Vacunación in ovo de campylobacter en especies aviares.

Una cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni para su uso en la inducción de unarespuesta inmune en un ave contra Campylobacter,

que comprende la administración, in ovo, durante la última cuartaparte de la incubación, de la cantidad inmunizante efectiva de células vivas de un Campylobacter jejuni; en la que dichascélulas vivas de Campylobacter jejuni están libres de anticuerpos neutralizantes o fragmentos de anticuerposneutralizantes.

Vacunación in ovo de campylobacter en especies aviares Campo de la invención La presente invención se refiere a procedimientos de inducción de una respuesta inmune en una especie aviar contra Campylobacter mediante la administración, in ovo, de células vivas de Campylobacter jejuni.

Antecedentes de la invención El consumo de aves de corral contaminadas con Campylobacter se ha visto implicado como una fuente principal de infección humana. Por lo tanto, la eliminación de estos microorganismos de la cadena de alimentos de aves de corral ha sido un objetivo importante de la investigación relacionada con Campylobacter.

Típicamente, Campylobacter crece y coloniza en el ambiente intestinal aviar. Se ha informado de colonización en pollos, patos, palomas, codornices, avestruces y pavos. La colonización de las aves de corral no resulta en enfermedad, pero es de naturaleza comensal.

El uso de un cultivo de exclusión competitiva para excluir Salmonella o Campylobacter del tracto digestivo de un ave ha sido descrito en la patente US Nº 8.491.910. La eficacia de este procedimiento frente a Campylobacter parece ser variable. La vacunación in ovo con células de Campylobacter jejuni, muertas por calor, ha sido descrita por Noor et al. (British Poultr y Science, 1995.36 (4) : 563-73) y por Noor (Jumal Ilmu Temak Dan Veteriner, 1998.3 (4) : 264-269) . La vacunación in ovo de pollos con flagelina y antígenos de proteínas de células enteras de Campylobacter jejuni ha descrita también por

S. Noor et al. (Jurnal Ilmu Ternak Dan Veteriner, 2000.5 (2) : 119-124) . Se han realizado también esfuerzos con el fin de identificar los genes implicados en la colonización (Ziprin et al., Abstracts, Poultr y Science Association meeting, 8-11 de Agosto, 1999, Springdale, AR) . Véase también, Rice, 1997, " Campylobacter jejuni in broiler chickens: colonization and humoral immunity following oral vaccination and experimental infection", Vaccine 15 (17-18) : 1922-1932, en el que se administran células muertas de Campylobacter, y Ziprin et al, 2002, Current Microbiology 44 (3) : 221-223, en el que los pollos fueron vacunados después de la eclosión con cepas viables pero no colonizadoras.

Previamente a la presente invención, no ha habido una estrategia de inmunización eficaz que emplee una administración in ovo con células vivas de Campylobacter jejuni.

Sumario de la invención La presente invención proporciona una cantidad inmunizadora eficaz de células vivas de Campylobacter jejuni para su uso en la inducción de una respuesta inmune contra Campylobacter en un ave, que comprende la administración, in ovo, durante la cuarta parte final de la incubación, la cantidad inmunizadora efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni; en el que dichas células vivas de Campylobacter jejuni están libres de anticuerpos neutralizantes o fragmentos de anticuerpos neutralizantes.

La presente invención proporciona también el uso de una cantidad inmunizadora eficaz de células vivas de Campylobacter jejuni en la fabricación de un medicamento para inducir una respuesta inmune contra Campylobacter en un ave, que comprende la administración, in ovo, durante la cuarta parte final de la incubación, de la cantidad inmunizadora efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni; en el que dichas células vivas de Campylobacter jejuni están libres de anticuerpos neutralizantes o fragmentos de anticuerpos neutralizantes.

Según la presente invención, las células vivas de Campylobacter jejuni pueden ser administradas de manera segura a cualquier especie aviar para el propósito de inducir una respuesta inmune contra Campylobacter, especialmente a especies de aves domésticas, tales como pollos, pavos, patos, gansos y codornices.

