MVA QUE EXPRESA GENES DE ENVOLTURA, GAG Y POL DE VIH MODIFICADOS.

Una composición farmacéutica que comprende un virus MVA recombinante que codifica Gag/Pol de HXB2 de MVA 48 (SEQ ID NO:

5) y la envoltura de ADA truncada (SEQ ID NO: 3)

MVA que expresa genes de envoltura, gag y pol de VIH modificados.

Campo técnico de la invención

La invención proporciona un virus vaccinia Ankara modificado (MVA), una cepa del virus vaccinia de replicación deficiente, que expresa los genes env, gag y pol del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).

Antecedentes de la invención

La inmunidad celular juega un papel importante en el control de las infecciones con virus de inmunodeficiencia (P. J. Goulder et al. 1999 AIDS 13:S121). Recientemente, una vacuna de ADN diseñada para aumentar la inmunidad celular por aumento de citoquina incluyó satisfactoriamente un virus de provocación de la inmunodeficiencia altamente virulento (D.H. Barouch et al. 2000 Science 290-486). Otra aproximación prometedora para aumentar la inmunidad celular es la inducción (priming) con ADN seguida de la potenciación (boosting) con poxvirus recombinantes. (H.L. Robinson et al. 2000 AIDS Rev 2:105). Este régimen de inducción/potenciación heterólogo induce frecuencias de células T de 10 a 100 veces más altas que la inducción/potenciación con ADN o las vacunas de poxvirus recombinantes en solitario. Anteriormente, los investigadores demostraron que la potenciación con un poxvirus de una respuesta inducida con ADN era superior que la potenciación con ADN o proteína para el control de un virus de inmunodeficiencia no patógeno (H.L. Robinson et al. 1999 Nat Med 5:526). Moss et al describen composiciones de vacunas que comprenden un MVA recombinante que contiene los genes gag-pol del virus de la inmunodeficiencia de simios (VIS) y el gen env de VIH truncado para la inducción de una respuesta inmune protectora en monos (Moss et al: Retroviruses of human AIDS and related animal diseases, Colloque des Cent Gardes, 12 th 25 October 1999-27 October 1999, París, Francia, paginas 105-107). Existe la necesidad de controlar el virus patógeno de la inmunodeficiencia.

Compendio de la invención

Se describe aquí que la inducción con ADN seguida de una potenciación con un virus vaccinia Ankara modificado recombinante (rMVA) ha controlado un virus de provocación de la inmunodeficiencia altamente patógeno en un modelo de macaco rhesus. Tanto el componente ADN como el componente rMVA de la vacuna expresaban múltiples proteínas del virus de la inmunodeficiencia. Dos inoculaciones de ADN en las semanas 0 y 8 y un único refuerzo de rMVA en la semana 24 controlaron eficazmente una prueba de provocación intrarectal administrada siete meses después de la potenciación. Estos descubrimientos se prevén como la indicación de que una vacuna relativamente simple de ADN/MVA que libera múltiples proteínas puede ayudar a controlar la epidemia del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). También se describe que las inoculaciones de rMVA inducen respuestas inmunes buenas incluso sin el estímulo de ADN.

Descripción breve de las figuras

Figura I. Las relaciones filogenéticas del VIH-1 y VIH-2 se basan en la identidad de las secuencias del gen pol. VIS _cpz y VIS _smm son lentivirus de primates subhumanos recuperados de un chimpancé y de un mono magabeye gris, respectivamente.

Figura II. Las relaciones filogenéticas de los grupos M, N y O del VIH-1 con cuatro aislados diferentes de VIS _cpz se basan en la secuencias completas del gen pol. La barra indica una distancia genética de 0,1 (divergencia del 10% de los nucleótidos) y el asterisco sitúa los aislados de grupo N del VIH-1 en base a las secuencias de env.

Figura III. Propiedades biológicas y trópicas de los aislados de VIH-1.

Figura IV. Proteínas codificadas por VIH. Se indica la localización de los genes de VIH, los tamaños de los productos primarios de traducción (en algunos casos poliproteínas) y las proteínas virales maduras procesadas.

Figura V. Representación esquemática de un virión de VIH-1 maduro.

Figura VI. Representación lineal de la glicoproteína Env de VIH-1. La flecha indica el sitio de escisión gp160 para gp120 y gp41. In gp120, las áreas de entramado representan los dominios variables (V₁ a V₅), las casillas en blanco indican las secuencias conservadas (C₁ a C₅). En el ectodominio gp41 se indican varios dominios: el péptido de fusión N-terminal, y los dos ectodominios helicoidales (hélice-N y C). El dominio de transmembrana se representa por una casilla negra. En el dominio citoplásmico gp41, se indica el motivo de endocitosis Tyr-X-X-Leu (YXXL) (SEQ ID NO: 9) y dos motivos helicoidales predichos (hélices-1 y 2). Se indica la numeración de los aminoácidos.

