ANTICUERPOS CONTRA EL FACTOR 23 DE CRECIMIENTO DE FIBROBLASTOS.

Un anticuerpo que reconoce una secuencia entre los restos 180º y 194º del polipéptido representados por SEQ ID NO:

1, y puede neutralizar actividades biológicas de FGF-23

Anticuerpos contra el factor 23 de crecimiento de fibroblastos.

Campo técnico

La presente invención se refiere a anticuerpos contra el factor-23 de crecimiento de fibroblastos (FGF-23).

Más particularmente, la presente invención as refiere a anticuerpos que pueden ser usados para diagnosticar enfermedades o estados patológicos acompañados de la acumulación o disminución de la proteína de FGF-23, (o simplemente, proteína FGF-23), in vivo, mediante la detección y medida apropiadas de FGF-23, in vitro, y que permite la mejora o el tratamiento de los estados de enfermedades o condiciones patológicas que resultan de la acción excesiva de FGF-23 mediante la supresión de FGF-23, y también se refiere a un método de preparación y a un método de uso de un anticuerpo.

Técnica fundamental

El factor de crecimiento de fibroblastos fue purificado por primera vez partiendo de la hipófisis de ganado vacuno, en forma de una sustancia que estimula el crecimiento la línea de fibroblastos NIH3T3. Después de esto, han sido identificadas en diversos tejidos proteínas análogas, y un grupo de estas sustancias forma una familia de polipéptidos (la familia FGF). Hasta la fecha, han sido identificadas en vertebrados 22 tipos de proteínas que pertenecen a la familia FGF. En cuanto a las actividades biológicas de estos tipos de proteínas, no solamente se conocen la actividad de estimulación del crecimiento de fibroblastos, sino también una amplia gama de acciones, tales como el crecimiento del mesodermo y el neuroectodermo la angiogénesis y la formación de las yemas de las extremidades en la fase de desarrollo. Los miembros de la familia FGF varían en términos de los sitios de expresión y de los momentos de expresión de genes. Sus genes son expresados con frecuencia solamente en sitios específicos en la fase de desarrollo o en los adultos. Como genes que codifican los receptores de FGF son conocidos por lo menos 4 tipos: FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4. Además, se sabe que en el FGFR1, el FGFR2 y el FGFR3, las proteínas de los receptores que difieren en los términos de sus dominios extracelulares, están presentes independientemente debido a diferencias en el corte y empalme. Además, se sabe que la heparina y el proteoglicano del sulfato de heparán interaccionan con FGF y con los receptores de FGF, regulando de este modo la acción. Además, existen muchas proteínas que pertenecen a la familia FGF debido a semejanzas estructurales, pero sus actividades biológicas, su capacidad de unión a los receptores y factores semejantes, permanecen casi sin conocer. Las características de la familia FGF han sido completadas como revisiones (Ornitz D. M. e Itoh N. Factores de crecimiento de fibroblastos. Genome biology 2: 3005, 1-3005. 12, 2001).

El FGF-23 fue clonado por primera vez a partir del ratón, por búsqueda en una base de datos, utilizando su homología con el FGF-15 y el método PCR, y luego fue clonado el FGF-23 humano utilizando su homología secuencial con la del FGF-23 del ratón (Yamashita T., Yoshioka M., e Itoh N., Identificación de un nuevo factor de crecimiento de fibroblastos, FGF-23, expresado preferentemente en el núcleo talámico ventrolateral del cerebro, Biochem, Biphy. Res. Commun. 277: 494-498, 2000). Seguidamente, al investigar sobre la osteomalacia/raquitismo hipofosfatémico dominante autosomal (al que se alude en lo sucesivo como ADHR), se descubrieron característicamente mutaciones erróneas en los genes de FGF.-23 de pacientes de ADHR al tiempo que se estrechaba la región de genes mutantes en pacientes de ADHR, y se identificaban los genes responsables (The ADHR Consortium Autosomal dominant hypophosphatemic rickets is associated with mutations in FGF-23, Nature Genet. 26: 345-348, 2000). Este descubrimiento ha sugerido fuertemente la importancia fisiológica del FGF-23, in vivo. No obstante, las actividades biológicas del FGF-23 han permanecido sin conocer. Entre tanto, la actividad biológica del FGF-23 ha sido determinada por investigaciones sobre la osteomalacia inducida por tumores. Se ha pensado que en esta enfermedad, un tumor, responsable de la enfermedad, produce y secreta un factor humoral que induce la enfermedad, y por la acción de este factor, se desarrolla morbosidad tal como la hipofosfatemia o la osteomalacia. White, H., et al., en Kidney International, vol. 60 (2001), páginas 2079-2086, describen que mutaciones en el raquitismo hipofosfatémico dominante autosomal, estabilizan el FGF-23. Los anticuerpos neutralizantes de la presente invención no están descritos.

En la búsqueda de este factor, inductor de enfermedades producidas por tales tumores responsables, ha sido clonado FGF-23 como un gen que es expresado en altos niveles en tumores. Además, se ha indicado que mediante la administración de este factor, son reproducidas la hipofosfatemia y la osteomalacia (Shimada T., Mizutani S., Muto T., Yoneya T., Hino R., Takeda S., Takeuchi Y., Fujita T., Fukumoto S., y Yamashita T., Clonación y caracterización de FGF-23 como factor causante de la osteomalacia inducida por tumores. Proc. Natl. Acad. Sci. 98: 6500-6505, 2001). Esta investigación ha puesto de manifiesto la implicación de FGF-23 en el control metabólico, in vivo, referente al fósforo y el calcio, y ha sugerido que el FGF-23 actúa como un factor sistémico que expresa su acción mientras está circulando, in vivo. Sin embargo, la concentración y el metabolismo in vivo requeridos para la expresión de la acción de FGF-23, no han sido indicadas, y el papel fisiológico de FGF-23 permanece en gran medida sin conocer. Además, como una enfermedad que presenta condiciones análogas en descubrimientos clínicos, se conoce el raquitismo hipofosfatémico ligado a X. No obstante, la implicación del FGF-23 en la morbosidad no ha sido revelada. Excepto para el ADHR y la osteomalacia inducida por tumores, no se conocen enfermedades que se haya probado que estén asociadas a FGF-23.

