La invención se refiere a composiciones terapéuticas y kits que comprenden (i) al menos,

dos antagonistas de Wnt diferentes o dos polinucleótidos comprendiendo cada uno de ellos una secuencia de nucleótidos que codifica un antagonista de Wnt diferente (o vectores o células conteniendo dichos polinucleótidos), o (ii) un primer antagonista de Wnt y un polinucleótido que codifica un segundo antagonista de Wnt. Asimismo, la invención también se relaciona con el uso de dichas composiciones y kits para el tratamiento del cáncer y, más específicamente, para el tratamiento de enfermedades asociadas con una angiogénesis no deseada

Agentes antiangiogénicos.

Campo técnico de la invención

La invención se refiere a composiciones terapéuticas que comprenden antagonistas de Wnt, además de su uso para el tratamiento del cáncer y, más específicamente para el tratamiento de enfermedades asociadas con una angiogénesis no deseada.

Antecedentes

Actualmente, los tratamientos comunes para el cáncer, tales como quimioterapia, cirugía, radioterapia y terapia celular, tienen limitaciones con respecto a su eficiencia y toxicidad. Hasta ahora, estas soluciones han dado lugar a diferentes niveles de éxito dependiendo del tipo de cáncer, salud del paciente, fase de la enfermedad en el momento del diagnóstico, etc.

Las proteínas Wnt se han agrupado en dos clases (canónicas y no canónicas) basándose en su actividad en líneas celulares o ensayos in vivo. La ruta canónica regula la determinación del destino celular y la formación del eje principal, la ruta no canónica regula los movimientos celulares y la determinación del destino celular. La β-catenina es un componente crucial aguas abajo de la ruta de señalización de Wnt. Cuando participa la señalización de Wnt, las proteínas adenomatosis poliposis coli (APC) y Axin ya no se unen a β-catenina, con la consiguiente estabilización de β-catenina y translocación al núcleo en el que se asocia con la familia del factor de células T (TCF) de los factores de transcripción. Este complejo del factor de transcripción transactiva un huésped de genes diana que domina procesos relevantes para el cáncer que incluyen MYC y ciclina D1. Los inhibidores de Wnt también pueden dividirse en dos clases, la clase sFRP y la clase Dickkopf (DKK). Los miembros de la clase sFRP, que incluye la familia sFRP, Wif1 y Cerberus, se unen directamente a proteínas Wnt, alterándose así su capacidad para unirse al complejo del receptor de Wnt; los miembros de la clase Dickkopf, que comprenden ciertas proteínas de la familia Dickkopf, inhiben la señalización de Wnt uniéndose al componente de LRP del complejo del receptor de Wnt. Por tanto, en teoría, aquellos antagonistas de la clase sFRP inhibirán tanto rutas canónicas como no canónicas, mientras que aquellos de la clase Dickkopf inhiben específicamente la ruta canónica. El aumento de expresión de los ligandos de Wnt y sus receptores (frizzled o LRP5/6), la pérdida de su inhibidor (tal como sFPR, Wif o DKK), la inactivación del sistema de destrucción y mutaciones de β-catenina llevarán a la activación anómala de la señalización de Wnt en carcinoma hepatocelular (CHC). La activación anómala de la ruta de Wnt como resultado del aumento de la formación del complejo Wnt-Fzd puede ser el acontecimiento más precoz en CHC. De esta forma, el uso de antagonistas de proteína Wnt puede tener un efecto en la inhibición del crecimiento de células tumorales.

Hay varios documentos en el estado de la técnica que describen procedimientos para tratar cáncer usando el antagonista de Wnt. Por ejemplo, la solicitud de patente internacional WO05112988 describe un procedimiento para inhibir la proliferación de una célula cancerosa que subexpresa Wif1 o para inducir la apóptosis de dichas células cancerosas o para inhibir que Wnt señalice las células cancerosas. Lin y col. (Hum Gene Ther, 2007, vol. 18: 379-386) describen que la señalización de Wnt se activa en células de carcinoma nasofaríngeo y que el bloqueo de los miembros de la ruta de Wnt tales como Wnt y el reestablecimiento de la expresión de Wif1 son dianas potenciales para el tratamiento anticanceroso.

Además, pruebas recientes sugieren que los antagonistas de Wnt también pueden tener una función inhibidora en la angiogénesis. Esto abre la posibilidad de usar antagonistas de Wnt tanto como agentes anticancerígenos mejorados debido a que pueden inhibir simultáneamente la proliferación de células cancerosas y la neovascularización de tejidos tumorales como para el tratamiento de enfermedades asociadas con angiogénesis no deseada.

La solicitud de patente internacional WO2007115376 describe el uso de sFRP-4 y variantes funcionales de la misma como agentes antiangiogénicos, además de procedimientos para tratar y seleccionar procedimientos usando dicha sFRP-4 y variantes funcionales de la misma.

Ezan y col. (Cardiovacular Res, 2004, vol. 63: 731-738) describen la capacidad de sFRP1 (llamada Frz) para retrasar la fase G1 y entrar en la fase S de cultivos de células endoteliales de vena umbilical humana y de células de músculo liso. Además, este documento también describe la capacidad de adenovirus que codifican sFRP1 para inhibir in vivo la revascularización en un modelo experimental de angiogénesis de isquemia.

Klein y col. (Hepatology, 2008, vol. 47: 1018-1031) describen la capacidad de sFRP1 para inhibir la proliferación de células endoteliales hepáticas no sinusoidales (HSEC) y de sFRP1 y Wif1 para inhibir la formación de tubos in vitro de HSEC sobre Matrigel.

