Proteína que comprende una secuencia que tiene al menos un 90% de identidad con SEQ ID NO.

: 8, SEQ ID NO.: 6, SEQ ID NO.: 7, SEQ ID NO.: 11, SEQ ID NO.: 12 y SEQ ID NO.: 13

Campo técnico

La invención se refiere a secuencies de anticuerpo novedosas aisladas de células B humanas que tienen actividades biológicas específicas para un virus que infecta células humanas.

Antecedentes de la invención

El citomegalovirus humano (CMVh) es un herpesvirus extendido, sumamente específico de especie, que provoca morbimortalidad significativa en individuos inmunosuprimidos o inmunológicamente inmaduros.

Varias revisiones recientes analizan la biología y manifestaciones clínicas de CMVh (Landolfo S et al., 2003; Gandhi M y Khanna R, 2004; Soderberg-Naucler C, 2006a). Este patógeno viral infecta a la mayoría de la población en todo el mundo y se adquiere en la infancia, tras el contacto con un fluido corporal, puesto que el virus entra a través de células endoteliales y células epiteliales de los sistemas respiratorios o la parte superior del aparato digestivo, o a través del sistema genitourinario. La seropositividad a CMVh es más prevalente en países subdesarrollados o en zonas geográficas con menores ingresos.

Tras una infección primaria, CMVh puede persistir en células huésped específicas del linaje mieloide en un estado latente, replicándose y diseminándose en muchos tipos celulares diferentes (células hematopoyéticas, células epiteliales, células endoteliales o fibroblastos) y escapando del sistema inmunitario del huésped. La infección por CMVh es generalmente asintomática en personas sanas puesto que la infección por CMVh y su diseminación se mantiene bajo control por el sistema inmunitario, aunque raramente se logra la eliminación de CMVh total. De hecho, el virus CMVh ha desarrollado mecanismos eficaces que permiten que el genoma viral permanezca en sitios seleccionados en un estado latente.

Cualquier situación que debilite las funciones inmunitarias, tales como estados de estrés o tratamientos médicos específicos, pueden conducir a la reactivación de CMVh. Pueden producirse manifestaciones clínicas de CMVh (tales como retinitis, enterocolitis, neumonitis, gastritis o hepatitis) tras una infección primaria, reinfección o reactivación viral. Aproximadamente el 10% de los lactantes están infectados antes de los 6 meses de edad tras la transmisión procedente de sus madres a través de la placenta, durante el parto o mediante la lactancia.

El virión de CMVh consiste en una nucleocápsida icosaédrica que contiene un genoma de ADN bicatenario, de 230 kb de longitud, lineal. La expresión del genoma de CMVh está controlada por una cascada compleja de acontecimientos transcripcionales que conduce a la síntesis de más de 200 proteínas implicadas en una gran variedad de actividades biológicas implicadas en la infección, latencia y replicación viral (Britt W y Mach M, 1996).

Las proteínas estructurales forman la envuelta del virión que es extremadamente compleja y todavía no definida de manera completa. Incluye glicoproteínas que son homólogas de proteínas estructurales identificadas en otros herpesvirus y que pueden formar complejos proteicos unidos por puentes disulfuro dentro del virión: gCI (que incluye sólo gB), gCII (que incluye gM y gN) y gCIII (que incluye gH, gL y gO). Los genes gB, gH y gN se han usado también para genotipar cepas de CMVh (Coaquette A et al., 2004; Dar L, 2007).

Las glicoproteínas gN y gM son las más abundantes y, junto con gH y gB, se ha mostrado que son esenciales para la interacción inicial entre la envuelta de CMVh y la superficie de la célula huésped, y en consecuencia para la producción de CMVh infeccioso. Por este motivo, compuestos que seleccionan como diana gB, gH, gN y/o gM pueden inhibir eficazmente la infección por CMVh bloqueando la entrada de viriones de CMVh circulantes en las células, tras la infección, reinfección o reactivación con CMVh.

El tratamiento de infecciones por CMVh es difícil debido a que hay muy pocas opciones terapéuticas disponibles. Los compuestos farmacológicos actualmente disponibles que inhiben la replicación viral (ganciclovir, cidofivir, foscamet, maribavir y otros fármacos en desarrollo) producen una mejora clínica significativa, pero pueden verse afectados por una escasa biodisponibilidad oral, baja potencia, la aparición de resistencia de CMVh (debido a mutaciones en las dianas virales) y toxicidades limitantes de la dosis (De Clercq E, 2003; Baldanti F y Gerna G, 2003; Gilbert C y Boivin G, 2005).

Se necesitan medios novedosos para prevenir y tratar la infección por CMVh, especialmente para individuos inmunocomprometidos, en situaciones de trasplante y en prevención prenatal. De hecho, CMVh es un patógeno oportunista clínicamente importante en pacientes con VIH y receptores de trasplantes de órganos, en los que contribuye a la pérdida del injerto independientemente del rechazo del injerto, dando como resultado morbimortalidad (Puius Y y Snydman D, 2007). El creciente número de receptores de trasplantes de órganos sólidos y de médula ósea eleva la probabilidad de manifestaciones clínicas de CMVh, tales como retinitis por CMVh (Wiegand T y Young L, 2006). Además, CMVh es la principal causa infecciosa de defectos de nacimiento (tales como pérdida de audición, desarrollo retardado o retraso mental) que se deben a una infección por CMVh perinatal o congénita transmitida por una madre infectada con CMVh (Griffiths P y Walter S, 2005).

