ESTA INVENCION SE REFIERE A UNOS PROCEDIMIENTOS PARA INHIBIR LA ANGIOGENESIS EN LOS TEJIDOS,

MEDIANTE ANTAGONISTAS DE LOS RECEPTORES AL V BE 3 DE VITRONECTINA, ESP ECIALMENTE PARA INHIBIR LA ANGIOGENESIS EN LOS TEJIDOS INFLAMADOS Y TUMORALES O LAS METASTASIS CON COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE ENCIERRAN DICHOS ANTAGONISTAS

Campo técnico

La presente invención se refiere en general al campo de la medicina, y se refiere 5 específicamente a composiciones para uso en la inhibición de la angiogénesis de tejidos usando antagonistas del receptor αVβ3 de vitronectina.

Antecedentes

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Las integrinas son una clase de receptores celulares que se sabe que se unen a las proteínas de matriz extracelular y, por consiguiente, median las interacciones célula-célula y célula-matriz extracelular, a las que se hace referencia en general como episodios de adhesión celular. Sin embargo, aunque muchas integrinas y los ligandos que se unen a una integrina están descritos en la bibliografía, la función biológica de 15 muchas integrinas sigue siendo difícil de determinar. Los receptores integrina constituyen una familia de proteínas con características estructurales compartidas de complejos no covalentes de glicoproteínas heterodiméricas formadas por subunidades α y β.

Ahora se sabe que el receptor de vitronectina, denominado por su característica original 20 de unión preferencial a vitronectina, hace referencia a tres diferentes integrinas, denominadas αVβ1,αVβ3 y αVβ5. Horton, Int. J. Exp. Pathol. 71: 741-759 (1990). La αVβ1 se une a fibronectina y vitronectina. La αVβ3 se une a una gran diversidad de ligandos, incluyendo fibrina, fibrinógeno, laminina, trombospondina, vitronectina, factor de von Willebrand, osteospontina y sialoproteína I ósea. La αVβ5 se une a la vitronectina. Las 25 funciones de adhesión celular específica que estas tres integrinas juegan en las muchas interacciones celulares en tejidos están todavía bajo investigación, sin embargo, está claro que existen diferentes integrinas con diferentes funciones biológicas.

Un sitio de reconocimiento importante en el ligando para muchas integrinas es la 30 secuencia de tripéptidos arginina-glicina-ácido aspártico (RGD). RGD se encuentra en todos los ligandos identificados anteriormente para las integrinas del receptor de vitronectina. Este sitio de reconocimiento de RGD puede estar imitado por polipéptidos (“péptidos”) que contienen la secuencia de RGD, y tales péptidos RGD son inhibidores conocidos de la función de integrina. Sin embargo, es importante indicar que, 35 dependiendo de la secuencia y estructura del péptido de RGD, la especificidad de la inhibición puede alterarse para dirigir las integrinas específicas.

Para análisis sobre el sitio de reconocimiento de RGD, véase Pierschbacher y col., Nature, 309: 30-33 (1984) y Pierschbacher y col., Proc. Natls. Acad. Sci. USA, 81: 5985-5 5988 (1984). Diversos polipéptidos de RGD de especificidad de integrina variable también han sido descritos por Grant y col., Cell, 58: 933-943 (1989), Cheresh, y col., Cell, 58: 945-953 (1989), Aumailley y col., FEBS Letts., 291: 50-54 (1991), y Pfaff y col., J. Biol. Chem., 269: 20233-20238 (1994), y en las Patentes de Estados Unidos números 4.517.686, 4.578.079, 4.589.881, 4.614.517, 4.661.111, 4.792.525, 4.683.291, 4.879.237, 10 4.988.621, 5.041.380 y 5.061.693.