Según un aspecto de la presente invención, las células vivas usadas en la administración pueden comprender células vivas de más de una especie de Campylobacter. Las especies de Campylobacter adecuadas para su uso en la presente invención, además de Campylobacter jejuni, incluyen pero no se limitan a, Campylobacter coli, Campylobacter lari o una combinación de los mismos.

Las células de Campylobacter jejuni pueden ser células de tipo salvaje o células de Campylobacter jejuni que han sido modificadas genéticamente para contener una o más mutaciones en el genoma, o para contener una secuencia heteróloga deseable. Preferentemente, dicha secuencia heteróloga codifica:

(a) una proteína esencial en la colonización de aves domésticas por Campylobacter,

(b) un antígeno de un virus, bacteria o parásito que causa una enfermedad en un ave doméstica;

(c) un antígeno de un organismo que causa enfermedades en seres humanos transmitidas por los alimentos;

(d) una proteína que potencia el crecimiento o la eficacia de la alimentación de un ave doméstica; o

(e) una proteína que estimula el sistema inmune de un ave.

Preferentemente, las células se combinan con un vehículo veterinario aceptable antes de su administración y se administran en una cantidad que es eficaz para inducir una respuesta inmune en la especie aviar desarrollada a partir del huevo tratado, preferentemente en una cantidad de al menos aproximadamente 5 x 105 y, más preferentemente, de al menos aproximadamente 1 x 106 células vivas. Más preferentemente, dicho vehículo veterinario aceptable se combina con células vivas de Campylobacter jejuni previamente a una administración in ovo.

En otro aspecto de la presente invención, las células vivas de Campylobacter jejuni se combinan con al menos otro inmunógeno seleccionado de entre un inmunógeno vírico, bacteriano o protozóico.

Descripción detallada de la invención Sorprendentemente, se ha encontrado según la presente invención, que las células vivas de Campylobacter jejuni pueden ser administradas in ovo, de manera segura, a huevos de una especie aviar, lo que resulta en una colonización efectiva e induce una respuesta inmune en la especie aviar contra Campylobacter.

Por consiguiente, la presente invención proporciona un procedimiento para inducir una respuesta inmune en una especie aviar contra Campylobacter mediante una administración in ovo de células vivas de Campylobacter jejuni.

Tal como se usa en la presente memoria, la expresión "especie aviar" o "ave" pretende incluir cualquier especie de ave, incluyendo un ave doméstica o un ave de caza, por ejemplo, pollo, pavo, pato, ganso o codorniz.

Preferentemente, las células vivas de Campylobacter jejuni son administradas a huevos de un ave doméstica criada para la producción comercial de huevos o carne, tal como un pollo, pavo, pato, ganso y codorniz domésticos.

El término "Campylobacter” se refiere a cualquier especie de Campylobacter o cualquier cepa de una especie Campylobacter, incluyendo Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Campylobacter lari. Las cepas de Campylobacter jejuni adecuadas para su uso en el presente procedimiento incluyen C. jejuni UA535 y C. jejuni 81-176, así como las cepas mutantes siguientes: C. jejuni CsrA (con mutación en el gen Cj1103, un homólogo de csrA) , C. jejuni HspR (Cj1230 ) , C. jejuni HtrA (Cj1228c) , C. jejuni Dps (Cj1534c) , C. jejuni flbA (Cj0822c) , C. jejuni PnP (Cj1253) y C. jejuni SurE (Cj0293) .

Tanto las cepas de tipo salvaje como las mutantes de Campylobacter jejuni pueden ser usadas en el procedimiento de la presente invención, incluyendo las cepas que han sido modificadas genéticamente y que contienen una o más mutaciones en el genoma. La capacidad de una cepa Campylobacter mutante en la colonización y la inducción de una respuesta inmune en una especie aviar puede determinarse siguiendo las técnicas descritas en los ejemplos siguientes o las técnicas conocidas por las personas con conocimientos en la materia.

En una realización preferida, la cepa Campylobacter jejuni empleada en el procedimiento de la presente invención ha sido modificada genéticamente para que contenga una secuencia heteróloga de polinucleótidos. La secuencia heteróloga puede ser transferida a la cepa Campylobacter jejuni a través de un plásmido, un fago o un vector cósmido mediante diversos medios, tales como conjugación, electroporación o transformación. Otros procedimientos, tales como la transducción, son también adecuados, en el que el ADN recombinante en la forma de un fago transductor o vector cósmido es empaquetado dentro de un fago. Una vez que el polinucleótido recombinante está en la cepa Campylobacter jejuni portadora, puede seguir existiendo como un replicón autónomo separado o puede ser insertado en el cromosoma de Campylobacter jejuni y puede ser reproducido junto con el cromosoma durante la división celular.

