COMBINACION INMUNOESTIMULADORA PARA PROFILAXIS Y TRATAMIENTO DE HEPATITIS C.

Combinación inmunoestimuladora para profilaxis y tratamiento de hepatitis C.

La presente invención se refiere a una combinación inmunoestimuladora para la profilaxis y tratamiento de la hepatitis C, caracterizada porque comprende: un agonista de TLR3, un agonista de CD40 y la proteína NS3 del virus de la hepatitis C. Por otro lado, la invención se refiere a las composiciones farmacéuticas que comprendan dicha combinación inmunoestimuladora, al uso de las mismas ya un kit compuesto por dichas composiciones farmacéuticas. Por último la presente invención se refiere a un método para producir una respuesta inmune frente al virus de la hepatitis C, y a una, vacuna frente a dicho virus

Combinación inmunoestimuladora para profilaxis y tratamiento de hepatitis C.

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere a una combinación inmunoestimuladora para la profilaxis y el tratamiento de la hepatitis C, que incorpora la proteína NS3 del VHC, junto con adyuvantes seleccionados por su capacidad de inducir respuestas CD8+ y CD4+ potentes y duraderas específicas frente al virus VHC.

Estado de la técnica

Con una prevalencia mundial estimada de más de 170 millones de personas infectadas, la infección por el virus de la hepatitis C (VHC) supone hoy una pesada carga para la salud pública. Prevalencia que presumiblemente permanecerá invariable en los próximos años.

La infección por el VHC se caracteriza por una elevada tendencia a la cronicidad. El VHC persiste en un 70% de los individuos infectados, de los que un 20% desarrollan cirrosis y un 2,5% evolucionan hasta producir cáncer hepático.

La herramienta terapéutica de referencia actualmente son los protocolos terapéuticos basados en la utilización del interferón. Sin embargo, estas terapias antivirales resultan económicamente costosas, relativamente tóxicas y solamente eficaces en el 50-60% de los pacientes tratados. Es por tanto necesario y deseable desarrollar nuevas estrategias terapéuticas que sean más eficaces y mejor toleradas por los pacientes.

Una revisión actualizada sobre el VHC puede encontrarse en Nature ("Insights: Hepatitis C". Nature 2005, Supplements; Vol. 436, No. 7053, pp 929-978).

Aunque lamentablemente todavía no disponemos de una vacuna eficaz frente al virus de la hepatitis C, hay datos y evidencias experimentales que inducen a pensar que una vacuna eficaz es posible. Aunque anticuerpos antivirales son sintetizados en respuesta a la infección, el estado crónico se caracteriza por la ausencia de respuestas inmunes celulares por parte de células T citotóxicas (CD8+) y T ayudadoras (CD4+). Así, se postula que el VHC ha desarrollado estrategias que le permiten evadir específicamente las respuestas inmunes antivirales, donde la potencia y calidad de las respuestas T citotóxicas y T ayudadoras determina si los pacientes se recuperarán (bien espontáneamente o en respuesta a un tratamiento) o desarrollarán la infección crónica.

El principal objetivo de toda vacuna es estimular la inmunidad adquirida específica de antígeno, cuyos mediadores principales son los linfocitos B y T. En este contexto, las células presentadoras de antígeno (APCs) juegan un papel importante en la iniciación de las respuestas inmunes específicas y en particular en la activación de linfocitos T. Las APCs, principalmente las células dendríticas, capturan antígenos en los órganos periféricos y, tras recibir un estímulo de activación, migran a los órganos linfáticos. Allí, las células dendríticas presentan superficialmente, unidos a moléculas propias del complejo mayor de histocompatibilidad MHC, los productos peptídicos derivados de la degradación de los antígenos (epítopos), y simultáneamente producen quimioquinas y citoquinas para atraer y activar células T. El proceso de activación de células dendríticas, también conocido como maduración, está caracterizado por una expresión elevada de moléculas MHC (señal 1), moléculas coestimuladoras (señal 2) y citoquinas polarizadoras como interleuquina-12 (IL-12) (señal 3). La maduración es inducida por factores como componentes de patógenos o moléculas del hospedador frecuentes en los procesos de inflamación o daño celular. Estos factores actúan sobre las células dendríticas a través de receptores específicos para productos derivados de microorganismos, como los receptores tipo TLR (Toll like receptor), receptores para citoquinas (TNF-α, IL-1, IFN-α) o receptores para ligandos en la superficie de las células (p. ej. CD40).

