Péptido específico de la angiogénesis que migra selectivamente a los tejidos neovasculares que comprende uno de los elementos presentados a continuación en (a) y (b):

(a) péptido que presenta una de las secuencias de aminoácidos representadas en SEC ID nº 5 y 6, o un dendrímero del mismo,

(b) péptido que presenta una secuencia de aminoácidos representada en secuencias SEC ID nº 13 a 16 y 28 a 32, o un dendrímero del mismo

Péptidos específicos neovasculares.

Campo técnico

La presente invención describe moléculas peptídicas que migran específicamente a los tejidos neovasculares y, más particularmente, péptidos específicos de la angiogénesis (específicos neovasculares) que funcionan como ligandos de células endoteliales neovasculares de tejidos cancerosos, por ejemplo, y que resultan útiles como fármacos moleculares y aplicables a preparaciones de sistema de administración de fármaco (DDS) que permiten la administración farmacológica selectiva en tejidos diana y pueden contribuir a mejorar los efectos terapéuticos en el cáncer.

Antecedentes de la técnica

Uno de los factores que dificultan la quimioterapia exitosa del cáncer radica en el hecho de que el fármaco administrado elimina o daña no sólo los tejidos cancerosos diana, sino también tejidos normales, provocando efectos adversos. Los sistemas de administración de fármaco (DDS) han recibido atención en el campo de la terapia del cáncer como medio para minimizar dichos efectos secundarios y conseguir una mejora de la eficacia de los agentes anticáncer.

Los DDS mencionados anteriormente con diana en el cáncer pueden clasificarse en dos tipos: de direccionamiento pasivo y de direccionamiento activo. Debido a que los tejidos neovasculares muestran una permeabilidad vascular incrementada en comparación con los vasos preexistentes, una preparación del tipo de larga retención en sangre se acumula gradualmente en los tejidos cancerosos. El direccionamiento pasivo es el direccionamiento que utiliza esta propiedad. Una preparación de direccionamiento pasivo en la que se utilizan liposomas ya ha sido utilizada en Europa y en América en el tratamiento del sarcoma de Kaposi. Por otra parte, se ha concebido una preparación de direccionamiento activo mediante la modificación del fármaco con un anticuerpo o con algún otro ligando capaz de unirse a un marcador de superficie celular, tal como una proteína, altamente expresado en células cancerosas o tejidos circundantes de las mismas, de manera que el fármaco puede administrarse activa y selectivamente en las células cancerosas sin causar efectos perjudiciales en los tejidos normales.

En el campo de la terapia actual del cáncer, la angiogénesis se ha convertido en un foco de atención. El término "angiogénesis" se refiere al desarrollo de vasos sanguíneos dentro de tejidos cancerosos en paralelo al crecimiento de los tumores en el progreso del cáncer. De esta manera, para la proliferación activa de las células cancerosas, y el crecimiento y metástasis de los tejidos cancerosos, resulta importante que los vasos sanguíneos, que son órganos que actúan en la alimentación con nutrientes y oxígeno y en la eliminación de metabolitos y materiales de desecho, sean construidos nuevamente. A este respecto, el crecimiento de los tejidos cancerosos puede ser altamente dependiente de la angiogénesis.

Se considera que al inhibir dicha angiogénesis, puede evitarse el crecimiento y metástasis de los tejidos cancerosos. Se ha demostrado la inhibición de la angiogénesis inducida tumoralmente por péptidos que se unen a la angiogenina (Gho Yong Song et al., J. Biol. Chem. 272 nº 39: 24294-24299, 1997). Desde este punto de vista, se desea en el campo de la técnica que se desarrolle una terapia del cáncer con diana en tejidos neovasculares, en particular una preparación de direccionamiento activo (preparación de DDS).

Exposición de la invención

La identificación, aislamiento y puesta a disposición de una sustancia que puede actuar como ligando de células endoteliales neovasculares en un tejido canceroso conducirá a su aplicación en preparaciones de DDS y a mejoras adicionales en la eficiencia de la terapia del cáncer.

Un objetivo de la presente invención consiste en proporcionar dicho nuevo ligando.

Otro objetivo de la invención consiste en proporcionar una sustancia capaz de inhibir la angiogénesis.

Durante el curso de investigaciones intensivas realizadas con los objetivos mencionados anteriormente, se obtuvieron los resultados mencionados posteriormente. De esta manera, en primer lugar se indujo la formación de tejidos tumorales neovasculares en el dorso de ratones mediante el método del anillo con cámara (Folkman J. et al., J. Exp. Med. 133: 275-288, 1971). A continuación, se administró en los ratones un fago de expresión de péptidos aleatorios construido mediante la inserción de ADN aleatorios en el gen de la proteína pIII de cubierta del fago, para permitir de esta manera la expresión de péptidos aleatorios que presentan una secuencia de 15 aminoácidos en la cubierta fágica. A continuación, se congelaron los ratones con nitrógeno líquido y se diseccionaron las partes de la piel que presentaban tejidos neovasculares, se homogeneizaron en un medio de cultivo que contenía un inhibidor de proteasa, se lavaron y se centrifugaron, recuperando de esta manera el fago a partir de los tejidos neovasculares. Se introdujo el fago mediante infección en Escherichia coli, que se cultivó en masa. Tras el aislamiento y la purificación, se obtuvo un fago capaz de expresar un péptido que se acumula en el endotelio del tejido neovascular y actúa como ligando. Para una pluralidad de fagos así obtenidos se secuenciaron los péptidos expresados por los mismos.

