Vacuna contra la viruela.

Una composición farmacéutica que comprende (i) una cepa clonal del virus variolovacunal atenuado que se aísla de células cultivadas en las que se ha cultivado Dryvax®

o ACAM 1.000 (depósito ATCC Nº PTA-3321), es capaz de inducir una respuesta inmunitaria protectora o terapéutica contra el virus de la viruela en un ser humano y, cuando se administra a un ser humano en una cantidad eficaz para inducir una respuesta inmunitaria protectora o terapéutica contra el virus de la viruela en dicho ser humano, está aceptablemente atenuada en dicho ser humano; y

(ii) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable,

donde dicho virus variolovacunal tiene la misma virulencia que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (Nº de depósito en la ATCC PTA-3.321),

donde dicho virus variolovacunal tiene la misma inmunogeneicidad que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (Nº de depósito en la ATCC PTA-3.321), y

donde dicho virus variolovacunal tiene el mismo patrón de digestión que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (Nº de depósito en la ATCC PTA-3.321), cuando se digiere con la endonucleasa de restricción HindIII

Vacuna contra la viruela

Antecedentes de la invención El virus de la viruela, el agente causante de la viruela, es un miembro del género Ortopoxvirus, que también incluye la viruela de los monos, la viruela vacuna y los virus variolovacunales. La enfermedad causada por las cepas principales de la viruela se caracteriza por una dosis infecciosa baja (10 -100 viriones) , un periodo de incubación largo (un promedio de 12 días) , fiebre, síntomas de constitución, erupción en progreso a etapa pustular, muerte en hasta el 30 % de los afectados y cicatrices faciales en los supervivientes. La enfermedad se transmite de una persona a otra a través de las vías respiratorias por contacto (gotas) y, posiblemente, por aerosol.

La viruela fue una de las causas más importantes de morbididad y mortalidad en todo el mundo durante la primera mitad del siglo XX. Sin embargo, en parte debido a la falta de reservorio animal para el virus, el uso sistemático de una vacuna (virus variolovacunal vivo atenuado) fue muy eficaz en la lucha contra esta enfermedad. De hecho, entre 1967 y 1977, un programa global de erradicación de la viruela dio lugar a la eliminación de la enfermedad natural (Fenner et al., OMS, Ginebra, pág. 1460, 1988) . Debido a la ausencia de la viruela y al riesgo de eventos adversos relacionados con la vacuna, la vacunación sistemática de los niños, el personal del hospital y el personal militar ha cesado, y actualmente solo se inmuniza a las personas que trabajan con el virus variolovacunal y virus relacionados en el laboratorio. Por lo tanto, una parte sustancial de la población mundial no tiene inmunidad a la viruela. La población restante tiene poca inmunidad residual, dado que la inmunidad de la vacuna dura sólo 5 años después de la vacunación primaria y menos de 20 años después de la revacunación. Por tanto, la erradicación de la viruela y el cese de la vacunación han creado vulnerabilidad en la población para cubrir un ataque o guerra biológica con el

virus de la viruela. Si esto pasara, la propagación de la epidemia no estaría controlada por una barrera inmunológica en la población (Anon. (Editorial) , Lancet 353:1539, 1999; Henderson, Science 283:1279 -1282, 1999; Henderson et al., J.A.M.A. 281:2127 -2137, 1999) .

Debido a las incertidumbres en torno a la erradicación de la viruela, la vacuna se almacenó para uso de emergencia. En Estados Unidos, por ejemplo, inicialmente 155.000 viales de la vacuna (nominalmente 15, 5 millones de dosis) producidos por Wyeth Laboratories se almacenaron bajo el control de los Centros para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC) , de Atlanta, Georgia, EE.UU. En una reunión del Comité Asesor Nacional de Vacunas en enero de 1999, el CDC informó sobre el estado del almacén nacional de la vacuna contra la viruela. En ese momento, de los 15, 5 millones de dosis en poder de Wyeth, 3, 4 millones de dosis no habían pasado las pruebas de control de calidad y 10, 3 millones habían pasado la fecha de caducidad especificada por la última prueba de control para la datación extendida, dejando 1, 7 millones dosis que cumplen las especificaciones de liberación (LeDuc, Presentation to the National Vaccines Advisor y Committee, Washington D.C., Jan. 11 -12.1999) . Además de la oferta limitada, la vacuna se envasa en 100 viales de dosis, lo que restringe la distribución y aumenta la probabilidad de desperdicio durante una emergencia.

Además de las reservas de Estados Unidos, existe un suministro de la vacuna (Lister, cepa Elstree) almacenado en el Instituto Nacional de Salud Pública, Bilthoven, Países Bajos, y algunos otros países tienen suministros de la vacuna contra la viruela, que en el momento de la erradicación puede tener incluidos hasta 300 millones de dosis. Sin embargo, problemas similares de la estabilidad durante el almacenamiento han reducido esta oferta a menos de 45 50 millones de dosis (Henderson, Science 283: 1279 -1282, 1999) .

Kutinova et al., Vaccine, 1995; 13 (5) : 487 -493 divulgan la búsqueda de la matriz óptima para las vacunas contra el virus variolovacunal recombinante y el estudio de tres cepas vacunales del virus variolovacunal y varias líneas de virus derivadas de las mismas. El documento US-A-4315914 divulga composiciones que comprenden una cepa atenuada del virus variolovacunal como ingrediente activo y su uso como agentes inmunopotenciadores celulares y antitumorales.

Sumario de la invención 55 La invención proporciona cepas estables del virus variolovacunal que se aíslan de células cultivadas en las que se ha propagado Dr y vax® y que tienen características que los hacen adecuados para su uso como vacunas humanas contra la viruela. La invención también proporciona métodos de generación de estas cepas y métodos de su uso para prevenir la infección y la enfermedad de la viruela.