La estimulación y activación de las distintas poblaciones de células T por las APCs está restringida por el tipo de molécula MHC por una parte, y por otra por las características de los epítopos que forman complejo con dichas moléculas MHC. Así por ejemplo, se han identificado determinados fragmentos de proteínas virales que inducen específicamente la activación de linfocitos T citotóxicos CD8+ (CTL), conocidos como epítopos de linfocitos o células T CD8+ o epítopos CD8+; o epítopos que inducen específicamente la activación de linfocitos T ayudadores CD4+ (HTL), epítopos CD4+. La base de datos "HCV Immunology Database" (http://hcv.lanl.gov/content/immuno/immuno-main.html) compendia los epítopos para linfocitos T, tanto de CTL CD8+ como de HTL CD4+, identificados a partir de las proteínas virales de distintas cepas y aislados del virus de la hepatitis C.

El desarrollo de protocolos de inmunización basados en la utilización de epítopos en forma de péptidos requiere por tanto la selección previa de aquellos péptidos que son adecuados para cada individuo, en función de las moléculas MHC que presente. Esto supone que dependiendo del MHC de cada individuo, habría que seleccionar una combinación concreta de péptidos que pudieran comportarse como epítopos en ese contexto. La utilización de antígenos grandes permite obviar este problema, puesto que habitualmente son poliepitópicos, dentro de su secuencia presentan diversos epítopos, tanto para CTL CD8+ como para HTL CD4+, que pueden ser presentados por moléculas MHC de diferentes individuos. De este modo, un único antígeno puede utilizarse como vacuna en individuos con diversos MHC.

Dentro de las diferentes proteínas del VHC, core y NS3 presentan una gran inmunogenicidad, y en aquellos individuos que aclaran la infección, se detectan potentes respuestas de CTL CD8+ y HTL CD4+ frente a ellas. Sin embargo, existen datos que muestran que core también puede tener efectos deletéreos para las células del sistema inmunitario cuando está en contacto con ellas, lo que no la hace aconsejable como antígeno en estrategias de vacunación. Por el contrario, NS3 es una proteína que apenas ha mostrado este tipo de efectos y podría ser un buen candidato como antígeno para la inducción de respuestas CTL CD8+ y HTL CD4+.

Los HTL CD4+ juegan un papel en la inmunidad adquirida, entre otros mecanismos mediante la activación de las APCs, la activación de CTL y la inducción de memoria. En particular, se ha descrito que las células CD4+ específicas para el VHC son necesarias para el mantenimiento de los CTL antivíricos (Grakoui A. et al; "HCV persistence and immune evasion in the absense of memory T cell help"; Science, 2003; 302:659-662). Por tanto una vacuna eficaz frente al virus de la hepatitis C debe proporcionar la máxima potencia en la inducción de respuestas no solamente CTL CD8+, sino también de respuestas HTL CD4+. Dicha vacuna requerirá por tanto de una selección de antígenos específicos que proporcione dichas respuestas.

Sin embargo, no parece que una combinación de antígenos sea por sí sola capaz de proporcionar una vacuna eficaz frente al VHC. Puesto que la maduración de células dendríticas es un requisito para la iniciación y activación eficaz de linfocitos T, dicha vacuna podría beneficiarse con la inclusión en la combinación inmunoestimuladora de algunos adyuvantes que estimulen la maduración de las células dendríticas. Como adyuvantes podrían utilizarse ligandos de los receptores TLR, de receptores de citoquinas o de receptores para ligandos intercelulares ya citados, o mejor aún una combinación sinérgica de dichos adyuvantes.