A continuación, para seleccionar un fago que expresase un péptido con elevada afinidad para los tejidos neovasculares, cada fago obtenido de la manera mencionada anteriormente se administró en la vena de la cola de ratones portadores tumorales preparados mediante implantación de células tumorales. Los ratones se congelaron de la misma manera que se ha indicado anteriormente, se diseccionaron los tejidos tumorales y los fagos se aislaron y se purificaron a partir de los materiales obtenidos y se utilizaron para infectar Escherichia coli, seguido del cultivo. Además, para cada fago se contaron las unidades formadoras de colonia, utilizando el fago antes de la selección como control. Se calculó la afinidad para los tejidos neovasculares en términos de la proporción entre el número de fagos administrado en la vena de la cola y el número de fagos acumulados por 100 mg de tejido tumoral. De esta manera, se obtuvieron péptidos candidatos para ligandos con elevada afinidad para tejidos neovascu- lares.

Además, se sintetizaron los péptidos mencionados anteriormente, los dendrímeros de los mismos, péptidos parciales de los mismos y similares, y confirmaron que estos los péptidos realmente muestran efectos antitumorales y, simultáneamente, confirmaron que los liposomas modificados con los péptidos, en particular el péptido que contiene la secuencia Trp-Arg-Pro, muestra niveles significativamente más altos de distribución en el tumor en comparación con el control.

La presente invención se llevó a cabo basándose en dichos resultados.

La invención proporciona un péptido específico de la angiogénesis que migra selectivamente a los tejidos neovasculares, que comprende uno de los elementos indicados a continuación en (a) y (b):

En particular, la invención proporciona un péptido específico de la angiogénesis tal como se ha indicado anteriormente que es un péptido que presenta una de las secuencias de aminoácidos mostradas en las secuencias SEC ID nº 5 y 6, o un dendrímero de las mismas, un péptido específico de la angiogénesis tal como se ha indicado anteriormente que es un dendrímero que comprende una pluralidad de péptidos que son iguales o diferentes y que presentan una de las secuencias de aminoácidos mostradas en la secuencia SEC ID nº 5 y 6, un péptido específico de la angiogénesis tal como se ha indicado anteriormente que es un péptido que presenta una de las secuencias de aminoácidos mostradas en las secuencias SEC ID nº 13 a 16, o un dendrímero de las mismas, y un péptido específico de la angiogénesis tal como se ha indicado anteriormente que es un péptido que presenta una de las secuencias de aminoácidos mostradas en las secuencias SEC ID nº 28 a 32, o un dendrímero de las mismas.

La invención proporciona además un péptido específico de la angiogénesis tal como se ha indicado anteriormente...

1. Péptido específico de la angiogénesis que migra selectivamente a los tejidos neovasculares que comprende uno de los elementos presentados a continuación en (a) y (b):

2. Péptido específico de la angiogénesis según la reivindicación 1, que es un péptido que migra selectivamente a los tejidos neovasculares desarrollados en los tejidos cancerosos/tumorales.

3. Péptido específico de la angiogénesis según la reivindicación 2, en el que los tejidos cancerosos/tumorales son tejidos de sarcoma o de melanoma.

4. Composición anticáncer o inhibidora de la metástasis cancerosa, que comprende por lo menos un péptido específico de la angiogénesis según la reivindicación 2 ó 3 como ingrediente activo, junto con un portador farmacéutico para el mismo.

5. Preparación de liposomas, que comprende por lo menos un péptido específico de la angiogénesis según la reivindicación 2 ó 3, y un agente anticáncer o un inhibidor de la metástasis cancerosa como ingredientes activos, junto con un portador farmacéutico para el mismo.

6. Preparación de liposomas según la reivindicación 5, en la que el péptido específico de la angiogénesis es un péptido que presenta una de las secuencias de aminoácidos representadas en SEC ID nº 15 y 16, o un dendrímero del mismo.

7. Utilización del péptido específico de la angiogénesis según la reivindicación 2 ó 3, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de cáncer/tumores o a la inhibición de la metástasis cancerosa.

8. Utilización según la reivindicación 7, en la que el péptido específico de la angiogénesis es un péptido que presenta una de las secuencias de aminoácidos representada en SEC ID nº 5, 6, 13 a 16 y 28 a 32, o un dendrímero del mismo.

9. Utilización del péptido específico de la angiogénesis según la reivindicación 2 ó 3, para la preparación de una preparación de liposomas según la reivindicación 5 destinada al tratamiento de cáncer/tumores o a la inhibición de la metástasis cancerosa.