Por consiguiente, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende (i) una cepa clonal del virus variolovacunal atenuado que se aísla de células cultivadas en las que se ha cultivado Dr y vax® o ACAM 1.000 (depósito ATCC Nº PTA-3321) y es capaz de inducir una respuesta inmunitaria protectora o terapéutica contra el virus de la viruela en un ser humano y, cuando se administra a un ser humano en una cantidad eficaz para inducir una respuesta inmunitaria protectora o terapéutica contra el virus de la viruela en dicho ser humano, está

aceptablemente atenuada en dicho ser humano; y (ii) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, donde dicho virus variolovacunal tiene la misma virulencia que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (Nº de

depósito en la ATCC PTA-3.321) , donde dicho virus variolovacunal tiene la misma inmunogeneicidad que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (Nº de depósito en la ATCC PTA-3.321) , y donde dicho virus variolovacunal tiene el mismo patrón de digestión que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000

(Nº de depósito en la ATCC PTA-3.321) , cuando se digiere con la endonucleasa de restricción HindIII.

Preferentemente, el virus variolovacunal se produce en sustancialmente las mismas o mayores cantidades que Dr y vax® cuando se inoculan en cultivos celulares.

La cepa clonal tiene la misma virulencia e inmunogenicidad que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (depositada como Nº de Depósito en la ATCC PTA-3.321 el 19 de de abril de 2001; véase el clon 2, a continuación) cuando se analiza en modelos animales apropiados o en seres humanos. Preferentemente, dicho virus variolovacunal se produce en sustancialmente las mismas o mayores cantidades que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 cuando se inoculan en cultivos celulares. Dicho virus variolovacunal tiene el mismo patrón de digestión que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 cuando se digiere con la endonucleasa de restricción HindIII. Un ejemplo de un virus variolovacunal que se incluye en la invención es ACAM1000 (nº de depósito en la ATCC PTA-3321) .

La invención se refiere a una composición de la invención para su uso en un método para prevenir o tratar la infección por el virus de la viruela en un paciente mediante la administración al paciente de dicha composición farmacéutica, así como el uso de dicha composición en la preparación de un medicamento para este propósito. La composición farmacéutica puede administrarse al paciente mediante, por ejemplo, escarificación, en una cantidad comprendida entre, por ejemplo, 1 x 104 a 1 x 106 unidades formadoras de placas.

Una cepa clonal del virus variolovacunal atenuado para su uso como una vacuna se puede obtener mediante un método que implica (i) la propagación de Dr y vax® en un sistema de cultivo celular, y (ii) aislar del sistema de cultivo celular una cepa clonal del virus variolovacunal que tiene sustancialmente la misma virulencia, inmunogeneicidad, características de crecimiento en cultivo, o patrón de digestión con endonucleasas de restricción que Dr y vax® o la cepa del virus variolovacunal ACAM1000. La virulencia del virus variolovacunal puede analizarse en este método mediante, por ejemplo, una prueba cutánea en conejo o una prueba de neurovirulencia en ratón lactante. Las características de crecimiento en cultivo pueden determinarse usando, por ejemplo, células diploides humanas (MRC-5) . Preferentemente, el virus variolovacunal identificado utilizando este método, cuando se administra a un ser humano en una cantidad eficaz para inducir una respuesta inmunitaria protectora o terapéutica contra el virus de la viruela en el ser humano, es aceptablemente avirulento en el ser humano.

La invención proporciona varias ventajas. Por ejemplo, previamente, la vacuna contra la viruela se produjo mediante inoculación del virus variolovacunal en la piel terneros,... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende (i) una cepa clonal del virus variolovacunal atenuado que se aísla de células cultivadas en las que se ha cultivado Dr y vax® o ACAM 1.000 (depósito ATCC Nº PTA-3321) , es capaz de inducir una respuesta inmunitaria protectora o terapéutica contra el virus de la viruela en un ser humano y, cuando se administra a un ser humano en una cantidad eficaz para inducir una respuesta inmunitaria protectora o terapéutica contra el virus de la viruela en dicho ser humano, está aceptablemente atenuada en dicho ser humano; y

(ii) un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, donde dicho virus variolovacunal tiene la misma virulencia que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (Nº de

depósito en la ATCC PTA-3.321) , donde dicho virus variolovacunal tiene la misma inmunogeneicidad que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (Nº de depósito en la ATCC PTA-3.321) , y donde dicho virus variolovacunal tiene el mismo patrón de digestión que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (Nº de depósito en la ATCC PTA-3.321) , cuando se digiere con la endonucleasa de restricción HindIII.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, donde dicho virus variolovacunal se produce en las mismas cantidades o en mayores cantidades que Dr y vax® cuando se inoculan en cultivos celulares.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, donde dicho virus variolovacunal se produce en las mismas

cantidades o en mayores cantidades que la cepa del virus variolovacunal ACAM1000 (nº de depósito en la ATCC PTA-3321) cuando se inoculan en cultivos celulares.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, donde dicho virus variolovacunal es ACAM1000 (nº depósito en la ATCC PTA-3321) . 25

5. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso en la prevención o el tratamiento en un paciente de la infección por el virus de la viruela.

6. La composición farmacéutica de la reivindicación 5, donde dicha composición farmacéutica es para la 30 administración a dicho paciente por escarificación.

7. La composición farmacéutica de la reivindicación 5, donde dicha composición farmacéutica es para la administración a dicho paciente en una cantidad que varía de 1 x 104 a 1 x 106 unidades formadoras de placas.