Por tanto, es importante proporcionar fármacos para tratamientos universales específicos de CMVh profilácticos, preventivos, por ejemplo para la prevención de la enfermedad por CMVh en receptores de trasplantes (Hebart H y Einsele H, 2004; Kalil A et al., 2005; Snydman D, 2006), en pacientes que desarrollan neuropatologías relacionadas con CMVh (Griffiths P, 2004) o en embarazos de riesgo (Schleiss M, 2003), para prevenir la transmisión materno-filial y la infección por CMVh potencialmente mortal a fetos y neonatos.

Además, composiciones farmacéuticas frente a CMVh pueden ser útiles para el tratamiento de otras enfermedades más extendidas (tales como enfermedades cardiovasculares y autoinmunitarias, o algunos tipos de cáncer), en las que CMVh es un posible cofactor y/o puede reactivarse durante tratamientos inmunosupresores. Por ejemplo, CMVh es ahora un patógeno humano de importancia creciente para trastornos tales como complicaciones a largo plazo en invasividad tumoral y evasión inmunitaria puesto que la infección por CMVh puede tener efectos oncomoduladores sobre la apoptosis, diferenciación y migración celular. En enfermedades autoinmunitarias o vasculares, la infección por CMVh puede alterar reacciones inmunitarias e inflamatorias (Cinatl J et al., 2004; Soderberg-Naucler C, 2006b).

Un modo alternativo para prevenir la infección por CMVh es la vacunación, con el fin de proporcionar protección en una serie de poblaciones de pacientes de alto riesgo. Sin embargo, la correlación entre la vacunación y la respuesta inmunitaria resultante no se entiende completamente y la estrategia de vacuna frente a CMVh óptima (usando antígenos candidatos específicos o vacunas atenuadas vivas) parece depender de la población de pacientes que está seleccionándose para su protección. Por tanto, todavía están en evaluación estrategias de vacunación profiláctica (McLean G et al., 2006; Schleiss M, 2005).

En vista de las presentes limitaciones de las estrategias farmacológicas para las infecciones por CMVh, el conocimiento cada vez mayor de la relación huésped-CMVh, y en particular sobre las respuestas inmunitarias específicas de CMVh, hace que las terapias inmunitarias sean buenas alternativas para sustituir, o complementar, las terapias existentes para el tratamiento satisfactorio de las complicaciones asociadas a CMVh (Gandhi M y Khanna R, 2004). Recientemente, se logró una protección a largo plazo frente al curso letal de la infección por CMV en ratones inmunodeficientes transfiriendo células B de memoria específicas de virus, lo que sugiere que tales células pueden tener una utilidad terapéutica (Klenovsek K et al., 2007).

Una alternativa más fácil a terapias a base de células puede ser inmunoterapia pasiva, que consiste en la administración a individuos de composiciones farmacéuticas que comprenden anticuerpos terapéuticos con una actividad neutralizante definida frente a un antígeno humano o viral (por ejemplo CMVh).

Este enfoque terapéutico se ha diseñado basándose en las características biológicas y de unión a antígeno de anticuerpos y fragmentos de anticuerpos dirigidos contra dianas terapéuticas humanas o virales (Dunman... [Seguir leyendo]

1. Proteína que comprende una secuencia que tiene al menos un 90% de identidad con SEQ ID NO.: 8, SEQ ID NO.: 6, SEQ ID NO.: 7, SEQ ID NO.: 11, SEQ ID NO.: 12 y SEQ ID NO.: 13.

2. Proteína según la reivindicación 1, comprendiendo dicha proteína una secuencia que tiene al menos un 90% de identidad con SEQ ID NO.: 5 y una secuencia que tiene al menos un 90% de identidad con SEQ ID NO.: 10.

3. Proteína según la reivindicación 1 ó 2, siendo dicha proteína un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido bioactivo o una proteína de fusión.

4. Proteína según la reivindicación 3, en la que dicho anticuerpo es un anticuerpo recombinante humano.

5. Proteína según la reivindicación 4, en la que dicho anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene una secuencia de proteína al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO.: 15, y una cadena ligera que tiene una secuencia de proteína al menos el 90% idéntica a SEQ ID NO.: 17.

6. Proteína según la reivindicación 3, en la que dicho fragmento de anticuerpo es un heterodímero de cadena pesada/ligera variable, o un fragmento variable de cadena sencilla.

7. Proteína según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, uniéndose dicha proteína y neutralizando citomegalovirus humano (CMVh).

8. Ácido nucleico que codifica para una proteína según cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

9. Vector que comprende un ácido nucleico según la reivindicación 8.

10. Célula huésped procariota o eucariota que comprende un ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 9.

11. Célula huésped según la reivindicación 10, secretando dichas células una proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.

12. Uso de un ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 9, o de una célula huésped según la reivindicación 10 u 11, para producir una proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.

13. Uso de una proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para la preparación de una composición para detectar, tratar, inhibir, prevenir y/o mejorar una infección por CMVh o una enfermedad relacionada con CMVh.

14. Composición terapéutica, profiláctica o de diagnóstico para una infección por CMVh o para una enfermedad relacionada con CMVh, que comprende una proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o un ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 9.

15. Composición según la reivindicación 14, siendo la composición para administración ocular o tópica.

16. Composición según la reivindicación 14 ó 15, que comprende además un anticuerpo neutralizante de CMVh diferente, una preparación intravenosa de inmunoglobulinas y/o un compuesto antiviral.

17. Proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 o ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 8 ó 9, para su uso en el tratamiento, la profilaxis o el diagnóstico de una infección por CMVh, o de una enfermedad relacionada con CMVh.