Un proceso para preparar una mezcla de lípidos, que comprende:

(a) poner en contacto los lípidos con un primer disolvente no acuoso;

(b) concentrar la solución para dar un gel espeso;

(c) poner en contacto el gel espeso con un segundo disolvente no acuoso; y,

(d) recoger los sólidos resultantes;

en donde, en el paso (a), los lípidos son:

(i) 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolina;

(ii) ácido 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatídico, sal monosódica; y,

(iii) N-(metoxipolietilenglicol 5000-carbamoil)-1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidil-etanolamina, sal monosódica

Preparación de una mezcla de lípidos y una suspensión de fosfolípidos que contiene la mezcla de lípidos, y agentes de contraste basados en éstas.

Campo de la invención

La presente invención se refiere en general a procesos para la preparación de una mezcla de lípidos y una suspensión filtrable uniforme de fosfolípidos que contiene la mezcla de lípidos, siendo dicha suspensión útil como agente de contraste de ultrasonidos.

Antecedentes de la invención

La fabricación de un agente de contraste de fosfolípidos puede dividirse en los pasos siguientes: (1) preparación de una mezcla de lípidos; (2) preparación de la composición de la solución a granel, que implica la hidratación y dispersión de la mezcla de lípidos en un medio esencialmente acuoso para producir una suspensión de lípidos; (3) filtración de la solución a granel a través de uno o más filtros esterilizadores para hacer la suspensión exenta de contaminantes microbianos; (4) dispensación de la suspensión estéril en viales individuales en un área aséptica controlada; (5) carga de los viales dispensados en una cámara de liofilización para reemplazar el gas del espacio de cabeza del vial con gas perfluoropropano (PFP); (6) transferencia de los viales sellados después del intercambio de gases a un autoclave para esterilización terminal. Existen tres obstáculos principales en este proceso: (1) la uniformidad de la mezcla de lípidos; (2) la hidratación de la mezcla de lípidos; (3) la uniformidad y el tamaño de partícula de la suspensión; y, (4) la filtración estéril de la suspensión a través de uno o más filtros esterilizadores.

Las mezclas de fosfolípidos se producen típicamente por disolución o suspensión de los lípidos requeridos en un sistema disolvente apropiado acuoso o no acuoso, seguido por reducción del volumen sea por liofilización o destilación. Idealmente, este proceso produce sólidos mezclados con uniformidad y pureza de contenido altas. No obstante, si bien funciona satisfactoriamente en escala pequeña de laboratorio, este método simple es frecuentemente problemático cuando se trata del aumento de las cantidades a escala de producción. Las dificultades incluyen: (1) mantenimiento de la uniformidad de contenido durante el paso de eliminación del disolvente (debido a solubilidades diferenciales); (2) mantenimiento de la pureza (frecuentemente un problema cuando se utiliza agua debido a reacciones hidrolíticas secundarias); (3) aumento de la pureza; (4) minimización del volumen de disolvente; y (5) recuperación de los sólidos finales (v.g., no es práctico eliminar los sólidos por raspado de un reactor de grandes dimensiones).

Procesos para la preparación de mezclas de lípidos se describen en WO 96/91196 y WO 97/40858.

Después de la fabricación de una mezcla de lípidos, la composición final implica típicamente la introducción de la mezcla en un medio acuoso. Dado que los fosfolípidos son hidrófobos y no son fácilmente solubles en agua, la adición de fosfolípidos o una mezcla de lípidos directamente en una solución acuosa hace que el polvo de lípidos se agregue formando grumos que son muy difíciles de dispersar. Por ello, el proceso de hidratación no puede controlarse dentro de un tiempo de proceso razonable. La hidratación directa de fosfolípidos o una mezcla de lípidos en un medio acuoso produce una suspensión turbia con partículas de tamaños comprendidos entre 0,6 µm y 100 µm. Debido a la distribución relativamente ancha de tamaños de partícula, la suspensión no puede filtrarse a la temperatura ambiente cuando la temperatura de disolución de la suspensión es inferior a las temperaturas de transición de fase de gel a cristal líquido de los lípidos. Los lípidos se acumularían en los filtros causando una restricción en el caudal, y en la mayoría de los casos, los filtros se bloquearían por completo poco tiempo después. Una reducción ulterior en el tamaño de partícula de la suspensión no puede conseguirse por un proceso de lotes convencional, incluso después de mezcladura prolongada (v.g. 6 horas) a temperaturas elevadas (v.g. 40ºC a 80ºC) con una hélice marina utilizada comúnmente.

Aunque es posible la filtración a temperaturas elevadas, v.g., por encima de las temperaturas de transición de fase de los lípidos, una cantidad importante de partículas mayores de lípidos quedarían excluidas todavía cuando se utiliza una presión de filtración normal. A su vez, las concentraciones del filtrado estéril podrían tener un contenido de lípidos variable de lote a lote dependiendo del modo en que se hidraten inicialmente los lípidos, lo cual viene determinado a su vez por las características físicas, v.g., morfología, de los materiales de partida.

El proceso de hidratación directa de los lípidos o mezclas de lípidos para producir una suspensión y filtración uniformes de la suspensión a través de uno o más filtros de esterilización puede ser difícil y costoso de escalar hasta a escala comercial razonable, v.g., > 20 l.

Así pues, los procesos reivindicados actualmente para fabricación de una mezcla de lípidos y la suspensión de fosfolípidos subsiguiente están orientados a resolver los problemas anteriores proporcionando un proceso práctico que pueda escalarse fácilmente y adaptarse a las diversas instalaciones de fabricación sin una modificación extensiva o adaptación importantes del equipo existente.

