Método ex vivo para inducir la producción de IL-10 en una célula,

que comprende poner en contacto dicha célula con una composición que comprende un polipéptido galectina-1 multimérico, en el que dicha célula es un linfocito, una célula dendrítica, un monocito o un macrófago

Métodos de inducción de la producción de IL-10.

Campo de la invención

La invención se refiere a métodos de inducción de la producción de interleuquina-10 en una célula.

Antecedentes de la invención

LGALS1 pertenece a la familia de las lectinas animales, las cuales se encuentran altamente conservadas evolutivamente. Las galectinas comparten similitudes de secuencia notables en el dominio de reconocimiento de carbohidrato y presentan afinidad para los glucoconjugados enriquecidos en polilactosamina (1, 2). LGALS1 codifica una proteína ligante de ß-galactósido (ß-GBP) y es conocida su unión a antígenos membranales de leucocitos como CD45, CD43 y CD7 (3-5). La proteína puede encontrarse tanto en forma de un monómero (~14,5 kDa, ß-GBP) como de un homodímero (~29 kDa, galectina-1) (2,6). En su forma monomérica, la ß-GBP inhibe la proliferación de las células T bloqueando a las células en las etapas S y G2/M (7). Como homodímero, la galectina-1 presenta diversos efectos sobre las interacciones célula-célula y célula-matriz (8, 9). Mediante el entrecruzamiento de las proteínas de superficie de las células T, la galectina 1 induce la apoptosis de células T activadas pero no de las células T en reposo (10). Este proceso está mediado por la activación de los factores de transcripción NFAT y AP-1 y mediante la regulación negativa de la proteína Bcl-2 (11, 12). La susceptibilidad de los timocitos inmaduros frente a la apoptosis inducida por galectina-1 sugiere un papel para la proteína durante la selección tímica (13).

Una de las funciones más intrigantes de la proteína galectina-1 es su papel en la inmunomodulación. La investigación durante las últimas décadas ha identificado un papel beneficioso para la galectina-1 en varios modelos de enfermedad autoinmunológica (14-16). Recientemente se ha demostrado que la galectina-1 inhibe la respuesta de células T alogénicas de una manera dependiente de la dosis y de los carbohidratos. La regulación negativa de la respuesta inmunológica aparentemente incluía tanto la apoptosis de las células T activadas como mecanismos no apoptóticos (17). La galectina-1 puede desempeñar un papel en la regulación negativa de la respuesta inmunológica mediante la modulación de la producción de citoquinas. En un modelo de ratón de la artritis reumatoide, el tratamiento con proteína galectina-1 resultó en un cambio de una respuesta de células T ayudante 1 (TH1) a una de células T ayudante 2 (TH2), que se vio acompañada por la regulación negativa del interferón (IFN)-? y la regulación positiva de la interleuquina (IL)-5 en el drenaje de los nódulos linfáticos (16). Además, el tratamiento de galectina-1 indujo una reducción de la producción de IFN-? y de factor de necrosis tumoral (TNF)-a en hepatitis inducida por con-A en ratones (18) y en células T activadas por IL-2 (9). Recientemente, se ha descrito que la galectina-1 también suprime la colitis experimental en ratones (19). En este modelo, se observó una reducción de la producción de citoquinas inflamatorias, conjuntamente con apoptosis de células mononucleares.

Descripción resumida de la invención

La invención se basa en el descubrimiento de que la galectina-1 homodimérica induce niveles elevados de producción de IL-10 y de IL-1 ß en células T tanto activadas como en reposo. De acuerdo con ello, la invención proporciona métodos para inducir la producción de IL-10 en una célula o en un tejido corporal. La producción de IL-10 resulta inducida por el contacto de una célula o de un tejido con un polipéptido galectina-1 multimérica. El polipéptido galectina-1 multimérica es un dímero. El polipéptido galectina-1 multimérico es estable. El término "estable" se refiere a que el multímero no se disocia en la forma monomérica a concentraciones bajas (por ejemplo inferiores a 7 µM). Entre los polipéptidos galectina-1 ejemplares se incluyen la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 1 o SEC ID nº 2. La célula es cualquier célula que resulte capaz de expresar IL-10, por ejemplo, un linfocito tal como una célula T, una célula B o un monocito. La célula T se encuentra activada. Alternativamente, la célula T no se encuentra activada. Opcionalmente la célula T es CD4 y/o CD8-positiva. La célula establece contacto in vitro o ex vivo.