La angiogénesis es un proceso de vascularización de tejidos que implica el crecimiento de nuevos capilares sanguíneos en desarrollo en un tejido, y se denomina también neovascularización. El proceso está mediado por la infiltración de células endoteliales y 15 células de músculo liso. Se cree que el proceso tiene lugar en una cualquiera de tres formas: los vasos o capilares pueden surgir de vasos preexistentes; desarrollo de novo de vasos pueden surgir de células precursoras (vasculogénesis); o vasos pequeños existentes pueden aumentar de diámetro. Blood y col., Bioch. Biophys. Acta, 1032: 89-118 (1990). Se sabe que las células endoteliales vasculares contienen al menos cinco 20 integrinas dependientes de RGD, incluyendo el receptor de vitronectina (αVβ3 o αVβ5), los receptores de colágeno tipos I y IV (α1β1), el receptor de laminina (α2β1), el receptor de fibronectina/laminina/colágeno (α3β1) y el receptor de fibronectina (α5β). Davis y col., J. Cell. Biochem., 51: 206-218 (1993). Se sabe que la célula de músculo liso contiene al menos seis integrinas dependientes de RGD, incluyendo, α5β1, αVβ3 y αVβ5. 25

La angiogénesis es un proceso importante en el desarrollo neonatal, pero también es importante en la cicatrización de heridas y en la patogénesis de una gran diversidad de enfermedades clínicamente importantes incluyendo inflamación de tejidos, artritis, crecimiento tumoral, retinopatía diabética, degeneración macular por neovascularización 30 de la retina y afecciones similares. Estas entidades clínicas asociadas a la angiogénesis se denominan enfermedades angiogénicas. Folkman y col., Science, 235: 442-447 (1987). La angiogénesis está por lo general ausente en tejidos adultos o maduros, aunque se produce en la curación de heridas y en el ciclo de crecimiento del cuerpo lúteo. Véase, por ejemplo, Moses y col., Science., 248: 1408-1410 (1990). 35

Se ha propuesto que la inhibición de la angiogénesis sería una terapia útil para restringir el crecimiento tumoral. La inhibición de la angiogénesis se ha propuesto por (1) inhibición de la liberación de las “moléculas angiogénicas” tales como el bFGF (factor de crecimiento de fibroblastos básico), (2) neutralización de moléculas angiogénicas, tal como mediante el uso de anticuerpos anti-βbFGF, y (3) inhibición de la respuesta de 5 células endoteliales a estímulos angiogénicos. Esta última estrategia ha recibido atención, y Folkman y col., Cancer Biology, 3: 89-96 (1992), han descrito varios inhibidores de respuesta de células endoteliales, incluyendo el inhibidor de la colagenasa, inhibidores del recambio de membrana basal, esteroides angiostáticos, los inhibidores de la angiogénesis derivados de hongos, factor 4 de plaquetas, trombospondina, fármacos 10 contra artritis tales como penicilamina D y tiomalato de oro, análogos de la vitamina D3, interferón alfa, y similares que podrían usarse para inhibir la angiogénesis. Para otros inhibidores propuestos de angiogénesis, véase Blood y col., Bioch. Biophys. Acta., 1032: 89-118 (1990), Moses y col., Science, 248: 1408-1410 (1990), Ingber y col., Lab. Invest., 59: 44-51 (1988), y las Patentes de estados Unidos números 5.092.885, 5.112.946, 15 5.192.744, y 5.202.352. Ninguno de los inhibidores de la angiogénesis descritos en las referencias anteriores está dirigido a la inhibición de αVβ3.

También se han descrito péptidos que contienen RGD que inhiben el receptor αVβ3 de vitronectina. Aumailley y col., FEBS Letts., 291: 50-54 (1991), Choi y col., J. Vasc. Surg., 20 19: 125-134 (1994), Smith y col., J. Biol. Chem., 265: 12267-12271 (1990), y Pfaff y col., J. Biol. Chem., 269: 20233-20238 (1994). Sin embargo, la función de la integrina αVβ3 en la angiogénesis no se ha sugerido ni identificado nunca hasta la presente invención.

Por ejemplo, Hammes y col., Nature Med., 2: 529-553 (1996) confirmaron los hallazgos 25 de la presente invención. Específicamente, la publicación muestra que los péptidos cíclicos, incluido RGDfV cíclico, la estructura y la función del último de los que se han descrito anteriormente en las solicitudes de prioridad sobre la que se basa la presente solicitud, inhibieron la neovascularización retinal en un modelo de neovascularización retinal inducida por hipoxia en ratón. En un estudio separado que también respalda la 30 presente invención así como las solicitudes de prioridad, Luna y col., Lab. Invest., 75: 563-573 (1996) describieron dos péptidos particulares que contenían RGD metilado cíclico que eran parcialmente eficaces en la inhibición de la neovascularización retinal en el modelo de retinopatía isquémica inducida por oxígeno en ratón. Por el contrario, los péptidos de la presente invención exhiben inhibición prácticamente completa de la 35 neovascularización en los sistemas de los modelos descritos en el presente documento.

