Una composición que comprende un agente terapéutico eficaz para reducir la cantidad de hsp27 activo en células que expresan hsp27 expuestas al agente terapéutico,

en donde el agente terapéutico es un oligonucleótido que comprende una secuencia complementaria a la secuencia con número de identificación 91

Oligonucleótidos para el tratamiento del cáncer de próstata y otros cánceres.

Esta solicitud reivindica los beneficios de los documentos de solicitud provisional de Estados Unidos números 60/415.859 presentado el 2 de Octubre de 2002 y 60/463.952 presentado el 18 de Abril de 2003.

Antecedentes de la invención

Esta solicitud se refiere a las composiciones y usos para el tratamiento del cáncer de próstata y otros cánceres que expresan concentraciones elevadas de hsp27 en comparación con los tejidos normales en al menos algunas etapas del desarrollo de la enfermedad.

El cáncer de próstata es el cáncer más corriente entre los hombres, y la segunda causa principal de las muertes por cáncer en los hombres en el mundo occidental. Debido a que el cáncer de próstata es un tumor sensible a los andrógenos, la eliminación de andrógenos, por ejemplo por medio de la castración, se utiliza en algunos regímenes terapéuticos de pacientes con cáncer de próstata avanzado. La eliminación de andrógenos conduce a la apoptosis extensa en el tumor de próstata, y por lo tanto a una regresión de la enfermedad. Sin embargo, la apoptosis inducida por la castración no es completa, y por último se establece una progresión de células tumorales supervivientes que son independientes de los andrógenos. Esta progresión es el obstáculo principal para mejorar la supervivencia y la calidad de vida, y por lo tanto se han realizado esfuerzos para establecer como dianas estas células independientes de los andrógenos. Estos esfuerzos se han focalizado en terapias no hormonales que tienen como diana las células tumorales independientes de andrógenos (Pagoda et al., Cancer 71 (Suplemento 3): 1098-1109 (1993); Oh et al., J. Urol. 60: 1220-1229 (1998)), sin embargo hasta ahora ningún agente no horrizorial ha mejorado la supervivencia. Por lo tanto están indicadas las aproximaciones alternativas.

Se ha observado que numerosas proteínas se expresan en mayor cantidad en las células tumorales prostáticas después de la eliminación de andrógenos. Se asume que al menos algunas de estas proteínas están asociadas con la muerte celular apoptótica que se observa con la eliminación de andrógenos. (Raffo et al., Cancer Res.,: 4448-4445 (1995); Krajewska et al., Am. J. Pathol. 148: 1567-1576 (1996); McDonnell et al., Cancer Res. 52: 6940-6944 (1992).

Garrido et al., Eur. J. Biochem, 237:653-659 (1996) describen una terapia de cáncer de colon humano por el antisentido de longitud completa de hsp27 que se expresa in vivo.

Compendio de la invención

La presente invención usa agentes terapéuticos que tienen la proteína de shock térmico (hsp) 27 como diana in vivo para proporcionar un tratamiento a individuos, particularmente individuos que son seres humanos, que sufren de cáncer de próstata y de otros cánceres que sobreexpresan hsp27. Según la invención, un agente terapéutico, por ejemplo un oligonucleótido antisentido o un inhibidor nucleótido ARNi con especificidad de secuencia para el ARNm de hsp27, por ejemplo ARNm de hsp27 humano, se administra a un individuo que sufre de cáncer de próstata o algún otro cáncer que exprese concentraciones elevadas de hsp27 en una cantidad terapéuticamente eficaz. El agente terapéutico es formulado adecuadamente como una composición farmacéutica que incluye un vehículo farmacéuticamente aceptable, y empaquetado en forma de dosificación unitaria. Una forma de dosificación unitaria preferida es una forma unitaria de dosificación inyectable.

Breve descripción de los dibujos

Las figuras 1 A-G muestran los resultados de las pruebas de expresión de mARN en células expuestas a los oligonucleótidos antisentido de las secuencias con número de identificación 1-81.

La figura 2 muestra el efecto del antisentido de hsp27 en la expresión de hsp27 en células PC3.

Las figuras 3A y 3B muestran el volumen tumoral y el PSA sérico después del tratamiento con el antisentido de hsp27.

Las figuras 4A y 4B muestran cambios en el volumen tumoral después del tratamiento con el antisentido de hsp27 con y sin taxol.

La figura 5 muestra la reducción del mARN de hsp27 después del tratamiento con ARNi.

Las figuras 6A y 6B muestran las cantidades de proteína hsp27 expresada después del tratamiento con ARNi.

Las figuras 7A-7C muestran los resultados del tratamiento con antisentido y ARNi de las células de cáncer de próstata.

La figura 8 muestra la expresión de hsp27 en células T24 de cáncer de vejiga.

La figura 9 muestra la inmunorreactividad de hsp27 determinada por la evaluación inmunohistológica de hsp27 en una matriz de tejido NHT.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a composiciones que reducen la cantidad efectiva de hsp27 activo in vivo. Composiciones ejemplarizantes útiles en la invención son oligonucleótidos hsp27 antisentido o inhibidores nucleótidos ARNi. La invención se refiere además al uso de estas composiciones en el tratamiento del cáncer de próstata y otros cánceres que expresan hsp27 en cantidades elevadas.