Sumario de la invención

De acuerdo con ello, un objeto de la presente invención es proporcionar un nuevo proceso para preparar una mezcla de lípidos.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar un nuevo proceso para preparar una suspensión de fosfolípidos a partir de la mezcla de lípidos.

Estos y otros objetos, que resultarán evidentes durante la descripción detallada que sigue, han sido alcanzados por el descubrimiento de los inventores de que la disolución de una mezcla de lípidos en un disolvente no acuoso adecuado antes de la introducción de una solución acuosa permite la producción de una suspensión de fosfolípidos.

Descripción detallada de la invención

[1] Así pues, en una primera realización, la presente invención proporciona un nuevo proceso para preparar una suspensión de fosfolípidos, que comprende:

[2] En una realización preferida, el disolvente no acuoso se selecciona de propilenglicol, etilenglicol, y polietilenglicol 300.

[3] En una realización más preferida, el disolvente no acuoso es propilenglicol.

[4] En la presente invención, la mezcla de lípidos comprende:

[5] En otra realización preferida, en el paso (1), el disolvente no acuoso se calienta a una temperatura de 30 a 70ºC antes de la puesta en contacto con la mezcla de lípidos.

[6] En otra realización más preferida, el disolvente no acuoso se calienta a una temperatura de 50 a 55ºC antes del contacto con la mezcla de lípidos.

[7] En otra realización preferida, la reacción de mezcla de lípidos a disolvente no acuoso es de 5 mg de mezcla de lípidos por ml del disolvente no acuoso a 15 mg/ml.

[8] En otra realización más preferida, la reacción de mezcla de lípidos a disolvente no acuoso es aproximadamente 10 mg/ml.

[9] En otra realización preferida, en el paso (2), la solución acuosa se selecciona de agua, solución salina, una mezcla solución salina/glicerina, y una mezcla solución salina/glicerina/disolvente no acuoso.

[10] En otra realización más preferida, la solución acuosa es una mezcla de solución salina y glicerina.

[11] En otra realización más preferida, la solución acuosa es una mezcla de solución salina, glicerina, y propilenglicol.

[12] En otra realización más preferida, están presentes 6,8...

1. Un proceso para preparar una mezcla de lípidos, que comprende:

en donde, en el paso (a), los lípidos son:

2. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde en el paso (a), el primer disolvente no acuoso es una mezcla de metanol y tolueno.

3. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde en el paso (c), el segundo disolvente no acuoso es un metil-t-butil-éter.

4. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde en el paso (a), la solución se calienta a una temperatura suficiente para completar la disolución de los lípidos en el disolvente.

5. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 4, en donde en el paso (a), la solución se calienta a 25 hasta 75ºC.

6. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde en el paso (d), los sólidos recogidos se lavan con metil-t-butil-éter y secan a vacío.

7. Un proceso para preparar una suspensión de fosfolípidos, que comprende:

8. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el disolvente no acuoso se selecciona de propilenglicol, etilenglicol, y polietilenglicol 300.

9. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el disolvente no acuoso es propilenglicol.

10. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual el disolvente no acuoso se calienta a una temperatura de 30 a 70ºC antes de ponerlo en contacto con la mezcla de lípidos.

11. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el disolvente no acuoso se calienta a una temperatura de 50 a 55ºC antes de ponerlo en contacto con la mezcla de lípidos.

12. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde la relación de mezcla de lípidos a disolvente no acuoso es de 5 mg de mezcla de lípidos por ml de disolvente no acuoso a 15 mg/ml.

13. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la relación de mezcla de lípidos a disolvente no acuoso es aproximadamente 10 mg/ml.

14. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde en el paso (2), la solución acuosa se selecciona de agua, solución salina, una mezcla solución salina/glicerina, y una mezcla solución salina/glicerina/disolvente no acuoso.

15. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 14, en donde la solución acuosa es una mezcla de solución salina y glicerina.

16. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 14, en donde la solución acuosa es una mezcla de solución salina, glicerina, y propilenglicol.

17. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde están presentes 6,8 mg/ml de cloruro de sodio, están presentes 0,1 ml/ml de glicerina, están presentes 0,1 ml/ml de propilenglicol y están presentes 0,75 a 1,0 mg/ml de la mezcla de lípidos.

18. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde están presentes 0,75 mg/ml de mezcla de lípidos.

19. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 17, en donde están presentes 1,0 mg/ml de mezcla de lípidos.

20. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 8 ó 10, en donde en el paso (2), la solución acuosa se calienta a una temperatura de 45 a 60ºC antes de ponerla en contacto con la solución del paso (1).

21. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 20, en donde la solución acuosa se calienta a una temperatura de 50 a 55ºC antes de ponerla en contacto con la solución del paso (1).

22. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7, 10 y 20, en donde el proceso comprende adicionalmente:

23. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 22, en donde en el paso (3), la suspensión de lípidos se calienta a una temperatura de al menos aproximadamente 67ºC.

24. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 22, en donde el proceso comprende adicionalmente:

25. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 24, en donde en el paso (4) la filtración se realiza utilizando dos cartuchos de filtro esterilizadores.

26. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 25, en donde en el paso (4), los cartuchos de filtro esterilizadores se encuentran a una temperatura de 70 a 80ºC.

27. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 26, en donde en el paso (4), se utilizan filtros hidrófilos de 0,2 µm.

28. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 24, en donde el proceso comprende adicionalmente:

29. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 28, en donde el proceso comprende adicionalmente:

30. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 29, en donde el gas perfluorocarbonado es perfluoropropano.

31. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 30, en donde el intercambio del gas del espacio de cabeza se realiza utilizando una cámara de liofilización.

32. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 29, en donde el proceso comprende adicionalmente:

33. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 32, en donde en el paso (7), el vial se esteriliza a 126-130ºC durante 1 a 10 minutos.