La solicitud de patente internacional WO2007030658 describe composiciones (que comprenden agentes que son combinaciones de un componente estimulante de la ruta de Wnt y un componente represor de la ruta de Tie2) y procedimientos para tratar sujetos con trastornos caracterizados por crecimiento anómalo de células endoteliales vasculares.

Por consiguiente, los inhibidores de Wnt naturales pueden usarse directamente en la terapia del cáncer y enfermedades asociadas con angiogénesis no deseada. Sin embargo, la administración de antagonistas de Wnt recombinantes usando vectores virales lleva a niveles de expresión muy bajos ya que las proteínas se eliminan rápidamente del cuerpo. Esto da como resultado que la administración deba llevarse a cabo regularmente.

Por consiguiente, existe la necesidad en la técnica de más composiciones antiangiogénicas basadas en antagonistas de Wnt que tienen actividad mejorada.

Breve descripción de la invención

En un primer aspecto, la invención se refiere a una composición o kit que comprende:

En otros aspectos la invención se refiere a un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica al menos dos antagonistas de Wnt diferentes, a un vector que comprende dicho polinucleótido y a una célula huésped que comprende dicho polinucleótido o dicho vector.

En otro aspecto la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la invención, un polinucleótido de la invención, un vector de la invención o una célula de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otros aspectos la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la invención, un polinucleótido de la invención, un vector de la invención o una célula de la invención para uso como medicamento o para el tratamiento de enfermedades asociadas con una angiogénesis no deseada o cáncer, preferentemente, carcinoma hepatocelular (CHC).

Breve descripción de las figuras

La figura 1A es un diagrama esquemático de proteínas de fusión sFRP1-Fc y Wif1-Fc. El extremo carboxi de sFRP1 o Wif1 está unido mediante un conector de cinco aminoácidos a los extremos amino de los dominios de Fc de IgG1. Se indican las regiones Hinge (H) y CH2, CH3 de los dominios de IgG1. Las proteínas de fusión son diméricas debido a enlaces disulfuro (S=S) que se forman entre residuos de cisteína localizados en la región Hinge de IgG1. La figura...

1. Una composición que comprende:

en donde el antagonista de Wnt se selecciona del grupo de:

en donde el antagonista de Wnt es una proteína relacionada con frizzled soluble (sFRP) o una variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta una identidad de secuencia de al menos un 90% o un factor 1 inhibidor de Wnt (Wif1) o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta una identidad de secuencia de al menos 90%.

2. Composición según la reivindicación 1, en la que el segundo resto de polipéptido es un fragmento Fc, preferentemente un fragmento Fc de inmunoglobulina, más preferentemente un fragmento Fc de IgG.

3. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en la que el primer y el segundo resto de polipéptido de al menos una de las proteínas de fusión están conectados mediante un enlace peptídico sencillo o mediante un espaciador peptídico.

4. Un kit que comprende:

en donde el antagonista de Wnt se selecciona del grupo de:

en donde el antagonista de Wnt es una proteína relacionada con frizzled soluble (sFRP) o una variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta una identidad de secuencia de al menos un 90% o un factor 1 inhibidor de Wnt (Wif1) o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta una identidad de secuencia de al menos 90%.

5. Kit según la reivindicación 4, en la que el segundo resto de polipéptido es un fragmento Fc, preferentemente un fragmento Fc de inmunoglobulina, más preferentemente un fragmento Fc de IgG.

6. Kit según una cualquiera de las reivindicaciones 4 ó 5, en la que el primer y el segundo resto de polipéptido de al menos una de las proteínas de fusión están conectados mediante un enlace peptídico sencillo o mediante un espaciador peptídico.

7. Un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica al menos dos antagonistas de Wnt diferentes en el que cada uno de los antagonistas se selecciona del grupo de:

en donde el antagonista de Wnt es una proteína relacionada con frizzled soluble (sFRP) o una variante funcionalmente equivalente de la misma que presenta una identidad de secuencia de al menos un 90% o un factor 1 inhibidor de Wnt (Wif1)o una variante funcionalmente equivalente del mismo que presenta una identidad de secuencia de al menos 90%.

8. Un polinucleótido según la reivindicación 7 en el que el segundo resto de polipéptido es un fragmento Fc, preferentemente un fragmento Fc de inmunoglobulina, más preferentemente un fragmento Fc de IgG.

9. Un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 7 ó 8, en el que el primer y el segundo resto de polipéptido están conectados mediante un enlace peptídico sencillo o mediante un espaciador peptídico.

10. Un vector que comprende un polinucleótido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9.

11. Una célula que comprende un polinucleótido como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9 o un vector como se define en la reivindicación 10.

12. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, un kit según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, un vector como se define en la reivindicación 10 o una célula como se define en la reivindicación 11 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, un kit según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, un vector como se define en la reivindicación 10 o una célula como se define en la reivindicación 11 para uso como medicamento.

14. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, un kit según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, un vector como se define en la reivindicación 10 o una célula como se define en la reivindicación 11 para el tratamiento de enfermedades asociadas con una angiogénesis no deseada o cáncer, preferentemente carcinoma hepatocelular (CHC).

15. Una composición según las reivindicaciones 12 a 14 o un kit según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en la que los al menos dos componentes de las composiciones o del kit van a administrarse simultáneamente, por separado o secuencialmente.