La osteomalacia inducida por tumores, anteriormente indicada, está caracterizada por manifestar niveles anormalmente bajos de fósforo y de 1a,25-dihidroxivitamina D (a la que alude en lo sucesivo como 1,25D), en la sangre, junto con tumorigénesis. Este hecho va acompañado de disminución de la fuerza muscular, u osteomalacia, y puede dar por resultado disbasia o distasia. En la mayoría de los casos el tumor responsable de esta enfermedad es un tumor benigno que deriva de células mesenquimales. La mayor parte de los tumores responsables son pobres en cuanto a aptitud de crecimiento y aumentos notables son observados raramente durante el seguimiento. Además, aun cuando se observa progresión de la morbosidad, se necesita, con frecuencia, un examen detallada tal como una exploración de la totalidad del cuerpo mediante inspección por MRI, para encontrar el tumor responsable. Por consiguiente, algunos casos en que no se ha dado un diagnóstico confirmado y se ha emitido un diagnóstico de hipofosfatemia por causas desconocidas, son sospechosos de ser osteomalacia inducida por un tumor. Actualmente el único método que da por resultado un diagnóstico confirmado de osteomalacia inducida por un tumor, es el de confirmar la recuperación de los estados de la enfermedad mediante tumorectomía. Esto es debido a que no existen métodos mediante ensayos clínicos para examinar la relación causa-efecto entre la tumorigénesis y los estados de enfermedad,. En algunos casos, se ha llevado a cabo la extirpación de tumores no responsables que son completamente independientes de los estados de enfermedad. Para mejorar estas circunstancias ha sido esperado el desarrollo de un método de ensayos clínicos mediante el cual pudiera realizarse el diagnóstico diferencial de la osteomalacia inducida por tumores.

Ha sido descubierto el hecho de que el FGF-23 posee acción que regula el metabolismo del fósforo, in vivo. Las hormonas paratiroideas y la 1,25D, que se sabe poseen acción de regulación del metabolismo del fósforo, desempeñan un papel más importante en la regulación del metabolismo del calcio en vez de en el metabolismo del fósforo. No se han conocido moléculas que regulen principalmente el metabolismo del fósforo y se supone que el FGF-23 posee tal actividad. Mientras tanto, es conocida desde el punto de vista clínico una relación estrecha entre el metabolismo del fósforo y el metabolismo del calcio. En particular, en términos de la calcificación de tejidos óseos y de la calcificación ectópica patológica, es difícil considerar los dos por separado. Basado en el hecho de que el FGF-23 en estado excesivo induce osteomalacia y que el FGF-23 tiene acción de disminución de 1,25D, el FGF-23 puede estar implicado no solo en...

1. Un anticuerpo que reconoce una secuencia entre los restos 180º y 194º del polipéptido representados por SEQ ID NO: 1, y puede neutralizar actividades biológicas de FGF-23.

2. El anticuerpo según la reivindicación 1, que es un anticuerpo monoclonal.

3. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo, como un ingrediente activo, que reconoce una secuencia entre los restos 180º y 194º del polipéptido representado por SEQ ID NO: 1, y puede neutralizar actividades biológicas de FGF-23.

4. El uso de un anticuerpo que reconoce una secuencia entre los restos 180º y 194º del polipéptido representado por SEQ ID NO: 1, que puede neutralizar actividades biológicas de FGF-23, para fabricar una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de una enfermedad seleccionada entre raquitismo hipofosfatémico ligado a X, hipofosfatemia, osteoporosis y fallo renal.

5. Un anticuerpo contra FGF-23, producido por un hibridoma cuyo número de registro es FERM BP-7838, FERM BP-7839, FERM BP-7840 ó FERM BP-8268.

6. Una composición farmacéutica que comprende, como ingrediente activo, el anticuerpo contra FGF-23, producido por el hibridoma cuyo número de registro es FERM BP-7838, FERM BP-7839 ó FERM BP-8268.

7. El uso del anticuerpo contra FGF-23, producido por el hibridoma cuyo número de registro es FERM BP-7838, FERM BP-7839, o FERM BP-8268, para fabricar una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de una enfermedad seleccionada entre raquitismo hipofosfatémico ligado a X, hipofosfatemia, osteoporosis y fallo renal.

8. Un anticuerpo que es competitivo con el anticuerpo producido por el hibridoma cuyo número de registro es FERM BP-7838 ó FERM BP-8268, por unión con el polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 y puede neutralizar actividades biológicas de FGF-23.

9. Una composición farmacéutica que comprende, como ingrediente activo, un anticuerpo que es competitivo con el anticuerpo producido por el hibridoma cuyo numero de registro es FERM BP-7838, FERM BP-7839 ó FERM BP-8268, por unión con el polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, y puede neutralizar actividades biológicas de FGF-23.

10. El uso de un anticuerpo que es competitivo con el anticuerpo producido por el hibridoma cuyo número de registro es FERM BP-7838, FERM BP-7839 ó FERM BP-8268, por unión con el polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1, y puede neutralizar actividades biológicas de FGF-23, para fabricar una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de una enfermedad seleccionada entre raquitismo hipofosfatémico ligado a X, hipofosfatemia, osteoporosis y fallo renal.