Uso de FVII, FVIIa u otro agonista de TF para la producción de una composición farmacéutica para inducir o mejorar la activación de la vía de señalización MAPK en el tratamiento de una herida conduciendo a disfunción endotelial en un paciente

Uso de FVIIa o FVIIai para el tratamiento de disfunción endotelial y para inhibición de angiogénesis, respectivamente.

Campo de invención

Se ha descrito un nuevo factor VII (FVII) intracelular señalando actividad de coagulación en células expresando factor tisular (TF). La presente invención se refiere al uso de FVIIa u otro agonista del TF, o FVIIai u otro antagonista de TF para la preparación de un medicamento para la modulación de la activación inducida por FVIIa de la vía de señalización MAPK en un paciente.

Antecedentes de la invención

La vía extrínseca de coagulación sanguínea se inicia cuando el FVIIa que circula en el plasma se enlaza con la proteína de membrana integral, el factor tisular (TF). El papel del TF en la coagulación sanguínea se ha estudiado de forma extensiva (Camerer, E., A. B. et al. Thromb. Res. 81: 1-41; (1996)). La implicación de FVIIa como una enzima proteolítica en la cascada de la coagulación sanguínea se cree que está reducida al folíolo extracelular de las células expresando el TF. Una actividad intracelular de FVIIa se implicó en primer lugar cuando la secuencia del TF mostró homología con la superfamilia de los receptores de citocina/interferón o hematopoyéticos (Bassoon, J. F. Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87: 6934-6938; (1990)). La subclase I de la familia del receptor hemotopoyético incluye receptores para la hormona del crecimiento, la prolactina, las interleukínas 1 a 7, factores estimulantes de colonias de granulocitos macrófagos, la eritropoitína y la trombopoitina. La subclase II incluye TF y receptores para el interferón a y ß (Wells, J.A., y De Vos, A.M. Annu. Rev. Biomol. Struct. 22: 329-351; (1993)).

La similitud del TF con esta clase de receptores se corroboró con el aspecto de la estructura cristalina (Harlos, K., D. M. A. et al. Nature 370: 662-666; (1994), Mueller, Y. A., M. H. et al. Biochemistry 33: 10864-10870 (1994)). Es característico de esta clase de receptores de citoquina que incluyen receptores para interferón ß y ? y IL-10 (Mott, H. R. and Campbell, I. D. Curr, Opin. Struct. Biol. 5: 114-121; (1995)) es que su activación lleva a una rápida fosforilación de tirosina de los receptores mismos, al igual que un subconjunto de proteínas intracelulares. En unos minutos tras de la fosforilación de la tirosina inicial se activa un conjunto de kinasas activadas con mitógeno (Ser/Thr) (MAPK) (Whitmarsh, A. J. and Davis, R. J. J. Mol. Med. 74:589-607; (1996)). Estas kinasas están dispuestas en diferentes vías de señalización paralelas (David, M. et Al. Science 269, 1721 (1996); Current opin. immunol. 8, 402-11 (1996)). Estudios profundos de la capacidad de señalización putativa intracelular de FVIIa han mostrado que éste induce a la movilización del calcio libre intracelular (Ca²⁺) en la línea celular del carcinoma de la vejiga humana, J82, que expresa constitutivamente TF y en células endoteliales de la vena umbilical que se pretrataron con interieukin-1 para expresar el TF (Rottingen, J.-A. et al. J. Biol. Chem. 270: 4650-4660; (1995), pero no ha mostrado ninguna activación de tipo citoquina de tirosinas kinasas intracelulares (Camerer, E., et al. J. Biol. Chem. 271: 29034-29042; (1996)). En conclusión se cree que FVIIa, en una manera dependiente de TF, que induce a la movilización de Ca²⁺ intracelular mediante la activación de la fosfolipasa C (Camerer, E., et al. J. Biol. Chem. 271: 29034-29042; (1996)). El mecanismo mediante el cual FVIIa activa la fosfolipasa C no se conoce, pero Camerer et al. excluyó específicamente la activación de la tirosina kinasa.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere al uso de FVII y/o FVIIa y/o otro TF agonista y/o FVIIai y/o otro TF antagonista para la producción de una composición farmacéutica para el uso en el tratamiento terapéutico de condiciones patológicas que pueden estar relacionadas con o tratadas por la activación específica o la inhibición de la vía de señalización intracelular mediada por FVIIa.

Conforme a la presente invención se ha demostrado que la unión de FVIIa con su receptor TF induce a la activación de la vía de la proteína kinasa activada por mitógeno (kinasa MAP) incluyendo la fosforilación de tirosinas en MAPK/Erk1. El TF se conoce por jugar un papel pertinente en la patogénesis de varios estados de enfermedad donde la interferencia reguladora en el nivel intracelular se cree provechosa.

Así, los estados de enfermedad que pueden tratarse son condiciones patológicas tales como la herida mecánica de vasos sanguíneos, aterosclerosís, isquemia/reperfusión, infección bacteriana, deposición de tumor, o estímulos inducidos por "factores de estrés" tales como citoquinas, fumar, presión sanguínea alta, niveles altos de lípidos o glucosa, productos finales de glicosilación avanzada, y lipopolisacáridos bacterianos.

Lista de figuras

La Figura 1 muestra el efecto de iones de zinc en la actividad del factor VIIa estimulado por TF que se muestra en ausencia (control) y en presencia de 0,2 mM de cistin dihidroxamato. La actividad del factor VIIa se midió con el sustrato cromogénico S2288 (H-D-lle-Pro-Arg-p-nitroanilida). La actividad de 10 nM de FVIIa en presencia de 50 nM de TF_1-218 (Dr W. Kisiel, Universidad de Nuevo Méjico, Albuquerque, NM) se midió en un tampón conteniendo 50 mM de TrisCl a pH 7.4 0,1 M de NaCl, 1 mM de CaCl₂, 0,05% de Tween 20 y 0,4 mM de S2288. La actividad se midió a temperatura ambiente como el cambio de absorbencia a 405 nm.

Las Figuras 2A e 2B muestran la activación de la expresión del gen indicador SRE inducida por FVIIa al unirse con TF humano.

La Figura 3 muestra la estimulación de células BHK-TF/KZ136 estimuladas con FVIIa con y sin un tratamiento previo con el inhibidor MEK1/2 PD98059. PB98059 se mantuvo a 50 µM a lo largo de todo el experimento.

Las Figuras 4A y 4B muestran la activación específica del factor transcripcional Elk1:

4A) La superposición de la imagen luminosa transmitida y la imagen fluorescente mostrando la eficiencia de la transfeccíón.
4B) Los LCPS obtenidos a partir de BHK-TF células transitoriamente modificadas con los dos sistemas híbridos con Gal4-Elk1 y gal4-luciferasa.

Las Figuras 5A e 5B muestran la activación de MAPK p44/42: línea celular BHK TF 103 #11-2; Filas 3-8: Estimulación con 100 nM de FVIIa durante el período de tiempo indicado.

Las Figuras 6A e 6B muestran la activación de MAPK p44/42: línea celular ECV-304 (ATCC CRL-1998); células IL-1ß estimuladas (Filas 2-5) y no estimuladas (filas 7-9) expuestas a 20 nM de FVIIa durante el período de tiempo indicado.

Las Figuras 7A e 7B muestran la activación de MAPK p44/42: línea celular MDCK (ATCC CCL-34) expuesta a 10 nM de FVIIa (Filas 1-5) y 10 nM de FVIIai (Fila 6) durante el período de tiempo indicado.

La Figura 8 ilustra la competencia experimentada entre FVIIa y FVIIai en las células BHK-TF/KZ136.

Las Figuras 9A e 9B muestran la activación transitoria de MAPK p44/42. La Figura 10 muestra una señalización inducida por FVIIa a través de la vía MAPK usando TF truncado (TF carente del extremo C-terminal).