Así por ejemplo, US2004/0141950 describe combinaciones inmunoestimuladoras que incluyen un agonista de TLRs y un agonista de moléculas de las superfamilias del factor de necrosis tumoral (TNF) o de sus receptores (TNFR), que pueden incluir también un antígeno. Entre las numerosas combinaciones posibles presenta la combinación de un ligando de CD40 (un anticuerpo anti-CD40) y de poli(I:C), un ligando sintético de TLR3, combinación para la que se demuestra un efecto sinérgico en la expansión de linfocitos T CD8+. Asimismo Ahonen y cols. (J. Exp. Med. 2004; 199:775-784) presentan datos sobre la capacidad sinérgica de agonistas TLR/CD40 para inducir la expansión y diferenciación de CTL CD8+ específicos de antígeno de manera independiente de linfocitos T CD4+. Aunque estos trabajos describen la capacidad de la combinación TLR/CD40 para activar linfocitos T CD8+ de memoria específicos de antígeno, dichos trabajos...

1. Una combinación inmunoestimuladora para profilaxis y tratamiento de hepatitis C, caracterizada porque comprende:

a) un agonista de TLR3,

b) un agonista de CD40 o una secuencia de ADN que lo codifica, y

c) un polipéptido que comprende la proteína NS3, o un fragmento de dicha proteína NS3 con capacidad para inducir respuestas CD8+ y CD4+.

2. Una combinación inmunoestimuladora según la reivindicación 1, caracterizada porque el agonista de TLR3 es poli(I:C).

3. Una combinación inmunoestimuladora según la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque el agonista de CD40 está seleccionado entre un anticuerpo anti-CD40 y/o CD40L.

4. Una combinación inmunoestimuladora según la reivindicación 3, caracterizada porque el agonista CD40 es un anticuerpo anti-CD40.

5. Una combinación inmunoestimuladora según la reivindicación 1, caracterizada porque comprende:

a) poli(I:C),

b) un anticuerpo anti-CD40, y

c) un polipéptido que comprende la proteína NS3.

6. Una combinación inmunoestimuladora según la reivindicación 4 ó 5, caracterizada porque el polipéptido que comprende la proteína NS3 es un polipéptido con la SEQ. ID. NO.: 1.

7. Una combinación inmunoestimuladora según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque todos los componentes forman parte de una misma composición farmacéutica.

8. Una combinación inmunoestimuladora según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque los componentes forman parte de al menos dos composiciones farmacéuticas diferentes.

9. Uso de una combinación inmunoestimuladora según la reivindicación 8, caracterizada porque dichas composiciones farmacéuticas se administran simultáneamente.

10. Uso de una combinación inmunoestimuladora según la reivindicación 9, caracterizada porque dichas composiciones farmacéuticas se administran en momentos diferentes.

11. Uso de una combinación inmunoestimuladora según la reivindicación 9, caracterizada porque dichas composiciones farmacéuticas se administran por distintas vías de administración.

12. Una composición farmacéutica que contiene una combinación inmunoestimuladora descrita en una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque cada uno de los componentes se encuentra presente en cantidades farmacéuticamente aceptables.

13. Una composición farmacéutica caracterizada por comprender una combinación inmunoestimuladora definida en una de las reivindicaciones 1 a 8, administrada en una cantidad efectiva para inducir una respuesta inmune frente al virus de la hepatitis C.

14. Una composición farmacéutica según la reivindicación 13, caracterizada porque dicha composición es empleada en un tratamiento profiláctico.

15. Una composición farmacéutica según la reivindicación 13, caracterizada porque dicha composición es empleada en un tratamiento terapéutico.

16. Un kit para la administración de una combinación inmunoestimuladora definida en una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque comprende al menos dos composiciones farmacéuticas diferentes.

17. Una vacuna frente al virus de la hepatitis C, caracterizada porque comprende una combinación inmunoestimuladora definida en una de las reivindicaciones 1 a 8.