Cepa de Lactobacillus fermentum ME-3 DSM-14241 para el uso en la fabricación de un producto lácteo para reducir el estrés oxidativo que se mide mediante los parámetros de la actividad antioxidante total (TAA),

el estado antioxidante total (TAS) del suero sanguíneo, la fase de retardo de lipoproteína de baja densidad (LDL), la relación redox de glutationas, el nivel de lipoproteína de baja densidad oxidada (ox-LDL) y el valor básico de los conjugados diénicos de sangre humana

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a la biotecnología y se usará como un nuevo probiótico aplicado en la producción de productos lácteos (yogur, queso) para reducir el estrés oxidativo en sangre humana. 5

TÉCNICA PRECEDENTE

Los probióticos son aditivos alimentarios microbianos vivos, que tienen un efecto beneficioso sobre el equilibrio microbiológico del intestino y la salud humana. Los probióticos se usan como un alimento funcional. Un alimento funcional es un producto alimenticio, consumido adicionalmente al alimento habitual y que contiene biopreparaciones (incluyendo probióticos) u otros componentes que influyen favorablemente en la salud humana o 10 que disminuyen riesgos de enfermedades. Los probióticos se consumen como componentes del alimento (yogur o queso probiótico) o preparaciones no alimentarias (cultivos microbianos liofilizados).

La mayoría de los probióticos son bacterias del ácido láctico, principalmente lactobacilos. Los lactobacilos son microorganismos no patógenos que colonizan el tracto intestinal y urogenital humano desde la infancia hasta la vejez. Hoy en día se usan satisfactoriamente varios lactobacilos probióticos comerciales, entre los cuales el 15 Lactobacillus rhamnosus GG (Saxelin M. Lactobacillus GG - a human probiotic strain with thorough clinical documentation. Food Rev Int 1997; 13:293-313) es el más conocido. Recientemente, se han descrito y patentado algunas nuevas cepas de lactobacilos, por ejemplo L. reuterii (patente coreana KR211529, C12N 1/20, Korea Institute Science Technology, 1999), aislado de un organismo animal y por esta razón inapropiado para la utilización en seres humanos. 20

Varias cepas de Lactobacillus fermentum se usan para la corrección y la estabilización de la microflora intestinal en el caso de disbacteriosis e infecciones urogenitales con diferentes etiologías. La cepa del microorganismo Lactobacillus fermentum 39 se usa para producir la preparación biológica bacteriana (PCT/SU89/00264 (WO 91/05852), C12N 1/20, A61K 35/74, University of Tartu, 1991). La cepa Lactobacillus fermentum 90-TS-4 (RU2133272, C12N 1/20, A61K 35/74, Akivo Lentsner et ál., 1999) se caracteriza por tipificación 25 con lectina como un perfil sensible a manosa de la pared celular. La preparación se prescribe para el uso en ginecología.

Hay algunos probióticos muy conocidos, dirigidos contra un solo patógeno (por ejemplo Salmonella) (US5478557, A61K 35/74, US Agriculture, 1995; US5340577, A61K 35/74, US Army, 1994). Hasta ahora no se ha descrito una cepa de lactobacilo con un efecto antimicrobiano intensivo contra numerosos patógenos y patógenos 30 oportunistas.

Asimismo, todavía no se conoce una cepa de microorganismo tal que pueda tener resistencia natural a antibióticos contra los fármacos más frecuentemente usados en el tratamiento de infecciones. Esta propiedad permitiría usar tales cepas en el caso de pacientes tratados con antibióticos. Se usa en veterinaria un grupo de diferentes microorganismos, que también contienen una cepa de L. fermentum, pero esta cepa no tiene un efecto 35 antimicrobiano y antioxidante simultáneo (RU2119796, A61K 35/66, Zakrõtoje aktsionernoje obshestvo "BAKS", 1998). Las preparaciones antioxidantes como vitamina E y C, betacaroteno y otras ganan hoy en día mucha atención en relación con una nutrición sana. La formación excesiva de especies reactivas de oxígeno (ROS) en la respiración de los tejidos puede provocar el daño de las células y el desarrollo de los tejidos. La formación de oxígeno activo puede depender de algunos factores de estrés, tales como el alcohol, los peróxidos y algunos 40 fármacos.