Figura 1. Frecuencias temporales de las células T específicas para Gag. (A) respuestas de las células T CD8 específicas para Gag provocadas por inmunizaciones por inducción con ADN y potenciación con rMVA. El esquema presenta el promedio de los datos del tetrámero-CM9-Gag generados en animales inmunizados i.d. con dosis de ADN alta. (B) ELISPOT de IFN-? específico para Gag en macacos A*01 (barras en blanco) y no-A*01 (barras con entramado) en diversos momentos antes de la prueba de provocación y dos semanas después de la prueba de provocación. Los números que están encima de las barras de datos representan el promedio aritmético ± la DS para el resultado de ELISPOT dentro de cada grupo. Los números en la parte superior de los gráficos designan animales individuales. *, datos no disponibles; #, ELISPOT <20 por 1x10⁶ células mononucleares de sangre periférica (PBMC). Los datos temporales para células T específicas para el tetrámero Gag-CM9-Mamu-A*01 se pueden encontrar en la Figura 6.

Figura 2. Las cargas virales temporales, el recuento de CD4, y la supervivencia después de la prueba de provocación en animales vacunados y control. (A) El promedio geométrico de las cargas virales y (B) el promedio geométrico del recuento de CD4. (C) La curva de supervivencia para animales vacunados y control. La línea de puntos representa a todos los 24 animales vacunados. (D) Cargas virales. (E) Recuento de CD4 para animales individuales en los grupos vacunados y control. La clave de los números de los animales se presenta en (E). Los ensayos para las primeras 12 semanas después de la prueba de provocación tenían un nivel de detección de 1000 copias de ARN por milímetro de plasma. Los animales con cargas inferiores a 1000 se puntuaron con una carga de 500. Durante las semanas 16 y 20, el nivel de detección fue de 300 copias de ARN por milímetro. Los animales con niveles de virus inferiores a 300 se puntuaron con 300.

Figura 3. Las repuestas de las células T post provocación en grupos vacunados y control. (A) células tetrámero⁺ temporales (línea discontinua) y cargas virales (línea continua). (B) ensayos de citoquinas intracelulares para la producción de IFN-? en respuesta frente a la estimulación con péptidos Gag-CM9 dos semanas después de la provocación. Este ensayo ex vivo permite la evaluación del estatus funcional del pico de las células tetrámero⁺ representadas en la Figura 1A. (C) El ensayo de proliferación a las doce semanas de la provocación. Se utilizaron para estimulación Gag-Pol-Env (barras en blanco) y Gag-Pol (barras con entramado) producidas por transfección transitoria. Los sobrenadantes de los cultivos que simulan transfección sirvieron como antígeno control. Los índices de estimulación son el crecimiento de los cultivos en presencia de antígenos virales dividido por el crecimiento de los cultivos en presencia de antígeno simulado.

Figura 4. La histomorfología del nódulo linfático a las doce semanas de la provocación. (A) El nódulo linfático típico de un macaco vacunado que muestra evidencia de una hiperplasia caracterizada por la presencia de numerosos folículos secundarios con centros germinales expandidos y zonas discretas oscuras y claras. (B) Nódulo linfático típico de un animal control infectado que muestra una depleción folicular y una atrofia linfocelular paracortical. (C) Un nódulo linfático representativo de macacos del mismo grupo de edad, no infectados que presentan centros germinales no reactivos. (D) El porcentaje del área total de nódulos linfáticos ocupada por los centros terminales se midió para dar un indicador no específico de la hiperplasia folicular. Los datos para los controles no infectados son para macacos rhesus de cuatro grupos de edad.

Figura 5. Respuestas temporales de anticuerpos. Se determinaron los microgramos...

1. Una composición farmacéutica que comprende un virus MVA recombinante que codifica Gag/Pol de HXB2 de MVA 48 (SEQ ID NO: 5) y la envoltura de ADA truncada (SEQ ID NO: 3).

2. Uso de una composición de la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para potenciar una respuesta inmune de la célula T CD8+ frente a un antígeno de Env, Gag, o Pol de VIH en un primate, por lo que se potencia en un primate una respuesta inmune de la célula T CD8+ frente al antígeno previamente inducido.

3. Uso de una composición de la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para inducir una respuesta inmune de la célula T CD8+ frente a un antígeno de Env, Gag, o Pol de VIH en un primate, por lo que se induce una respuesta inmune de la célula T CD8+ frente al antígeno en un primate.

4. Uso de una composición inductora que comprende un ácido nucleico que codifica un antígeno Env, Gag o Pol de VIH y una composición potenciadora que comprende una composición de la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para inducir una respuesta inmune de la célula T CD8+ frente a un antígeno de Env, Gag o Pol de VIH en un primate, por lo que se induce una respuesta inmune de la célula T CD8+ frente al antígeno.

5. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, donde el primate es un ser humano.

6. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, donde el virus recombinante MVA se administra mediante inyección sin aguja.

7. El uso de la reivindicación 4, donde la composición inductora comprende un plásmido de ADN que codifica dicho antígeno.

8. Un método para preparar una composición de la reivindicación 1 que comprende: