PRODUCCION DE UN FACTOR BIOLOGICO Y CREACION DE UN ENTORNO INMUNOLOGICAMENTE PRIVILEGIADO USANDO CELULAS DE SERTOLI ALTERADAS GENETICAMENTE.

Uso de células de Sertoli alteradas genéticamente para producir un factor biológico o intermedio del mismo y en el que dichas células de Sertoli crean un sitio inmunológicamente privilegiado para la producción de un medicamento para tratar una enfermedad en un sujeto causada por una deficiencia del factor biológico

Producción de un factor biológico y creación de un entorno inmunológicamente privilegiado usando células de Sertoli alteradas genéticamente.

Los trasplantes de órganos o células sanas en un paciente que padece una enfermedad a menudo los rechaza el cuerpo debido a una respuesta inmune iniciada en respuesta al tejido o células foráneas. Las células alteradas genéticamente administradas durante terapia génica a menudo sufren una respuesta inmune similar. La presente invención proporciona un método de trasplante celular en el que se crea un sitio inmunológicamente privilegiado, aliviando de este modo el rechazo asociado con el trasplante convencional y las terapias génicas.

Específicamente, la presente invención proporciona composiciones y métodos para proporcionar a un individuo un factor biológico o intermedio del mismo que comprenden introducir en el individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de células de Sertoli manipuladas genéticamente para producir el factor biológico o intermedio del mismo y en los que las células de Sertoli crean un sitio inmunológicamente privilegiado. También se proporciona una composición farmacéutica que comprende células de Sertoli alteradas genéticamente que producen un factor biológico.

Ciertas enfermedades crónicas destruyen las células funcionales en los órganos afectados. Los individuos con dichas enfermedades a menudo son incapaces de producir proteínas u otros productos biológicos necesarios para mantener la homeostasis y habitualmente requieren numerosas sustancias exógenas para sobrevivir. El trasplante de órganos o células sanas en un individuo que padece dicha enfermedad puede ser necesario para salvar la vida del individuo. Este tipo de terapia se considera generalmente como una última alternativa para curar una afección de lo contrario fatal. Dichos trasplantes, sin embargo, a menudo los rechaza el cuerpo debido a una respuesta inmune iniciada en respuesta al tejido o células foráneas. Actualmente, el único recurso para combatir esta respuesta inmune es administrar agentes de inmunosupresión no específicos crónicos. El uso de agentes de inmunosupresión no específicos, sin embargo, está cargado de efectos secundarios indeseados tales como susceptibilidad aumentada a infección, hipertensión, fallo renal y crecimiento tumoral.

En los campos del trasplante celular y de órganos, Selawry et al., han demostrado que las células de Sertoli pueden usarse para crear un entorno privilegiado artificial cuando se aíslan de los testículos y después se trasplantan en sitios heterólogos. Los entornos privilegiados se han creado usando células de Sertoli tanto alogénicas como xenogénicas. Rajotte y Korbutt, 1997 Diabetes 46: 317-322. Asimismo, se ha demostrado que tanto aloinjertos de células de Sertoli de rata como xenoinjertos de células de Sertoli porcinas sobreviven durante al menos dos meses en cerebro de rata sin inmunosupresión con ciclosporina A. Saporta, S. et al., 1997 Exp. Neurology 146 (2): 299-304. Selawry, et al., también han demostrado la inmunoprotección de células del islote colocadas en la cápsula renal de rata cuando se cotrasplantan con células de Sertoli. Se han demostrado la supervivencia del islote a largo plazo y la recuperación funcional en un modelo de rata diabética. Selawry, H., et al., 1993 Cell Transplant 2: 123-129. Recientemente se ha sugerido que las células de Sertoli expresan un factor inmunosupresor, el ligando Fas (Fas-L), responsable de proporcionar a los testículos por completo o en parte su estado inmunoprivilegiado. Sandberg, P.R., et al., 1997 Cell Transplantation 6 (2):191-193; Saporta, S., et al., supra.

El rechazo inmune de células alteradas genéticamente durante terapia génica sigue siendo un problema. Para superar el problema, pueden usarse células autólogas, es decir, células del propio paciente. De hecho, la mayoría de los protocolos de terapia génica humana actualmente aprobados dependen de alteración genética de células autólogas. Dichas células, sin embargo, pueden ser difíciles de obtener debido al estado patológico del paciente y a menudo se destruyen durante su recolección. Las células que sobreviven a la recolección a menudo son difíciles de cultivar in vitro y requieren condiciones de cultivo y metodologías de purificación complicadas.

Existe la necesidad, por lo tanto, de composiciones y métodos para producir un factor biológico en un sujeto en los que las células que están alteradas genéticamente para producir el factor biológico estén fácilmente disponibles y se manipulen más fácilmente in vitro. Además, existe la necesidad de composiciones y métodos para producir un factor biológico en un sujeto que recibe células alogénicas o xenogénicas que no desencadenen una respuesta inmune que requiera inmunosupresión crónica.

