DIAGNOSTICO Y PREVENCION DE LA INVASION DE CELULAS CANCEROSAS.

Un método in vitro para determinar la capacidad de invasión de cáncer,

que comprende medir en una muestra que comprende células cancerosas la expresión de al menos un gen seleccionado del grupo que consiste en AXL y GAS6, en el que una expresión elevada se correlaciona con una elevada capacidad de invasión

Diagnóstico y prevención de la invasión de células cancerosas.

La presente invención se refiere a un método in vitro para determinar la capacidad de invasión del cáncer, que comprende medir en una muestra que comprende células cancerosas la expresión de al menos un gen seleccionado del grupo que consiste en AXL y GAS6, en el que una expresión elevada se correlaciona con una elevada capacidad de invasión.

En años recientes se ha demostrado que la sobreexpresión de tirosina cinasas receptoras (RTK) está en muchos casos asociada con el desarrollo de trastornos malignos, particularmente cáncer en mamíferos, incluyendo seres humanos. Por ejemplo, la sobreexpresión de la tirosina cinasa receptora AXUUFO (ref. 1, 2: número de acceso Genbank M 76125) se ha implicado en el desarrollo de tumores hematológicos humanos. Además, datos muy recientes indican que la señalización de AXL y su ligando GAS6 está implicada en angiogénesis, adhesión y supervivencia de células cancerosas (ref. 3, 4, 5, 6, 7, 8). En Breast Cancer Research and Treatment (Oct. 1997), vol. 46, nº 1, p. 91, Attar, E.C. et al., describen estudios sobre la expresión de la tirosina cinasa receptora de AXL en cáncer de mama humano (ref. 33). Dodge Zantek N. et al. han presentado MCF-10A NeoST como un nuevo sistema celular para estudiar las interacciones célula-ECM y célula-célula en cáncer de mama (ref. 34). Estos autores sugieren un papel potencial de AXL en la invasividad y como factor progresivo para el cáncer de mama. Sin embargo, no se han presentado datos que demostrasen que la sobreexpresión de AXL está relacionada con la capacidad de invasión y/o formación de metástasis en otros trastornos malignos.

Domagala (American Journal of Pathology, vol. 136, nº 1, 1990, páginas 219-228), Bachmeier et al. (Anticancer Research, vol. 21, nº 6A noviembre 2001, páginas 3821-3828) y el documento WO 92117608 describen métodos para determinar la capacidad de invasión de células cancerosas con la ayuda de proteínas marcadoras.

Zantek et al. (Clinical Cancer Research, 7/11, 3640-3648) describe el aislamiento y caracterización de dos variantes de una estirpe de células epiteliales de mama normal.

Attar et al. (Breast cancer research and treatment, octubre 1997, vol. 46, nº 1 p. 91) muestran un anticuerpo policlonal anti-AXL frente al dominio N-terminal de AXL.

Meric et al. (Clinical Cancer Research, 8/2, 361-367) describe el perfil de expresión de tirosina cinasas en cáncer de mama.

El documento US-A-5.468.634 describe secuencias de ADN aisladas que codifican el receptor de AXL oncogénico, así como un anticuerpo anti-AXL.

La presente invención se define por las reivindicaciones anejas.

Un objetivo del presente estudio fue establecer perfiles de expresión de genes particularmente seleccionados de proteína cinasas, fosfatasas y otros genes de señalización en trastornos malignos, particularmente cáncer de mama y cáncer de cerebro, a fin de identificar nuevos marcadores para determinar la capacidad de invasión y/o capacidad de agresión. Se usó un chip de hibridación de ADNc para analizar los perfiles de la expresión génica de siete estirpes de células de cáncer de mama muy invasivas, catorce estirpes de células de cáncer de mama débilmente invasivas y tres estirpes de células epiteliales de mama normales. Se identificaron las diferencias en la expresión génica entre las estirpes de células de cáncer de mama débil y muy invasivas, lo que permitió la definición de una agrupación génica que se correlaciona con la capacidad de invasión de una estirpe celular de cáncer de mama. Usando esta agrupación o combinaciones de genes de ella, es posible una discriminación de estirpes celulares de cáncer de mama muy invasivas de las estirpes celulares de cáncer de mama débilmente invasivas y de las estirpes celulares epiteliales de mama normales.

Además, en un intento para identificar nuevas tirosina cinasas receptoras (RTK) implicadas en la biología de glioma maligno, se ha determinado el perfil de expresión de RTK en estirpes celulares de glioma humano mediante una técnica de microchip de ADNc. Además de EGFR y PDGFR-a, el receptor UFO/AXL fue una de las RTK expresadas de forma más destacada. En 7 de 9 estirpes celulares de glioma humano ensayadas, el ARNm de UFO/AXL tuvo un nivel de expresión mayor que el ARNm para EGFR (Tabla 4). La inhibición de la transducción de la señal de UFO/AXL sobreexpresando una forma mutante negativo-dominante, truncada, de UFO/AXL suprimió la progresión tumoral y prolongó la supervivencia en ratones cuando se comparó con células que sobreexpresan la forma de tipo natural de UFO/AXL. A fin de estudiar el mecanismo de señalización de UFO/AXL y su papel en el crecimiento de gliomas, se evaluó in vitro la morfología de las células tumorales y el comportamiento de las células tumorales con respecto a la proliferación, capacidad de agregación, migración, e invasión. Además, se analizó in vivo el comportamiento de células tumorales, la angiogénesis tumoral, y la perfusión tumoral mediante microscopía de multifluorescencia intravital. El estudio indica un nuevo papel para UFO/AXL, es decir, en la mediación de las interacciones célula/célula del glioma, la migración de células de glioma y la invasión del glioma. UFO/AXL es la primera RTK a ser implementada en la mediación del crecimiento metastásico local, infiltrante difuso, de tumores de cerebro malignos.

