DIAGNOSTICO Y PROGNOSIS DE LA INFECCION DE UNA HERIDA MEDIANTE LA MEDICION DE UNA FOSFOLIPASA A2 EN FLUIDO DE HERIDA.

Método de diagnóstico o prognosis de una infección de una herida,

comprendiendo el método someter a ensayo una muestra de fluido de herida que ha sido extraído del cuerpo, para la presencia o nivel de la fosfolipasa citosólica A2 (cPLA2)

Diagnóstico y prognosis de la infección de una herida mediante la medición de una fosfolipasa A₂ en fluido de herida.

La presente invención se refiere al diagnóstico y prognosis de infecciones de heridas, mediante el ensayo del fluido de una herida para la presencia de un marcador que se encuentra presente en una cantidad que es indicativa de una condición inflamatoria. El marcador es una fosfolipasa A₂ de elevado peso molecular (cPLA₂).

En mamíferos, una lesión desencadena una compleja cascada organizada de sucesos celulares y bioquímicos que resulta en una herida cicatrizada. La cicatrización de heridas es un proceso dinámico complejo que resulta en la restauración de la continuidad y función anatómicas; una herida idealmente cicatrizada es una herida que ha vuelto a su estructura, función y apariencia anatómicas normales.

Todas las heridas crónicamente contaminadas contienen una flora bacteriana del tejido. Estas bacterias pueden ser autóctonas del paciente o pueden ser exógenas a la herida. El cierre, o finalmente la cicatrización de la herida, con frecuencia se basa en la capacidad del médico de controlar el nivel de dicha flora bacteriana. La infección de heridas por bacterias retrasa el proceso de cicatrización, debido a que las bacterias compiten para la obtención de los nutrientes y el oxígeno con los macrófagos y fibroblastos, la actividad de los cuales resulta esencial para la cicatrización de la herida. Resulta una infección cuando las bacterias consiguen dominar los factores sistémicos y locales de la resistencia del huésped. Por lo tanto, la infección es una manifestación de la alteración del equilibrio huésped/bacterias en favor de las bacterias invasoras. Esto induce una respuesta séptica sistémica, y también inhibe los múltiples procesos implicados en la cicatrización de las heridas. Finalmente, la infección puede resultar en una etapa inflamatoria prolongada y, de esta manera, en una cicatrización lenta, o puede provocar la necrosis posterior de la herida. La etapa de granulación del proceso de cicatrización únicamente se iniciará tras ceder la infección.

En la práctica clínica, un diagnóstico de infección se basa en la presencia de dolor local, calor, hinchazón, supuración y enrojecimiento, aunque muchos indicadores clínicos, tales como la inflamación y la supuración, presentan un valor de predicción reducido de infección de una herida. El diagnóstico definitivo se alcanza mediante el análisis microbiológico de muestras procedentes de la herida. La biopsia del tejido proporciona los resultados más exactos, aunque es un procedimiento invasivo que resulta difícil de realizar debido a la masa de espécimen que resulta necesaria. La aplicación de un apósito en la herida es el método de muestreo de heridas más común utilizado en el Reino Unido, aunque se ha cuestionado su valor clínico. Además, el diagnóstico microbiológico de la infección de heridas puede tardar 48 a 72 horas, lo que permite que la infección se desarrolle adicionalmente en el caso de que no se aplique inmediatamente un tratamiento de primera línea/de mejor predicción.

Por lo tanto, sigue existiendo una necesidad de la técnica de un método para el diagnóstico y prognosis precoces de la infección de una herida, y de dispositivos y vendas para heridas de utilización en la práctica de dichos métodos.

Los cPLA₂ son enzimas que hidrolizan la posición sn-2 de los glicerofosfolípidos de membrana, liberando ácido araquidónico. Por lo tanto, la actividad de estos enzimas resulta importante en la producción de eicosanoides (por ejemplo prostaglandinas y leucotrienos) y por lo tanto se asocian a inflamación y a los mecanismos de defensa del huésped. Puede encontrarse una revisión detallada en Kudo y Murakami, Prostaglandins and other Lipid Mediators 68-69:3-58, 2002.

Existen esencialmente dos grupos de PLA₂: PLA₂ de elevado peso molecular (PLA₂ citosólico) y PLA₂ de bajo peso molecular (PLA₂ soluble). El cPLA₂ citosólico de elevado peso molecular normalmente se localiza intracelularmente y por lo tanto no se esperaría su presencia en los fluidos de una herida. Existen tres isoformas de este cPLA₂: a (1.110 kDa), ß (85 kDa) y ? (60 kDa) (ver Kudo y Murakami, 2002). Los PLA₂ solubles de bajo peso molecular (sPLA₂) es conocido que actúan intracelularmente y, en contraste con cPLA₂, los presentes inventores no han encontrado ninguna evidencia de que la forma de bajo peso molecular (sPLA₂) se encuentre a nivel elevado en el fluido de heridas infectadas.

