Clon infeccioso de ADNc del virus del Síndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (SRRP) Norteamericano y usos del mismo.

Una molécula de polinucleótido aislada que comprende una secuencia de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN en la que dicha secuencia de ADN es al menos un 85% idéntica a la secuencia SEC ID Nº 1

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Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E05018141.

Solicitante: Zoetis P LLC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 100 Campus Drive Florham Park, New Jersey 07932 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: SHEPPARD, MICHAEL GEORGE, CALVERT, JAY GREGORY, WELCH, SIAO-KUN WAN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > A61K48/00 (Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/569 (para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P15/00 (Medicamentos para el tratamiento de trastornos genitales o sexuales (para trastornos de las hormonas sexuales A61P 5/24 ); Anticonceptivos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales,... > C12N5/10 (Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/09 (Tecnología del ADN recombinante)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/86 (Vectores virales)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/50 (Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre, de orina; Investigación o análisis por métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Investigación o análisis inmunológico (procedimientos de medida, de investigación o análisis diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto; procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q))
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los... > C12N7/04 (Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > C12N7/00 (Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00))
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/08 (Virus ARN)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/12 (Antígenos virales)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS;... > Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido... > C07H21/02 (con ribosilo como radical sacárido)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P11/00 (Medicamentos para el tratamiento de trastornos del aparato respiratorio)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen sustancias... > A61K35/76 (Virus; Partículas subvirales; Bacteriófagos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/10 (Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34))
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos,... > A61P31/12 (Antivirales)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los... > C12N7/01 (Virus, p. ej. Bacteriófagos, modificados por la introducción de material genético externo (vectores C12N 15/00))
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos,... > A61P31/14 (para virus ARN)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/40 (Proteínas de virus ARN, p. ej. Flavivirus)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/295 (Antígenos virales polivalentes (virus de la viruela o de la varicela A61K 39/285 ); Mezclas de antígenos virales y bacterianos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que... > C12N1/19 (modificados por la introducción de material genético extraño)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN... > Preparación de péptidos o de proteínas (proteína... > C12P21/02 (que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que... > C12N1/21 (modificados por la introducción de material genético extraño)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/15 (preparaciones medicinales)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que... > C12N1/15 (modificados por la introducción de material genético extraño)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/165 (Coronaviridae, p. ej. virus de la bronquitis infecciosa aviar)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/215 (Coronaviridae, p. ej. virus de la bronquitis infecciosa aviar)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > SISTEMA DE INDEXACION ASOCIADO A LAS SUBCLASES C12C... > Microorganismos > C12R1/91 (Líneas celulares)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > SISTEMA DE INDEXACION ASOCIADO A LAS SUBCLASES C12C... > Microorganismos > C12R1/93 (Virus animales)

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Clon infeccioso de ADNc del virus del Síndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (SRRP) Norteamericano y usos del mismo.

Fragmento de la descripción:

Clon infeccioso de ADNc del virus del Síndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (SRRP) Norteamericano y usos del mismo Campo de la Invención La presente invención pertenece al campo de la salud animal y se refiere a los clones de ADNc infecciosos de los ARN virus de polaridad positiva y la elaboración de vacunas, en particular, vacunas porcinas, utilizando tales clones de ADNc.

Antecedente de la Invención El síndrome reproductor y respiratorio porcino (SRRP) es una nueva enfermedad de porcina, descrita por primera vez en 1987 en Norteamérica y en 1990 en Europa. La enfermedad se ha diseminado desde entonces a Asia y afecta a la mayoría de los países del mundo con mayor producción de cerdos. Los síntomas primarios son problemas reproductivos en cerdas de cría y lechonas de reposición, que incluyen abortos a término, mortinatos y momificados, y camadas de lechones pequeños débiles que nacen virémicos y que a menudo no consiguen sobrevivir. Además, el síndrome se manifiesta así mismo como una enfermedad respiratoria en lechones que se disemina horizontalmente y que produce fiebre, letargia, respiración dificultosa, pérdida de apetito, crecimiento lento, y ocasionalmente muerte, a menudo asociada con otros patógenos respiratorios. La enfermedad además se puede transmitir a cerdas y lechonas de reposición a través del semen de verracos infectados, sea por monta natural o por inseminación artificial. Por estas y otras razones, se ha probado que el SRRP es una enfermedad difícil de controlar y por tanto una de las enfermedades más dañinas económicamente de la industria porcina.

