Procedimiento para clonar ARNm y visualizar transcriptores diferencialmente expresados (DODETS).
Un procedimiento para la preparación de una genoteca subdividida normalizada de fragmentos de ADNc amplificados de la región de codificación del ARNm contenido en una muestra,
comprendiendo el procedimiento las etapas de a)someter el ARNm derivado de la muestra a transcripción inversa utilizando al menos un cebador de ADNc, obteniendo así fragmentos de ADNc de la primera cadena, b) sintetizar la segunda cadena de ADNc complementaria con los fragmentos de ADNc de la primera cadena mediante el uso de los fragmentos de ADN de la primera cadena como moldes, obteniendo así fragmentos de ADNc de doble cadena, c) digerir los fragmentos de ADNc de doble cadena con al menos una endonucleasa de restricción, defi jando la citada endonucleasa de restricción extremos protuberantes (extremos cohesivos) de tamaño similar en los extremos del ADN después de digestión, obteniendo así fragmentos de ADNc cortados, d) anadir al menos dos fragmentos adaptadores que contienen secuencias conocidas a los fragmentos de ADNc cortados obtenidos en la etapa c), siendo capaces al menos dos de estos fragmentos adaptadores de unirse específicamente a los extremos cohesivos del ADNc de doble cadena producido en la etapa c), siendo capaz un fragmento adaptador de reasociarse con el cebador de fórmula I en la etapa e), y siendo el segundo fragmento adaptador un fragmento de terminación que introduce un bloqueo frente a la polimerización de ADN en la dirección 5'!3' partiendo del citado fragmento de terminación, y siendo incapaz el citado fragmento de terminación de reasociarse con ningún cebador de al menos dos conjuntos de cebadores de la etapa e) durante el procedimiento de amplificación molecular, estando ligado el menos dos fragmentos adaptadores a los fragmentos de ADNc cortados obtenidos en la etapa c), de modo que se obtienen fragmentos de ADNc ligados, e) subdividir los fragmentos de ADNc ligados obtenidos en la etapa d) en 4 n1 conjuntos en los que 1 n1 4, y f) someter cada conjunto de fragmentos de ADNc ligados obtenidos en la etapa e) a un procedimiento de amplificación molecular de modo que se obtienen fragmentos de ADN amplicados en los que se utiliza, para un fragmento adaptador utilizado en la etapa d), un conjunto de cebadores de amplificación de fórmula general 5'-Com-Nn1-3' I en la que Com es una secuencia complementaria con al menos el extremo 5' de un fragmento adaptador que está ligado al extremo 3' de un fragmento de ADNc cortado, N es A, G, T ó C, teniendo un cebador la fórmula general I en la que n1 0, y teniendo el segundo cebador la fórmula general I enlaque1n1 4, siendo el citado primer cebador capaz de cebar la amplificación de cualquier secuencia de nucleótidos ligada por su extremo 3' al fragmento de adaptador complementario en su extremo 5' a Com.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: DISPLAY SYSTEMS BIOTECH A/S.
Nacionalidad solicitante: Dinamarca.
Dirección: LERSO PARK ALLE 40,,2100 COPENHAGEN.
Inventor/es: WARTHOE, PETER, ROLF.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 13 de Mayo de 1998.
Fecha Concesión Europea: 19 de Septiembre de 2001.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Finlandia, Chipre, Oficina Europea de Patentes, Armenia, Azerbayán, Bielorusia, Ghana, Gambia, Kenya, Kirguistán, Kazajstán, Lesotho, República del Moldova, Malawi, Federación de Rusia, Sudán, Tayikistán, Turkmenistán, Uganda, Zimbabwe, Burkina Faso, Benin, República Centroafricana, Congo, Costa de Marfil, Camerún, Gabón, Guinea, Malí, Mauritania, Niger, Senegal, Chad, Togo, Organización Regional Africana de la Propiedad Industrial, Swazilandia, Organización Africana de la Propiedad Intelectual, Organización Eurasiática de Patentes.
Patentes similares o relacionadas:
Método para analizar ácido nucleico molde, método para analizar sustancia objetivo, kit de análisis para ácido nucleico molde o sustancia objetivo y analizador para ácido nucleico molde o sustancia objetivo, del 29 de Julio de 2020, de Kabushiki Kaisha DNAFORM: Un método para analizar un ácido nucleico molde, que comprende las etapas de: fraccionar una muestra que comprende un ácido nucleico molde […]
MÉTODOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMOS ATÓPICOS SENSIBLES A COMPONENTES ALERGÉNICOS DEL POLEN DE OLEA EUROPAEA (OLIVO), del 23 de Julio de 2020, de SERVICIO ANDALUZ DE SALUD: Biomarcadores y método para el diagnostico, estratificación, seguimiento y pronostico de la evolución de la enfermedad alérgica a polen del olivo, kit […]
Detección de interacciones proteína a proteína, del 15 de Julio de 2020, de THE GOVERNING COUNCIL OF THE UNIVERSITY OF TORONTO: Un método para medir cuantitativamente la fuerza y la afinidad de una interacción entre una primera proteína de membrana o parte de la misma y una […]
Secuenciación dirigida y filtrado de UID, del 15 de Julio de 2020, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Un procedimiento para generar una biblioteca de polinucleótidos que comprende: (a) generar una primera secuencia del complemento (CS) de un polinucleótido diana a partir […]
Métodos para la recopilación, estabilización y conservación de muestras, del 8 de Julio de 2020, de Drawbridge Health, Inc: Un método para estabilizar uno o más componentes biológicos de una muestra biológica de un sujeto, comprendiendo el método obtener un […]
Evento de maíz DP-004114-3 y métodos para la detección del mismo, del 1 de Julio de 2020, de PIONEER HI-BRED INTERNATIONAL, INC.: Un amplicón que consiste en la secuencia de ácido nucleico de la SEQ ID NO: 32 o el complemento de longitud completa del mismo.
Composiciones para modular la expresión de SOD-1, del 24 de Junio de 2020, de Biogen MA Inc: Un compuesto antisentido según la siguiente fórmula: mCes Aeo Ges Geo Aes Tds Ads mCds Ads Tds Tds Tds mCds Tds Ads mCeo Aes Geo mCes Te (secuencia […]
Aislamiento de ácidos nucleicos, del 24 de Junio de 2020, de REVOLUGEN LIMITED: Un método de aislamiento de ácidos nucleicos que comprenden ADN de material biológico, comprendiendo el método las etapas que consisten en: (i) efectuar un lisado […]