficaces, entre ellas, la inmunoterapia o vacunas terapéuticas específicas. Tradicionalmente, se ha usado ampliamente la terapia de hiposensibilizción con extractos de alérgenos (denominada también inmunoterapia específica) en el tratamiento de enfermedades alérgicas. En este tipo de tratamiento, a los pacientes se les administran inyecciones subcutáneas periódicas de los alérgenos ofensivos específicos. Se empieza inyectando pequeñas dosis de alérgenos y, si no aparecen reacciones alérgicas, se aumenta la dosis. Las inyecciones se administran al principio con una frecuencia semanal; después, las dosis se aumentan gradualmente hasta alcanzar una dosis de mantenimiento con una frecuencia mensual o semimensual. Este tratamiento debe mantenerse durante varios años (Informe de Posición de la OMS. Inmunoterapia con Alérgenos: Vacunas Terapéuticas contra Enfermedades Alérgicas (Allergen Immunotherapy: Therapeutic Vaccines against Allergic Diseases). Ginebra, enero de 1998). A pesar de que el procedimiento se considera relativamente eficaz para algunas enfermedades alérgicas, la inmunoterapia se ha cuestionado debido a razones de seguridad. Durante este tratamiento, el paciente puede sufrir reacciones anafilácticas graves, que pueden llegar a ser mortales. Además, el elevado número de inyecciones a administrar, que puede ser de aproximadamente 100-200 en 3 años, constituye un serio inconveniente para su aplicación práctica. El escaso cumplimiento por parte del paciente y el abandono prematuro del tratamiento son causas frecuentes de la falta de eficacia esperada. En los últimos años, ha habido un gran progreso en la comprensión de los mecanismos de la inducción de la respuesta inmune de IgE en sujetos alérgicos. La producción de IgE por linfocitos B la dirigen mecanismos específicos de la respuesta inmune celular Th2 y, particularmente, se induce por una superproducción de IL-4 por células Th2. Las células Th2 no sólo están implicadas patológicamente por su papel regulador (IL-4 induce el cambio de clase a IgE en linfocitos B, mediado por una señal de contacto proporcionada por los linfocitos T), sino que también participan directamente en la fase efectora de la respuesta inflamatoria alérgica de tipo retardado y en la inflamación crónica asmática. La exposición a alérgenos ambientales, además de la propia predisposición genética, constituye el fenómeno principal del proceso de sensibilización alérgica y produce el desencadenamiento de reacciones alérgicas. 2   Aún no se ha explicado totalmente el mecanismo inmunológico responsable de la mejoría clínica de los pacientes durante la inmunoterapia con alérgenos. No obstante, se sabe que tienen lugar varios cambios inmunológicos asociados a una disminución a largo plazo de la IgE específica de alérgeno: hay una disminución de la secreción de IL-4 e IL-5 y un aumento de los niveles de IFN- e IgG. Estos cambios indican una disminución del patrón de respuesta Th2, como una posible consecuencia de la inducción de un patrón Th1 simultáneo no patogénico (Informe de Posición de la OMS. Inmunoterapia con Alérgenos: Vacunas Terapéuticas contra Enfermedades Alérgicas (Allergen Immunotherapy: Therapeutic Vaccines against Allergic Diseases). Ginebra, enero de 1998). Los patrones de respuesta Th1/Th2 se distinguen entre sí en primer lugar por el patrón típico de citocinas, secretadas por células Th: concretamente IFN- e IL-2 por Th1 e IL-4 e IL-5 por Th2 (Mossman, T. R., Cherwinski, H., Bond, M. W., Giedlin, M. To, y R. L. Coffman. 1986. Two types of murine T helper cell clones. I. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins. J. Immunol. 136: 2348-2357). Por otro lado, también es posible determinar el tipo de respuesta inducida determinando los perfiles de la clase/subclase de IgE en suero. Por lo tanto, los patrones Th1 murinos inducen anticuerpos preferentemente de la subclase IgG2 (dependiente de IFN-), mientras que Th2 induce IgE y la subclase IgG1 (dependiente de IL-4). En seres humanos, Th1 está asociada a anticuerpos IgG1/IgG3 y Th2 a IgE. Aunque la aparición y el desarrollo de las alergias se produce por factores ambientales, el papel fundamental en la propensión de un individuo a desarrollar una respuesta Th2/lgE es de orden genético (Holgate ST. Environmental Genetic and interaction in allergy and Asthma. J Allergy Clin Immunol 1999; 104: 1139-1146). Por lo tanto, los descendientes de padres alérgicos desarrollarán una enfermedad alérgica con una mayor frecuencia que los niños de padres no alérgicos. Se ha estimado que esta frecuencia es del 75, 50 y 25 % si son alérgicos ambos progenitores, la madre o el padre, respectivamente). Esto significa que aplicando un sistema de diagnóstico a los padres, puede predecirse con una alta probabilidad el comportamiento de un individuo dentro de la población. Adicionalmente, es bien sabido que el establecimiento de un patrón patológico Th2 se produce en los primeros 6-24 meses de vida. Ciertos factores ambientales tales como la exposición a infecciones bacterianas pueden afectar positivamente a la aparición de enfermedades, induciendo un patrón Th1, que regulan negativamente el patrón Th2 alérgico (Holt PG, Programming of Allergen Specific Th-memory during Childhood. Proceedings XVII International Congress of Allergology and Clinical Immunology. Sydney 2000. Allergy Clin Immunol International Suppl. 