La presente invención proporciona composiciones y métodos para proporcionar a un individuo un factor biológico o intermedio del mismo que comprenden introducir en el individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de células de Sertoli manipuladas genéticamente para producir el factor biológico o intermedio del mismo y en los que las células de Sertoli crean un sitio inmunológicamente privilegiado.

La presente invención también proporciona el tratamiento de una enfermedad causada por una deficiencia de un factor biológico que comprende administrar a un sujeto que necesite dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de células de Sertoli transformadas genéticamente para producir el factor biológico o un intermedio del factor biológico y en el que las células de Sertoli crean un sitio inmunológicamente privilegiado.

Preferiblemente, las células de Sertoli alteradas genéticamente se administran por trasplante. El trasplante puede ser por xenoinjerto o aloinjerto.

La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende células de Sertoli transformadas genéticamente para producir un factor biológico o intermedio del mismo mezclado con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

También se proporciona un kit compartimentado que comprende un primer recipiente adaptado para contener células de Sertoli alteradas genéticamente para producir un factor biológico o intermedio del mismo.

La presente invención también proporciona un vector que comprende en dirección 5' a 3' un promotor que funciona en células de Sertoli unido de forma funcional a una secuencia codificante de un factor biológico o intermedio. El vector puede comprender adicionalmente una secuencia de terminación 3' que funciona en células de Sertoli y/o una secuencia señal que codifica un péptido señal. La secuencia señal está localizada cadena debajo de la secuencia promotora y cadena arriba a la secuencia codificante de un factor biológico o intermedio.

También se proporcionan células de Sertoli que comprenden los presentes vectores.

La presente invención proporciona composiciones y métodos para producir un factor biológico en un sujeto. Las composiciones y métodos se protegen a sí mismos de la destrucción inmune por el sujeto, eliminado de este modo la necesidad de inmunosupresión crónica.

De acuerdo con la presente invención, las células de Sertoli, las células predominantes de los testículos, se usan para producir un factor biológico tal como una proteína in vivo. Las células de Sertoli usadas para producir el factor biológico están alteradas genéticamente y se generan por transferencia génica ex vivo o también se aíslan de un animal transgénico no humano que expresa el factor biológico en células de Sertoli. Las células de Sertoli alteradas genéticamente después se introducen en un sujeto de modo que se produzca el factor biológico en ese sujeto. Las células de Sertoli trasplantadas resultantes, además de producir un factor biológico deseado, también crean un entorno inmunoprivilegiado en el sitio del trasplante.

Preferiblemente, la vía de introducción es por trasplante subcutáneo en sitios tales como el espacio subcapsular renal, la fascia subcutánea, el espacio subcapsular hepático, el cerebro, la vena porta hepática o la bolsa omental. Las células de Sertoli alteradas genéticamente también pueden colocarse en un dispositivo biocompatible que permita el contacto con el sistema vascular, localice las células de Sertoli, y posibilite que las células Sertoli sobrevivan a largo plazo. Dicho dispositivo también proporciona protección añadida...

1. Uso de células de Sertoli alteradas genéticamente para producir un factor biológico o intermedio del mismo y en el que dichas células de Sertoli crean un sitio inmunológicamente privilegiado para la producción de un medicamento para tratar una enfermedad en un sujeto causada por una deficiencia del factor biológico.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho sujeto es un mamífero.

3. El uso de la reivindicación 2, en el que dicho mamífero es un ser humano.

4. El uso de la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho factor biológico es una hormona.

5. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho factor biológico es la insulina y dicha enfermedad es la diabetes mellitus.

6. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho factor biológico es el factor IX y dicha enfermedad es la hemofilia B.

7. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho factor biológico es la B-UGT y dicha enfermedad es la enfermedad de Crigler-Najjar (CN).

8. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho agente o medicamento tiene que introducirse en dicho sujeto por trasplante.

9. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dichas células de Sertoli tienen que introducirse en dicho individuo en una dosificación que varía de 10⁵ a 10¹⁰ células.

10. El uso de la reivindicación 8, en el que dicho trasplante es por xenoinjerto.

11. El uso de la reivindicación 8, en el que dicho trasplante es por aloinjerto.

12. Una composición farmacéutica que comprende células de Sertoli alteradas genéticamente para producir un factor biológico o intermedio del mismo mezclado con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. La composición farmacéutica de la reivindicación 12, en la que dicho factor biológico es una hormona.

14. Un kit compartimentado que comprende un primer recipiente adaptado para contener células de Sertoli alteradas genéticamente para producir un factor biológico o intermedio del mismo.

15. El kit compartimentado de la reivindicación 14 que comprende adicionalmente un segundo recipiente adaptado para contener un vehículo farmacéuticamente aceptable.

16. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 12, en la que las células de Sertoli comprenden células de Sertoli primarias.

17. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 12, en la que las células de Sertoli comprenden una línea celular de Sertoli.