La invención también proporciona el polipéptido galectina-1 multimérico estable para la utilización como medicamento. La invención también proporciona la utilización de un polipéptido galectina-1 multimérico estable en la preparación de un medicamento para prevenir o aliviar un síntoma de un trastorno mediado inmunológicamente en un sujeto. El trastorno mediado inmunológicamente es, por ejemplo, asma, una enfermedad intestinal inflamatoria tal como la enfermedad de Crohn o la colitis ulcerosa o una enfermedad autoinmunológica tal como la esclerosis múltiple, la diabetes, la artritis reumatoide o el lupus eritematoso sistémico, el rechazo del trasplante o las alergias de tipo alimentario.

La inflamación resulta inhibida mediante la administración en un tejido inflamado (o en un tejido que presenta un riesgo de inflamación) de un polipéptido galectina-1 multimérico. Un tejido inflamado se caracteriza por enrojecimiento, dolor e hinchazón del tejido. Entre los tejidos se incluyen tejido epitelial, tejido pulmonar, tejido nervioso, tejido pancreático o tejido hepático. Por ejemplo, el tejido epitelial es tejido intestinal o piel.

El sujeto sufre o presenta un riesgo de desarrollar un trastorno inflamatorio. Entre los trastornos inflamatorios se incluyen, por ejemplo, la inflamación cardiovascular, la inflamación gastrointestinal, la inflamación hepática, la inflamación pulmonar, los trastornos autoinmunológicos, la alergia o la inflamación esquelética. Un sujeto que sufre o que presenta un riesgo de desarrollar un trastorno inflamatorio se identifica mediante métodos conocidos de la técnica, por ejemplo el examen macroscópico de tejido o la detección de marcadores asociados a inflamación en tejido o sangre. Entre los síntomas de la inflamación se incluyen dolor, enrojecimiento e hinchazón del tejido afectado. Un sujeto que sufre de inflamación gastrointestinal, tal como colitis, se identifica histológicamente a partir de la presencia de necrosis mucosal o lesiones hemorrágicas en el colon, diarrea frecuente o sangre y pus en las heces.

La invención proporciona además la utilización de un polipéptido galectina-1 multimérico estable en la preparación de un medicamento para incrementar la supervivencia de un injerto, por ejemplo un aloinjerto. La composición se administra en el sujeto antes, concomitantemente o después de que el sujeto reciba el trasplante. Opcionalmente la composición se administra durante un periodo de tiempo preseleccionado, tal como 1 a 2 semanas.

También se encuentra comprendida en la invención una composición purificada de vacuna que contiene un polipéptido galectina-1 y un antígeno. También se proporciona la utilización de las composiciones de vacuna de la invención en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad infecciosa o cáncer. Se vacuna un sujeto mediante la administración en el sujeto de una primera composición que contiene un polipéptido galectina-1 y una segunda composición que contiene un antígeno. La primera composición se administra concomitantemente a la segunda composición. Alternativamente, la primera composición se administra antes o después de la segunda composición.

El sujeto es un mamífero, tal como un ser humano, un primate, un ratón, una rata, un perro, un gato, una vaca, un caballo o un cerdo.

A menos que se indique lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente invención presentan el mismo significado entendido comúnmente por un experto ordinario en la materia a la que se refiere la presente invención. Aunque pueden utilizarse métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria en la práctica o el ensayo de la presente invención, se describen posteriormente métodos y materiales adecuados. En caso de conflicto, prevalecerá la presente memoria, incluyendo las definiciones en la misma. Además, los materiales, métodos y ejemplos son meramente ilustrativos y no pretenden ser limitativos.

Otras características y ventajas de la invención resultarán evidentes a partir de la descripción detallada siguiente y de las reivindicaciones.

Breve descripción del dibujo

La figura 1 son gráficos de columnas que ilustran que la estimulación...

