MOLÉCULAS DE TIPO B7 Y USOS DE LAS MISMAS.

Esta solicitud reivindica el derecho de prioridad de la solicitud de patente estadounidense provisional n.º 60/233.867, presentada el 20 de septiembre de 2000. Campo de la invención La presente invención se refiere a polipéptidos de tipo B7 (B7-L) y moléculas de ácido nucleico que codifican los mismos. La invención también se refiere a agentes de unión selectiva, vectores, células huésped, y métodos para producir polipéptidos B7-L. La invención se refiere además a composiciones farmacéuticas que comprenden polipéptidos B7-L. Antecedentes de la invención Avances técnicos en la identificación, clonación, expresión y manipulación de moléculas de ácido nucleico y el descifrado del genoma humano han acelerado enormemente el descubrimiento de productos terapéuticos novedosos. Las técnicas de secuenciación rápida de ácido nucleico pueden generar ahora información de secuencia a velocidades sin precedentes y, acoplado con análisis informáticos, permiten el ensamblaje de secuencias solapantes en genomas parciales o enteros y la identificación de regiones codificantes de polipéptidos. Una comparación de una secuencia de aminoácidos predicha con una compilación de base de datos de secuencias de aminoácidos conocidas permite determinar el grado de homología con secuencias previamente identificadas y/o puntos de referencia estructurales. La clonación y expresión de una región codificante de polipéptido de una molécula de ácido nucleico proporciona un producto de polipéptido para análisis estructurales y funcionales. La manipulación de moléculas de ácido nucleico y polipéptidos codificados puede conferir propiedades ventajosas a un producto para su uso como producto terapéutico. A pesar de los avances técnicos significativos en la investigación del genoma en la última década, el potencial de desarrollo de productos terapéuticos novedosos todavía está ampliamente sin realizar. Todavía no se han identificado muchos genes que codifican productos terapéuticos polipeptídicos posiblemente beneficiosos o los que codifican polipéptidos que pueden actuar como dianas para moléculas terapéuticas. Por consiguiente, un objeto de la invención es identificar polipéptidos novedosos, y moléculas de ácido nucleico que codifican los mismos, que tienen beneficio de diagnóstico o terapéutico. Sumario de la invención Se ha identificado un polipéptido novedoso, que está relacionado con proteínas en la ruta coestimulante de células T. Este polipéptido, denominado polipéptido de tipo B7 (B7-L), representa un polipéptido relacionado con B7 que tiene una estructura similar a, y que comparte homología con, CD80, CD86, B7RP-1 y B7-H1. El polipéptido humano B7-L comparte una mayor identidad de aminoácidos con B7-H1 humano (35%) que con otros miembros de la familia B7 (B7rp-1, 20%; B7-1,12%). Además, los ortólogos de ratón y humano de polipéptido B7-L y B7-H1 comparten un mayor grado de similitud de aminoácidos (aproximadamente el 70%) que los ortólogos de ratón y humano de B7-1, B7-2 o B7rp-1 (aproximadamente el 40%). Además, tanto B7-H1 como B7-L se unen al mismo receptor, PD-1. Se dan a conocer secuencias relacionadas con los números de acceso de NCBI AK001872 y AF142780. La presente invención se refiere a moléculas de ácido nucleico B7-L novedosas y polipéptidos codificados. La invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) la secuencia de nucleótidos tal como se expone en SEQ ID NO: 1; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido tal como se expone en SEQ ID NO: 2; y (c) una secuencia de nucleótidos complementaria a las secuencias de (a) - (b). La invención también proporciona un polipéptido B7-L aislado que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se expone en SEQ ID NO: 2. También se proporcionan polipéptidos de fusión que comprenden secuencias de aminoácidos B7-L. La presente invención también proporciona un vector de expresión que comprende las moléculas de ácido nucleico aisladas tal como se exponen en el presente documento, células huésped recombinantes que comprenden las moléculas de ácido nucleico recombinante tal como se exponen en el presente documento, y un método para producir un polipéptido B7-L que comprende cultivar las células huésped y opcionalmente aislar el polipéptido así producido. También se proporcionan derivados de los polipéptidos B7-L de la presente invención. 