De este modo, se describe un método para determinar la capacidad de invasión de trastornos malignos que comprende determinar la expresión de al menos un gen seleccionado del grupo que consiste en AXL (Genbank M 76125). GAS 6 (Genbank L 13720), MMP14 (Genbank NM 004995). ADAM12 (Genbank AF 023476), ADAM17 (Genbank U 69611). MT3MMP (Genbank NM 005961), FGF2 (Genbank NM 002006), FGFS (Genbank NM 004464). FYN (Genbank M 14333), LYN (Genbank M 16038). DDR2 (Genbank X 74764), TIMP1 (Genbank NM 003254), HB-EGF (Genbank NM 001945), SGK (Genbank Y 10032), RPS6RB1 (Genbank M 60724), MAP4K4 (Genbank XM 038748). SIRPa (Genbank Y 10375) y Anexina A2 (Genbank D 00017). Además, se puede determinar la expresión de los genes Stat 5b (Acc. NM_012448) o EDG2 (Acc. NM_057159) como indicador para determinar la capacidad de invasión de trastornos malignos, opcionalmente además de determinar la expresión de uno o más de los genes anteriores. Se encontró que una expresión elevada de al menos uno de los genes anteriores se correlaciona con una capacidad elevada de invasión.

Además, dentro de los presentes estudios, se encontró que una capacidad elevada de invasión se correlaciona con una expresión elevada de al menos dos de los genes anteriores, en particular AXL y uno o más genes adicionales. El uno o más genes adicionales se pueden seleccionar de los genes enunciados anteriormente, o de un gen que ya es conocido como marcador para la capacidad de invasión.

De este modo, el método comprende preferiblemente determinar la expresión de varios de los genes anteriores, por ejemplo determinar la expresión de al menos dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho genes. Más preferiblemente, el método comprende determinar la expresión de al menos el gen AXUUFO (Genbank M 76125). Además, el método puede comprender determinar la expresión de al menos un gen adicional que ya se conoce como marcador de la capacidad de invasión, tal como CD44 (Genbank X 66733), vimentina (Genbank X 56134), CAV1 (Genbank Z 18951), CAV2 (Genbank AF 03572), MMP 1 (Genbank M 13509), MMP 2 (Genbank NM 004530), MMP9 (Genbank NM 004994), M-CSF (Genbank M 37435) y EPHA2 (Genbank M 59371).

Se encontró una correlación entre la expresión de la agrupación génica anterior, y particularmente el gen AXL, y la capacidad de invasión en varios tipos de trastornos malignos, por ejemplo cáncer de mama, particularmente cáncer de mama primario, cáncer de próstata, cáncer de riñón y glioblastomas u otros cánceres de origen epitelial. De particular interés es el hallazgo de que existe una correlación entre la expresión de uno o más de los genes marcadores anteriores, y en particular del gen AXL, y la capacidad de invasión de glioblastomas.

Además, se encontró que la sobreexpresión estable de un mutante negativo-dominante del gen AXL es capaz de suprimir fuertemente la capacidad de invasión y la migración celulares, indicando que la inhibición de la función de AXL puede bloquear y perder la formación de metástasis en trastornos malignos muy invasivos, tales como cáncer de mama o cáncer de cerebro, por...

1. Un método in vitro para determinar la capacidad de invasión de cáncer, que comprende medir en una muestra que comprende células cancerosas la expresión de al menos un gen seleccionado del grupo que consiste en AXL y GAS6, en el que una expresión elevada se correlaciona con una elevada capacidad de invasión.

2. El método de la reivindicación 1, que comprende medir la expresión de los genes AXL y GAS6.

3. El método de la reivindicaciones 1 ó 2, que comprende medir la expresión de al menos el gen AXL.

4. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el cáncer se selecciona de cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de colon y glioblastomas.

5. El método de la reivindicación 4, en el que el cáncer es glioblastoma.

6. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que la expresión se determina a nivel de ARNm.

7. El método de la reivindicación 6, en el que la expresión se determina en un chip de ácidos nucleicos.

8. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la expresión se determina a nivel proteico.

9. El método de la reivindicación 8, en el que la expresión se determina mediante un inmunoensayo.

10. Un método para identificar y/o caracterizar un inhibidor de la capacidad de invasión de cáncer, que comprende determinar si un compuesto de ensayo es capaz de inhibir el gen AXL, el gen ligando AXL, la proteína AXL y/o el ligando de la proteína AXL.

11. El método de la reivindicación 10, que comprende determinar si un compuesto de ensayo es capaz de unirse a la proteína AXL y/o reducir la expresión del gen AXL.

12. El método de la reivindicación 10 u 11, en el que se usa un sistema de ensayo a base de células.

13. El método de la reivindicación 10 u 11, en el que se usa un sistema de ensayo libre de células.