El agente causal del SRRP es el virus SRRP, del que existen dos tipos genética y serológicamente distintos (Murtaugh, M.P. y col., 1995, Arch-Virol. 140, 1451-1460; Suarez, P. y col., 1996, Virus Research 42:159-165) . Se cree que los dos tipos entraron por primera vez en la población porcina independientemente, uno en Norteamérica y el otro en Europa, en los 80, a partir de reservorios biológicos desconocidos, posiblemente de origen roedor o aviar. El tipo europeo, representado por el prototipo “Virus Lelystad”, se aisló y secuenció en Holanda en 1991 (Terpstra,

C. y col., 1991, Vet. Quart. 13:131-136; Wensvoort, G. y col., 1991, Vet. Quart. 13:121-130; Wensvoort, G. y col., documento WO 92/213751992 (PCT/NL92/00096) , 1992; Meulenberg, J.J.M. y col., 1993, Virol. 192:62-72) .

Tanto el virus SRRP norteamericano como el virus SRRP europeo se clasifican dentro de la familia Arteriviridae, que también incluye el virus de la arteritis equina, virus elevador de la lactato deshidrogenasa, y el virus de la fiebre hemorrágica de los simios. A su vez, los arterivirus se sitúan dentro del orden Nidovirales, que también incluyen los coronavirus y los torovirus. Los nidovirus son virus de envoltura que tienen genomas que consisten en una cadena sencilla de ARN con polaridad positiva. El ARN genómico de un ARN virus catenario positivo cumple con el doble papel de almacenamiento y expresión de la información genética. En los nidovirus no hay ADN que esté implicado en la replicación o la transcripción. La reproducción del ARN genómico de los nidovirus es por tanto un proceso combinado de replicación genómica y transcripción en ARNm. Además, en los nidovirus algunas proteínas se traducen directamente del ARN genómico. La biología molecular de la familia Arteriviridae ha sido revisada recientemente por Snijder y Meulenberg (Snijder, E.J. y Meulenberg, J.J.M., 1998, Journal of General Virology 79:961-979) .

Las vacunas disponibles comercialmente en la actualidad contra el SRRP son o las convencionales de virus vivo modificado (cultivo celular, atenuadas) o las muertas convencionales (cultivos celulares de virus virulento inactivados) . Varias de estas vacunas se han criticado basándose en lo que concierne a su seguridad y/o eficacia. Por tanto es muy deseable el desarrollo de una segunda generación de vacunas SRRP, que se basen en adiciones específicas, supresiones, y otras modificaciones del genoma SRRP. Sin embargo, como los virus SRRP no disponen de ADN intermedios para su replicación, tales vacunas han tenido por tanto que esperar la construcción de clones del ADNc de longitud completa de los virus SRRP por manipulación mediante técnicas de biología molecular a nivel del ADN. Muy recientemente, se ha informado de un clon infeccioso de ADNc de longitud completa del virus SRRP europeo (Meulenberg, J.J.M. y col., 1998, mencionado anteriormente; Meulenberg, J.J.M. y col., 1988, J. Virol. 72, 380-387.) .

Las publicaciones precedentes, así como otras referencias tratadas a continuación en esta solicitud, se incorporan en el presente documento por referencia en su totalidad.

Sumario de la Invención El objeto de la invención proporciona una molécula de polinucleótido aislada que comprende una secuencia de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN en el que dicha secuencia de ADN es al menos un 85% idéntica a la secuencia SEC ID Nº 1.

El objeto de la invención proporciona además una molécula infecciosa de ARN aislada codificada por la molécula de polinucleótido aislada mencionada anteriormente, en la que la molécula infecciosa de ARN aislada codifica un virus SRRP norteamericano.