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere al uso de FVII o FVIIa u otro agonista de TF para la producción de una composición farmacéutica para inducir o mejorar la activación de la vía de señalización MAPK en el tratamiento de heridas conduciendo a disfunción endotelial en un paciente, en particular donde la fosforilación de MAPK/Erk1/2 conduce a la activación del factor de transcripción Elk1.

La presente invención también se refiere al uso de FVII, FVIIa u otro agonista de TF para la producción de una composición farmacéutica para mejorar la activación inducida por FVIIa de la vía de señalización MAPK en el tratamiento de heridas conduciendo a disfunción endotelial en un paciente.

En otro aspecto ulterior la presente invención se refiere al uso de FVIIai u otro antagonista de TF para la producción de una composición farmacéutica para la inhibición de la angiogénesis.

En otro aspecto ulterior la presente invención se refiere al uso de FVIIai u otro antagonista de TF para la producción de una composición farmacéutica para la inhibición de la angiogénesis.

En una forma de realización de la presente invención se refiere al uso de FVIIa u otro agonista...

1. Uso de FVII, FVIIa u otro agonista de TF para la producción de una composición farmacéutica para inducir o mejorar la activación de la vía de señalización MAPK en el tratamiento de una herida conduciendo a disfunción endotelial en un paciente.

2. Uso según la reivindicación 1, donde la herida conduciendo a disfunción endotelial se selecciona a partir del grupo que consiste en re-endotelización, revascularización colateral en la isquemia/reperfusión en la microangiopatía diabética del infarto miocardial, herida mecánica, aterosclerosis, isquemia/reperfusión, infección bacteriana, y deposición tumoral.

3. Uso de FVIIai u otro antagonista de TF para la producción de una composición farmacéutica para la inhibición de la angiogénesis.

4. Uso según la reivindicación 3, donde dicho antagonista comprende un zinc quelador.

5. Uso según la reivindicación 4, donde dicho zinc quelador se selecciona a partir de un compuesto de la fórmula general Ia

donde

M¹ es heteroarilo, un grupo de la fórmula

o un grupo de la fórmula

M² es heteroarilo, o un grupo de la fórmula

o un grupo de la fórmula

Z¹ Z², Z³ y Z⁴ independientemente el uno del otro son hidrógeno, C_1-4alquilo, hidroxi, amino o un enlace de valencia fijado a A,

Z⁵ y Z⁶ representan un >C=O, que se fija a A,

Y¹ y Y² independientemente el uno del otro son un grupo de la fórmula -X¹~X²~X³-, donde independientemente el uno del otro significan un enlace único o doble, y X¹ representa >C=O, >CHR⁵, >CH₂, >CH- o un enlace de valencia, donde R⁵ a es hidrógeno, C_1-4alquilo, amino, C_1-4alquil-amino, o di(C_1-4alquil)amino, X² representa -NH-, >N-, >CH₂ o >CH-, y X³ representa S, >CH₂, >CH- o un enlace de valencia,

A es arilo o heteroarilo,

p, a y s independientemente el uno del otro son 0 o 1;

o una sal derivada farmacéuticamente aceptable;

con las condiciones de que a+p+s sea al menos 1; en combinación con un excipiente y/o portador farmacéuticamente aceptables.

6. Uso según la reivindicación 4 ó 5 donde dicho zinc quelador se selecciona a partir de

1-hidroxi-7-hidroxicarbamoilquinoxalina-2, 3(1H,4H)-dion,

5-(2-piridil)-1, 2,4-triazol-3-carbohidrazida,

1, 2,3-triazol-4,5-dicarbohidrazida,

Pirazol-3,5-ácido dicarbohidroxámico,

4,7-Dihidro-[47]fenantrolina-1,2,3,8,9,10-hexaon-2,9-dioxima, o L-Cistina dihidroxamato.

7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes donde dicho paciente es un humano.