La inhibición de la adhesión celular in vitro usando anticuerpos monoclonales inmunoespecíficos para diversas subunidades α o β de integrinas ha implicado al receptor αVβ3 de vitronectina en la adhesión celular de una diversidad de tipos de células...

Reivindicaciones

1. Un antagonista de αVβ3 para uso en la inhibición de la angiogénesis mediada por αVβ3 en un tejido, siendo dicho antagonista un compuesto mimético orgánico seleccionado de

5

ácido (S)-3-(4-(4-guanidinobutiloxi)fenil-2-butilsulfonamido-propiónico,

ácido (S)-3-(4-(4-guanidinobutiloxi)fenil-2-N-t-butiloxicarbonil-propiónico,

ácido (R)-3-(4-(4-guanidinobutiloxi)fenil-2-butilsulfonamido-propiónico,

ácido (S)-3-(4-(4-guanidinobutiloxi)fenil-2-(10-canforsulfonamido)-propiónico, y

ácido (S)-3-(4-(5-guanidinopentiloxi)fenil-2-butilsulfonamido-propiónico. 10

2. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1, en el que dicho tejido es un tumor sólido y dicho antagonista es para inducir la regresión del tejido del tumor sólido.

15

3. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1, en el que dicho tejido es un tumor sólido que experimenta neovascularización y dicho antagonista es para uso en la inhibición del crecimiento de dicho tejido tumoral.

4. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1, en el que dicho tejido 20 es tejido inflamado en el que se está produciendo neovascularización.

5. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1, en el que dicho tejido es tejido retinal en el que se está produciendo neovascularización.

25

6. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1, en el que dicho antagonista es para uso en el tratamiento de la reestenosis en un tejido en el que se produce migración de células de músculo liso tras la angioplastia.

7. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1, en el que dicho 30 antagonista es para uso en la reducción del suministro de sangre a un tejido necesario para apoyar el nuevo crecimiento de dicho tejido.

8. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho tejido es tejido humano. 35

9. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1, en el que dicho tejido está inflamado y dicha angiogénesis es angiogénesis de tejido inflamado.

10. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 9, en el que dicho tejido es artrítico. 5

11. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 10, en el que dicho tejido artrítico está presente en un mamífero con artritis reumatoide.

12. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1, en el que dicho 10 tejido es el tejido retinal y dicha angiogénesis es angiogénesis retinal.

13. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 12, en el que dicho tejido retinal está en un paciente con retinopatía diabética o degeneración macular.

15

14. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1, en el que dicho tejido es un tumor sólido o una metástasis de tumor sólido y dicha angiogénesis es angiogénesis tumoral.

15. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 14, en el que dicho 20 tejido es un carcinoma.

16. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 15, en el que dicho tumor sólido es un tumor de pulmón, páncreas, mama, colon, laringe u ovario.

25

17. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 14, en el que dicho antagonista es para administrar en combinación con quimioterapia.

18. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho antagonista es para administrar por vía intravenosa, transdérmica, 30 intrasinovial, intramuscular u oral.

19. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho antagonista es para administrar en una cantidad comprendida desde aproximadamente 0,1 mg/kg hasta aproximadamente 300 mg/kg. 35

20. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho es antagonista para administrar en una única dosis por vía intravenosa.

21. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho antagonista es para administrar en una o más dosis diarias durante uno o 5 más días.

22. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1 o reivindicación 6, en el que dicho antagonista es para administrar tras la angioplastia.

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23. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 22, en el que dicha angioplastia es la angioplastia coronaria.

24. Un antagonista de αVβ3 según se reivindica en la reivindicación 1 o reivindicación 6, en el que dicho antagonista es para administrar a un paciente en riesgo de sufrir 15 reestenosis tras la angioplastia.