El objeto de la invención proporciona además la molécula de polinucleótido aislada mencionada anteriormente que codifica la molécula infecciosa de ARN en forma de un vector que es un plásmido.

El objeto de la invención proporciona además una célula huésped transfectada que comprende una secuencia de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN, en la que dicha secuencia de ADN es al menos un 85% idéntica a la secuencia SEC ID Nº 1.

El objeto de la invención proporciona además una molécula de polinucleótido aislada que comprende una secuencia de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN que codifica un virus SRRP norteamericano que está modificado genéticamente de forma que carece de un epítopo antigénico detectable, en el que dicha secuencia de ADN es al menos un 85% idéntica a la secuencia SEC ID Nº 1 pero careciendo de una o más secuencias de ADN que codifiquen un epítopo antigénico detectable.

El objeto de la invención además proporciona un plásmido capaz de transfectar directamente una célula huésped adecuada y expresar un virus de los Nidovirales a partir de la célula huésped transfectada de esta manera, en el que el plásmido comprende a) una secuencia de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN que codifica un virus de los Nidovirales teniendo dicha secuencia de ADN una secuencia con al menos el 85% de identidad secuencial con la secuencia SEC ID Nº 1 y b) un promotor capaz de transcribir dicha molécula infecciosa de ARN en dicha célula huésped adecuada.

El objeto de la invención proporciona además un procedimiento para generar un virus de los Nidovirales, cuyo procedimiento comprende transfectar una célula huésped adecuada con un plásmido capaz de transfectar directamente una célula huésped adecuada y expresar un virus de los Nidovirales a partir de la célula huésped adecuada así transfectada, en el que el plásmido comprende a) una secuencia de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN que codifica un virus de los Nidovirales teniendo dicha secuencia de ADN una secuencia con al menos el 85% de identidad secuencial con la secuencia SEC ID Nº 1 y b) un promotor capaz de transcribir dicha molécula infecciosa de ARN en dicha célula huésped adecuada.

Una vacuna para proteger un mamífero o un ave de la infección por virus de los Nidovirales que comprende un virus de los Nidovirales modificado genéticamente generado como se describió anteriormente en una cantidad eficaz para provocar una respuesta inmunoprotectora eficaz... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Una molécula de polinucleótido aislada que comprende una secuencia de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN en la que dicha secuencia de ADN es al menos un 85% idéntica a la secuencia SEC ID Nº 1.

2. Una molécula infecciosa de ARN aislada codificada por una molécula de polinucleótido aislada de acuerdo con la 5 reivindicación 1, en que la molécula infecciosa de ARN codifica un virus SRRP norteamericano.

3. Una molécula de polinucleótido aislada de acuerdo con la reivindicación 1 en forma de plásmido.

4. Una célula huésped transfectada que comprende una secuencia de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN, en la que dicha secuencia de ADN es al menos un 85% idéntica a la SEC ID Nº 1.

5. Un plásmido capaz de transfectar directamente una célula huésped adecuada y expresar un virus de los

Nidovirales a partir de la célula huésped así transfectada, dicho plásmido comprende a) una secuencia de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN que codifica virus de los Nidovirales, teniendo dichas secuencias de ADN una secuencia con al menos un 85% de identidad secuencial con la secuencia SEC ID Nº 1 y b) un promotor capaz de transcribir dicha molécula infecciosa de ARN en dicha célula huésped adecuada.

6. Un procedimiento para generar un virus de los Nidovirales, en el que el procedimiento comprende transfectar una célula huésped adecuada con un plásmido de acuerdo con la reivindicación 5 y obtener virus generados por la célula huésped transfectada.

7. Una molécula de polinucleótido aislada que comprende una molécula de ADN que codifica una molécula infecciosa de ARN que codifica un virus SRRP norteamericano que está modificado genéticamente, de forma que carece de epítopo antigénico detectable, en la que dicha secuencia de ADN es al menos un 85% idéntica a la SEC

ID Nº 1 pero carece de una o más secuencias de ADN que codifican un epítopo detectable.