La patente WO nº 03/101487 describe un método para evaluar la enfermedad inflamatoria neural en un animal mediante la determinación del nivel de la proteína fosfolipasa A₂ (incluyendo cPLA₂) en un tejido o líquido corporal, tal como sangre, plasma y líquido cerebroespinal. Aparentemente no contiene enseñanza o sugerencia de la asociación de cPLA₂ con líquido extracelular de una herida o como marcador de infección bacteriana.

La patente WO nº 00/54052 describe un ensayo para la detección de cPLA₂ en glóbulos rojos o sobre los mismos, en particular para el diagnóstico de enfermedades en las que se encuentra implicada una disfunción de los sistemas de señalización celular en los que participan ácidos grasos altamente insaturados. Esta referencia aparentemente no contiene enseñanza ni sugerencia del ensayo de líquido extracelular para la presencia de cPLA₂ en el diagnóstico de una infección de una herida.

Funakoshi et al., Pancreas 6(5):588-594, 1991, dan a conocer que los niveles séricos de PLA2 se encuentran elevados en los sueros de pacientes con enfermedades pancreáticas y que la medición de PLA2 sérico resulta útil para el diagnóstico y el seguimiento de la pancreatitis. No contiene enseñanza ni sugerencia de ninguna asociación de cPLA₂ con líquido extracelular de una herida o como marcador de la infección bacteriana de una herida.

Abdul N. Hamood et al., Journal of Surgical Research 61(2):425-432, 1996, describe la producción de factores extracelulares de virulencia, incluyendo la fosfolipasa C, por aislados de Pseudomonas aeruginosa obtenidos de infecciones traqueales, del tracto urinario y de heridas.

El documento WO nº A-9505479 describe un nuevo ensayo para la actividad de cPLA2. No contiene sugerencia de la aplicación del ensayo a fluido de una herida.

El documento WO nº A-03040406 describe la utilización de un fragmento de fibronectina, una proteasa de neutrófilo, o una proteasa de macrófago, como marcador de infección bacteriana en fluido de una herida.

En un primer aspecto, la presente invención proporciona un método de diagnóstico o prognosis de una infección de una herida, comprendiendo el método someter a ensayo una muestra de fluido de una herida que ha sido extraído del cuerpo, para la presencia o nivel de cPLA₂.

En un segundo aspecto, la presente invención proporciona un sistema para la utilización en el diagnóstico y tratamiento de heridas, que comprende: una venda o un biosensor de heridas que comprende componentes de un sistema de ensayo para someter a ensayo los fluidos de una herida para la presencia o nivel de cPLA₂, y una venda para heridas que comprende por lo menos un agente antimicrobiano, para la aplicación en la herida en el caso de que la presencia o nivel medido de cPLA₂ sea indicativo de infección de la herida, en el que dicho sistema de ensayo comprende una pareja de unión inmunológica para el cPLA₂.

La presente invención se refiere a un marcador de inflamación/infección que podría utilizarse como molécula diana en un nuevo ensayo diagnóstico/de prognosis (por ejemplo en el laboratorio o en el sitio de atención al paciente) para identificar una condición inflamatoria, tal como una infección. El marcador es una fosfolipasa A₂ de elevado peso molecular (cPLA₂).

El análisis de transferencia western de fluidos de heridas procedente de pacientes infectados y no infectados muestra que se observa cPLA₂ y fragmentos de cPLA₂ (se encuentran presentes tres bandas) en el fluido de la herida infectada (IV 13) y que no se observa ninguna inmunorreactividad contra cPLA o contra fragmentos de cPLA₂ en el fluido de la herida no infectada (ver la figura 1, adjunta). Basándose en la especificidad del anticuerpo...

1. Método de diagnóstico o prognosis de una infección de una herida, comprendiendo el método someter a ensayo una muestra de fluido de herida que ha sido extraído del cuerpo, para la presencia o nivel de la fosfolipasa citosólica A₂ (cPLA₂).

2. Método según la reivindicación 1, en el que cPLA₂ es cPLA₂a, cPLA₂ß o cPLA₂?.

3. Sistema para la utilización en el diagnóstico y tratamiento de heridas, que comprende:

4. Sistema según la reivindicación 3, que comprende además una venda para herida sustancialmente libre de agentes antimicrobianos, para la aplicación en la herida en el caso de que la presencia o el nivel de cPLA₂ sea indicativo de una herida no infectada.