Según... [Seguir leyendo]

1. Una cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni para su uso en la inducción de una respuesta inmune en un ave contra Campylobacter, que comprende la administración, in ovo, durante la última cuarta parte de la incubación, de la cantidad inmunizante efectiva de células vivas de un Campylobacter jejuni; en la que dichas células vivas de Campylobacter jejuni están libres de anticuerpos neutralizantes o fragmentos de anticuerpos neutralizantes.

2. Cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni para su uso según la reivindicación 1, en la que:

(a) dicha ave es seleccionada de entre el grupo que consiste en un pollo, un pavo y un pato; o

(b) las células vivas son de tipo salvaje o han sido modificadas genéticamente.

3. Cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni para su uso según la reivindicación 2 (b) , en la que se ha introducido una secuencia heteróloga de polinucleótidos en las células vivas de Campylobacter jejuni.

4. Cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni para su uso según la reivindicación 3, en la que dicha secuencia heteróloga de polinucleótidos codifica:

(a) una proteína esencial en la colonización de aves domésticas por Campylobacter,

(b) un antígeno de un virus, bacteria o parásito que causa una enfermedad en un ave doméstica;

(c) un antígeno de un organismo que causa enfermedades en seres humanos transmitidas por los alimentos;

(d) una proteína que potencia el crecimiento o la eficacia de la alimentación de un ave doméstica; o

(e) una proteína que estimula el sistema inmune de un ave.

5. Cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni para su uso según la reivindicación 1, que comprende además la administración de un vehículo veterinario aceptable.

6. Cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni para su uso según la reivindicación 5, en el que el vehículo veterinario aceptable es combinado con las células vivas de Campylobacter jejuni previamente a la administración in ovo.

7. Cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni para su uso según la reivindicación 1, en la que dichas células vivas de Campylobacter jejuni se combinan con al menos un inmunógeno seleccionado de entre un inmunógeno vírico, bacteriano o protozóico.

8. Uso de una cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni en la fabricación de un medicamento para inducir una respuesta inmune en un ave contra Campylobacter, que comprende la administración in ovo, durante la última cuarta parte de la incubación, de la cantidad inmunizante efectiva de células vivas de Campylobacter jejuni; en la que dichas células vivas de Campylobacter jejuni están libres de anticuerpos neutralizantes o fragmentos de anticuerpos neutralizantes.

9. Uso según la reivindicación 8, en el que

(a) dicha ave es seleccionada de entre el grupo que consiste en un pollo, un pavo y un pato; o

(b) las células vivas son de tipo salvaje o han sido modificadas genéticamente.

10. Uso según la reivindicación 9 (b) , en el que se ha introducido una secuencia heteróloga de polinucleótidos en las células vivas de Campylobacter jejuni.

11. Uso según la reivindicación 10, en el que dicha secuencia heteróloga de polinucleótidos codifica:

(a) una proteína esencial en la colonización de aves domésticas por Campylobacter,

(b) un antígeno de un virus, bacteria o parásito que causa una enfermedad en un ave doméstica;

(c) un antígeno de un organismo que causa enfermedades en seres humanos transmitidas por los alimentos;

(d) una proteína que potencia el crecimiento o la eficacia de la alimentación de un ave doméstica; o

(e) una proteína que estimula el sistema inmune de un ave. 7

12. Uso según la reivindicación 8, que comprende además la administración de un vehículo veterinario aceptable.

13. Uso según la reivindicación 12, en el que dicho vehículo veterinario aceptable es combinado con las células vivas de Campylobacter jejuni previamente a la administración in ovo.

14. Uso según la reivindicación 8, en el que dichas células vivas de Campylobacter jejuni se combinan con al menos un inmunógeno diferente seleccionado de entre un inmunógeno vírico, bacteriano o protozóico.