Habitualmente, la oxidación excesiva está estrechamente conectada con las enfermedades nutricionales, la edad, la arteriosclerosis, las disfunciones de sistema nervioso central y el tracto intestinal, el cáncer y otros estados patológicos. Un organismo tiene varios sistemas de defensa contra la toxigenicidad del oxígeno. Es importante tomar sustancias antioxidantes para garantizar el funcionamiento de estos sistemas. 45

De las soluciones conocidas, la más cercana a esta invención es la patente que describe un alimento antioxidante, una preparación antioxidante y un método antioxidante (EPO649603, A23L 3/3472, A23L 3/3571, Otsuka Pharma Co Ltd. 1995). El objetivo de esta invención es una preparación que contiene una sustancia natural que implica manganeso (hojas de la planta del té) y el microorganismo Lactobacillus plantarum que produce catalasa y un sistema de superoxidasa-dismutasa, incrementando así la actividad antioxidante del organismo huésped. Los 50 autores de esta invención declaran que la preparación previene enfermedades que se desarrollan debido a oxígeno activo. Sin embargo, no describen el efecto de una cepa de Lactobacillus particular con una actividad antioxidante decreciente o que capture radicales hidroxilo in vitro. Además de eso, esta cepa de microorganismo también es imperfecta debido a que para obtener el presumible efecto antioxidante en un organismo (in vivo) es necesario añadir alguna materia prima que contenga Mn (hojas de planta del té) a la preparación, debido a que solo en este 55 caso se consigue su actividad de SOD (superoxido dismutasa).

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

El fin de esta invención es presentar la cepa de microorganismo como un nuevo probiótico antioxidante para el uso en la fabricación de un producto lácteo para reducir los índices de estrés oxidativo de la sangre humana.

Las más cercanas a la presente invención son cepas de Lactobacillus sp. con capacidad antioxidante (Mikelsaar M. et ál., American Journal of clinical nutrition, vol.73, Nº 2S, 2001).

El material de referencia mencionado divulga tres cepas diferentes de Lactobacillus sp. con capacidad 5 antioxidante pero no investiga adicionalmente si estas cepas podrían usarse para potenciar la actividad antioxidante de suero sanguíneo y aportar un efecto antiaterogénico a un ser humano.

El objetivo de la investigación - la cepa del microorganismo Lactobacillus fermentum ME-3 - se aisló de una muestra fecal de un niño sano durante un estudio comparativo de la microflora de niños estonios y suecos, usando medio de MRS (Oxoid) y cultivándola en un ambiente de CO2 (Sepp et ál., Intestinal microflora of Estonian and 10 Swedish infants, Acta Paediatrica, 1997, 86, 956-961).

La cepa del microorganismo Lactobacillus fermentum ME-3 se aisló sembrando las diluciones de las heces de un niño estonio sano de un año de edad (10-2 -10-7 en tampón de fosfato con ácido tioglicólico al 0,04%; pH 7,2). Las diluciones se sembraron sobre medio de agar de MRS recientemente preparado y se cultivaron a 37°C en un ambiente de CO2. La cepa, que es el objetivo de la invención, se aisló de una dilución 10-5 sobre la base de la 15 morfología característica de las colonias y las células. Sigue una identificación provisional y más precisa según se describe a continuación. Usando pruebas adicionales, la cepa se seleccionó de otros lactobacilos aislados del mismo niño sobre la base de sus propiedades especiales.

El hecho de que la cepa microbiana Lactobacillus fermentum ME-3 se origine a partir del tracto intestinal de un niño sano prueba su estado GRAS (generalmente reconocido como seguro), es decir que esta cepa de 20 microorganismo es inocua para el organismo humano y es adecuada para la aplicación oral.

Las características culturales-morfológicas se determinaron después de cultivar la cepa sobre agar de MRS y en medio de caldo de MRS (OXOID). Las células microbianas son bastones Gram positivos de conformación regular situados en cadenas paralelas, sin esporas, de grosor medio y diferente longitud (2 x 3-5 μm).

Características fisiológicas-bioquímicas: el caldo de MRS era adecuado para cultivar la cepa microbiana 25 durante 24-48 horas en un ambiente de CO2 al 10%, después de lo cual se producía en el caldo un crecimiento homogéneo de turbidez. Las colonias de microorganismo sobre agar de MRS son blancas, redondeadas, con un borde regular. La temperatura de crecimiento óptima es 37°C, se multiplica también a 45°C, pero no crece a 15°C. El ambiente de crecimiento óptimo es a pH 6,5. La prueba de catalasa negativa, la producción de gas mediante fermentación de glucosa, la producción de NH3 a partir de arginina y la producción de lisozima son las propiedades 30 principales. Durante la reproducción en leche, produce 1,07% de ácido.

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1. Cepa de Lactobacillus fermentum ME-3 DSM-14241 para el uso en la fabricación de un producto lácteo para reducir el estrés oxidativo que se mide mediante los parámetros de la actividad antioxidante total (TAA), el estado antioxidante total (TAS) del suero sanguíneo, la fase de retardo de lipoproteína de baja densidad (LDL), la relación redox de glutationas, el nivel de lipoproteína de baja densidad oxidada (ox-LDL) y el valor básico de los conjugados diénicos de sangre humana. 5

2. Cepa de Lactobacillus fermentum ME-3 DSM-14241 para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicho producto lácteo es leche, yogur o queso.