PROCESO DE PRODUCCION DE UN FACTOR DE CRECIMIENTO PLACENTARIO RECOMBINANTE.
Un proceso para extraer y purificar la forma activa dimérica y multimérica del factor de crecimiento placentario (PlGF),
que no contenga más del 1,5% de forma monomérica, mediante la expresión en un sistema de expresión inducible en células procariotas que comprende los siguientes pasos: I) la fermentación de las células procariotas, II) la extracción y purificación de los cuerpos de inclusión, III) la renaturalización de la proteína expresada, IV) la realización de cromatografía de intercambio iónico y V) la realización de cromatografía de fase inversa. El proceso está caracterizado por lo siguiente: el paso (I) se lleva a cabo hasta obtener una densidad óptica del medio de cultivo entre 14 y 50 a 600 nm (DO600 14-50) seguido de la inducción; el paso (II) comprende la lisis de las células en cultivo, la ruptura del DNA y el aislamiento de los cuerpos de inclusión; en el paso (III) los cuerpos de inclusión se solubilizan en tampón desnaturalizante y la proteína expresada se vuelve a llevar, al menos parcialmente, a su forma dimérica; en el paso (IV) las formas diméricas y multiméricas de la proteína expresada se separan de la forma monomérica por cromatografía de intercambio aniónico; en el paso (V) las formas diméricas y multiméricas de la proteína expresada se separan de nuevo de la forma monomérica mediante cromatografía de fase inversa, seguida por dos pasos de elución con un gradiente creciente de solvente orgánico separados por un paso de elución isocrática y finalmente el aislamiento.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: GEYMONAT S.P.A.
Nacionalidad solicitante: Italia.
Dirección: 2 VIA S.ANNA,I-03012 ANAGNI FR.
Inventor/es: MAGLIONE, DOMENICO, BATTISTI,MAURO, CONTI,ETTORE, SALVIA,GIUSEPPE, TUCCI,MARINA.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 4 de Abril de 2007.
Clasificación PCT:
- C07K14/475 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Factores de crecimiento; Reguladores de crecimiento.
- C12N15/12 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican proteínas animales.
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