Como se usa en la memoria y reivindicaciones de esta solicitud, el término "hsp27 activo" se refiere a hsp27 que es activo como chaperona para estabilizar la estructura de las proteínas en momentos de estrés y que en particular inhibe la actividad de la caspasa-3, un mediador de la apoptosis. La reducción de las concentraciones de hsp27 activo puede conseguirse reduciendo la cantidad total de hsp27, tanto restringiendo la producción de hsp27 como degradando hsp27 a una velocidad mayor que a la que se está produciendo, por medio de la conversión de hsp27 a una forma inactiva, por ejemplo secuestrando hsp27 en un complejo inactivo tal como uno con un anticuerpo antihsp27.

Como se usa en la memoria y sus reivindicaciones, los cánceres que pueden ser tratados son aquellos que expresan hsp27 en cantidades elevadas en comparación con células no cancerosas del mismo tipo de tejido. Cánceres ejemplarizantes incluyen sin limitación el de próstata, vejiga, pulmón, mama, osteosarcoma, cáncer de páncreas, colon, melanoma, cáncer de testículo, colorectal, urotelial, de célula renal, hepatocelular, leucemias, linfomas, y cáncer de ovarios y cáncer maligno del sistema nervioso central.

Como se usa en la memoria y sus reivindicaciones, el término "especificidad de la secuencia" se refiere a la existencia de una relación complementaria, usando el apareamiento de bases de Watson-Crick, entre el oligonucleótido y la diana hsp27 que es suficiente para proporcionar una unión específica en condiciones intracelulares. La complementaridad perfecta es deseable, pero no es absolutamente requerida, particularmente cuando se emplean oligonucleótidos más largos.

La secuencia del mARN de hsp27 humana es conocida, por ejemplo por los números de acceso del NCBI AB020027, X54079, NM_006308, NM_001540 y NM_001541. La secuencia de cADN (secuencia de número de identificación 91) forma la base para el desarrollo de oligonucleótidos antisentido e inhibidores nucleótidos ARNi. Las secuencias preferidas para antisentido, y para ARNi son aquellas cuyas dianas son bases en las regiones de nucleótidos 131-161, 241-261, 361-371, 551-580, 661-681 y 744-764 en la secuencia de número de identificación 91. Para tener como dianas bases en estas regiones, una molécula antisentido o molécula de ARNi debe tener especificidad de secuencia con una región que incluye al menos una de las bases listadas, preferiblemente al menos 10 de las bases listadas.

Los oligonucleótidos antisentido adecuados tienen una longitud de 12 a 35 oligonucleótidos y tienen especificidad de secuencia para la secuencia de mARN de hsp27. Los oligonucleótidos antisentido que se hicieron y probaron en cuanto a su habilidad para reducir la cantidad de mARN de hsp27 activo se presentan como las secuencias de número de identificación 1 a 82. Oligonucleótidos antisentido preferidos tienen la secuencia 5'-ggggacgcggcgctcggtcat-3' (secuencia con número de identificación 81) o 5'-gggacgcggcgctcggtcat-3' (secuencia con número de identificación 82) cuya diana es el lugar de iniciación de translación del mARN de hsp27, así como aquellas con números de identificación 25, 36, 56, 57, 67 y 76.

El ARN interferente o "ARNi" es un término creado inicialmente por Fire y colegas para describir la observación de que el ARN de hebra doble (dsARN) puede bloquear la expresión de genes cuando...

1. Una composición que comprende un agente terapéutico eficaz para reducir la cantidad de hsp27 activo en células que expresan hsp27 expuestas al agente terapéutico, en donde el agente terapéutico es un oligonucleótido que comprende una secuencia complementaria a la secuencia con número de identificación 91.

2. La composición de la reivindicación 1, en donde la composición comprende un oligonucleótido antisentido como agente terapéutico.

3. La composición de la reivindicación 2, en donde el oligonucleótido antisentido tiene modificaciones en el esqueleto que proporcionan resistencia a la digestión de las nucleasas in vivo.

4. La composición de las reivindicación 2 o 3, en donde el oligonucleótido antisentido tiene una longitud de 12 a 35 nucleótidos.

5. La composición de la reivindicación 4, en donde el oligonucleótido antisentido comprende una serie consecutiva de bases como se establece en cualquiera de las secuencias de número de identificación 1-81.

6. La composición de la reivindicación 5, en donde el oligonucleótido antisentido comprende una serie consecutiva de bases como se establece en la secuencia de número de identificación 82.

7. La composición de la reivindicación 1, en donde la composición comprende como composición terapéutica un ARNsi que es específico en la secuencia para la secuencia de número de identificación 91.

8. La composición de la reivindicación 7, en donde el ARNsi tiene unas modificaciones del esqueleto que proporcionan resistencia a la digestión de las nucleasas in vivo.

9. La composición de las reivindicación 7 o 8, en donde el ARNsi tiene una longitud de 16 a 49 nucleótidos.

10. La composición de la reivindicación 9, en donde el ARNsi comprende una serie consecutiva de bases como se establece en cualquiera de las secuencias de número de identificación 83-90.

11. La composición de la reivindicación 9, en donde el ARNsi comprende una serie consecutiva de bases como se establece en la secuencia de número de identificación 84.

12. El uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-11 en la formulación de una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer.

13. El uso de la reivindicación 12, en donde el cáncer es de próstata, vejiga, pulmón, mama, de páncreas, de colon, de piel (por ejemplo melanoma), renal o de los ovarios o un cáncer maligno del sistema nervioso central.

14. El uso de la reivindicación 12 o 13, en donde la composición farmacéutica está empaquetada en formas unitarias de dosificación inyectables.