1, 2000 págs. 83-85). Estos descubrimientos sugieren la posibilidad de diseñar vacunas antialérgicas profilácticas que podrían impedir el establecimiento de una respuesta Th2 a alérgenos, en la primera fase de la infancia. Estas vacunas podrían basarse en adyuvantes Th1, que idealmente deberían ser eficaces durante el periodo de lactancia materna. Se han intentado diversas estrategias para mejorar la inmunoterapia con alérgenos, dirigidas a reducir sus aspectos negativos, conservando o extendiendo sus... [Seguir leyendo]

1. Composición de vacuna para enfermedades alérgicas que comprende: a) proteoliposomas derivados de la membrana externa de Neisseria meningitidis; b) uno o varios alérgenos de naturaleza peptídica o glicopeptídica derivados de ácaros domésticos y c) Hidróxido de Aluminio como adyuvante. 2. Composición de vacuna de la reivindicación 1, en la que dicho proteoliposoma deriva de Neisseria meningitidis serogrupo B. 3. Composición de vacuna de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 2, en la que dicha composición contiene entre 20 y 75 µg de proteoliposoma por dosis. 4. Composición de vacuna de la reivindicación 1, en la que dicho alérgeno deriva de ácaros domésticos del género Dermatophagoides. 5. Composición de vacuna de la reivindicación 4, en la que dicho alérgeno deriva de ácaros domésticos de la especie Dermatophagoides siboney. 6. Composición de vacuna de acuerdo con las reivindicaciones 4 o 5, en la que los alérgenos principales son alérgenos del Grupo 1 (Der s 1, Der p 1, Der f 1) y alérgenos del Grupo 2 (Der s 2, Der p 2, Der f 2). 7. Composición de vacuna de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 6, en la que el alérgeno está en la proporción de 0,1 a 1 por 10 unidades de masa de proteoliposoma, y entre 0,25 y 7,5 µg por dosis. 8. Composición de vacuna de la reivindicación 1, en la que un resto lipófilo está acoplado covalentemente al alérgeno y en la que dicho resto lipófilo es un ácido graso bipolar con 16 a 20 carbonos. 9. Composición de vacuna de la reivindicación 1, en la que dicho adyuvante se añade en una proporción de 10 a 25 por unidad de masa de proteoliposoma y su contenido final está entre 250 y 1000 µg por dosis. 10. Composición de vacuna de la reivindicación 1, en la que dicha composición comprende adicionalmente un polisacárido derivado de la especie N. meningitidis serogrupo C. 11. Composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 10, en la que dicho polisacárido se añade en una proporción de 0,5 a 4 por unidad de masa de proteoliposoma. 12. Procedimiento para obtener la composición de vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que dichos alérgenos de ácaros se preparan y purifican de acuerdo con el siguiente procedimiento: a) liofilización o concentración por ultrafiltración del extracto alergénico hasta una concentración de proteína de 10 a 100 mg/ml; b) precipitación en solución de sulfato amónico al 50-100 % y selección del sedimento; c) fraccionamiento por medio de cromatografía de tamizado molecular usando una de las siguientes matrices: Sephacryl S-100, Sephacryl S-200, Sephacryl S-300 o Superdex 75, y selección de la fracción que corresponda a los pesos moleculares de 10-60 kDa; d) liofilización y concentración por ultrafiltración hasta una concentración de proteína entre 10 y 100 µg/ml; e) acoplamiento del alérgeno al proteoliposoma en una relación de 0,1 a 1 por 10 unidades de masa del proteoliposoma; f) agitación a 60-600 rpm durante 30 a 90 minutos. g) adición de Hidróxido de Aluminio en una proporción de 2 a 6 por unidad de masa de proteoliposoma; h) homogeneización de la mezcla con agitación a 60-600 rpm durante 30 a 90 minutos. 13. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que el acoplamiento del alérgeno al proteoliposoma, de acuerdo con la etapa (e), es covalente o no covalente. 14. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 12 ó 8, en el que dicho procedimiento comprende adicionalmente las siguientes etapas: a) adición de polisacárido en una proporción de 0,5 a 4 por unidad de masa de proteoliposoma b) homogenización por agitación a 60-600 rpm durante 30 a 90 minutos. 13   14     16   17   18   19