1. Método ex vivo para inducir la producción de IL-10 en una célula, que comprende poner en contacto dicha célula con una composición que comprende un polipéptido galectina-1 multimérico, en el que dicha célula es un linfocito, una célula dendrítica, un monocito o un macrófago.

2. Método según la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido galectina-1 es un dímero.

3. Método según la reivindicación 2, en el que dicho dímero es estable.

4. Método según la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido galectina-1 es un dímero estable a una concentración inferior a 7 µM.

5. Método según la reivindicación 1, en el que dicha célula es una célula T, una célula B o un monocito.

6. Método según la reivindicación 5, en el que dicha célula T es CD4 y CD8 positiva.

7. Método según la reivindicación 5, en el que dicha célula T es una célula T activada o una célula T no activada.

8. Método según la reivindicación 5, en el que dicho polipéptido galectina-1 induce la producción de IL-10 a una concentración inferior a la de la galectina de tipo salvaje.

9. Polipéptido galectina-1 multimérico estable que no se disocia en monómeros a una concentración inferior a 7 µM.

10. Polipéptido galectina-1 según la reivindicación 9, en el que el polipéptido es un dímero.

11. Polipéptido galectina-1 según la reivindicación 9 ó 10 para la utilización como medicamento.

12. Utilización del polipéptido galectina-1 según la reivindicación 9 ó 10 para la preparación de un medicamento para prevenir o aliviar un síntoma de un trastorno de tipo inmunológico.

13. Utilización según la reivindicación 12, en la que dicho trastorno de tipo inmunológico es una enfermedad intestinal inflamatoria, una enfermedad autoinmunológica, alergias alimentarias o asma.

14. Utilización según la reivindicación 13, en la que dicha enfermedad intestinal inflamatoria es la enfermedad de Crohn o la colitis ulcerosa.

15. Utilización según la reivindicación 13, en la que dicha enfermedad autoinmunológica es la esclerosis múltiple, la diabetes, la artritis reumatoide o el lupus eritematoso sistémico.

16. Utilización del polipéptido galectina-1 según la reivindicación 9 ó 10 para la preparación de un medicamento para reducir la inflamación de un tejido.

17. Utilización según la reivindicación 16, en la que dicha inflamación es crónica o aguda.

18. Utilización según la reivindicación 16, en la que dicho tejido es tejido pulmonar, tejido hepático, tejido intestinal, tejido pancreático, tejido linfoide o tejido dérmico.

19. Utilización según la reivindicación 16, en la que dicho tejido intestinal es tejido intestinal epitelial.

20. Utilización según la reivindicación 16, en la que dicha inflamación es inflamación esquelética, inflamación gastrointestinal, inflamación cardiovascular, inflamación pulmonar o inflamación neurológica.

21. Utilización según la reivindicación 20, en la que dicha inflamación gastrointestinal es colitis.

22. Utilización del polipéptido galectina-1 según la reivindicación 9 ó 10 para la preparación de un medicamento para incrementar la supervivencia del aloinjerto.

23. Utilización según la reivindicación 22, en la que dicho medicamento se administra antes, simultáneamente o después de que un sujeto reciba un trasplante.

24. Utilización según la reivindicación 22, en la que dicho medicamento se administra durante un periodo preseleccionado de tiempo.

25. Utilización según la reivindicación 24, en la que dicho periodo preseleccionado de tiempo es de entre aproximadamente 1 y 2 semanas.

26. Utilización según la reivindicación 22, en la que dicho medicamento está destinado a ponerse en contacto con un órgano antes del trasplante con el fin de incrementar la supervivencia del aloinjerto.

27. Composición de vacuna purificada que comprende el polipéptido galectina-1 según la reivindicación 9 ó 10 y un antígeno.

28. Vacuna que comprende una primera composición que comprende el polipéptido galectina-1 según la reivindicación 9 ó 10, y una segunda composición que comprende un antígeno.

29. Utilización de la vacuna según la reivindicación 28 en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad infecciosa o de cáncer.

30. Utilización según la reivindicación 29, en la que dicha primera composición se administra conjuntamente con dicha segunda composición.

31. Utilización según la reivindicación 29, en la que dicha primera composición se administra antes que dicha segunda composición.

32. Utilización según la reivindicación 29, en la que dicha primera composición se administra después de dicha segunda composición.