2   Se proporcionan adicionalmente anticuerpos que pueden unirse específicamente a los polipéptidos B7-L de la invención. Tales anticuerpos pueden ser agonistas o antagonistas. La invención también abarca composiciones farmacéuticas que comprenden los ácidos nucleicos, polipéptidos o anticuerpos de la invención y uno o más agentes de formulación farmacéuticamente aceptables. Las composiciones farmacéuticas se usan para proporcionar cantidades terapéuticamente eficaces de los ácidos nucleicos o polipéptidos de la presente invención. Los polipéptidos B7-L y moléculas de ácido nucleico de la presente invención pueden usarse para tratar, prevenir, mejorar y/o detectar enfermedades y trastornos, incluyendo los mencionados en el presente documento. Breve descripción de las figuras Las figuras 1A-1B ilustran la secuencia de nucleótidos del gen B7-L humano (SEQ ID NO: 1) y la secuencia de aminoácidos deducida del polipéptido B7-L humano (SEQ ID NO: 2). Se indican el péptido señal predicho (subrayado) y el dominio transmembrana (doble subrayado). Las figuras 2A-2C ilustran una alineación de secuencia de aminoácidos de polipéptido B7-L humano (GA16817596; SEQ ID NO: 2), CD80 o B7-1 humano (Cd80_Human; SEQ ID NO: 4; n.º de registro GenBank P33681), CD86 o B7- 2 humano (Cd86_Human; SEQ ID NO: 5; n.º de registro GenBank U04343), B7-H1 humano (B7-H1_Human; SEQ ID NO: 6; n.º de registro GenBank AF177937), B7rp-1 humano (B7rp-1_Human; SEQ ID NO: 7; n.º de registro GenBank AF199028), PRO352 humano (Pro352_Human; SEQ ID NO: 8; n.º de registro GenBank Y41705), butirofilina BTF1 humana (Btf1_Human; SEQ ID NO: 9; n.º de registro GenBank U90543), butirofilina BTF2 humana (Btsf2a2_Hu; SEQ ID NO: 10; n.º de registro GenBank U90550), butirofilina BTF4 humana (Btf4_Human; SEQ ID NO: 11; n.º de registro GenBank U90546), butirofilina BTF3 humana (Btn3a3_Human; SEQ ID NO: 12; n.º de registro GenBank U90548) y butirofilina (Btn_Human; SEQ ID NO: 13; n.º de registro GenBank U39576). Las figuras 3A-3E ilustran una parte de la secuencia de nucleótidos genómica para el polipéptido B7-L humano (SEQ ID NO: 14). Se indica la ubicación de la secuencia de aminoácidos deducida del exón 1 (SEQ ID NO: 19). La figura 4 ilustra una parte de la secuencia de nucleótidos genómica para el polipéptido B7-L humano (SEQ ID NO: 15). Las figuras 5A-5F ilustran una parte de la secuencia de nucleótidos genómica para el polipéptido B7-L humano (SEQ ID NO: 16). Se indica la ubicación de la secuencia de aminoácidos deducida del exón 2 (SEQ ID NO: 20). Las figuras 6A-6B ilustran una parte de la secuencia de nucleótidos genómica para el polipéptido B7-L humano (SEQ ID NO: 17). Se indica la ubicación de la secuencia de aminoácidos deducida del exón 3 (SEQ ID NO: 21). Las figuras 7A-7M ilustran una parte de la secuencia de nucleótidos genómica para el polipéptido B7-L humano (SEQ ID NO: 18). Se indican las ubicaciones de la secuencia de aminoácidos deducida de los exones 4 (SEQ ID NO: 22), 5 (SEQ ID NO: 23) y 6. La figura 8 muestra los resultados de un análisis de transferencia de tipo Northern de la expresión de ARNm de B7-L humano. La figura 9 muestra los resultados de un análisis de citometría de flujo activada por fluorescencia (FACS) de células CHO D- transfectadas con vector solo (A), o con vectores que codifican PD-1 (B), CRP-1/ICOS (C) o CD28 (D), e incubadas o bien con FITC solo, o bien con las siguientes proteínas de fusión: CRP-1/Fc, polipéptido B7-L/Fc, B7rp- 1/Fc, B7-Hl/Fc o B7-2/Fc. La figura 10 muestra los resultados obtenidos en ensayos de proliferación de células T mediada por anticuerpos anti- CD3 usando polipéptido B7-L/Fc, B7RP-l/Fc o B7-1/Fc. La figura 11 muestra los resultados de análisis de FACS de células de sangre periférica humanas usando FITC solo (A), control de Fc (B), B7rp-1/Fc (C), polipéptido B7-L/Fc (D), polipéptido B7-L/Fc y anticuerpo anti-CD3 (E), o polipéptido B7-L/Fc y anticuerpo anti-CD19 (F). Descripción detallada de la invención Los títulos de sección usados en el presente documento son únicamente para fines de organización y no deben interpretarse como limitativos del contenido descrito. Definiciones Las expresiones gen B7-L o molécula de ácido nucleico B7-L o polinucleótido B7-L se refieren a una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos... [Seguir leyendo]

1. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) la secuencia de nucleótidos tal como se expone en SEQ ID NO: 1; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido tal como se expone en SEQ ID NO: 2; y (c) una secuencia de nucleótidos complementaria a las secuencias de (a) (b). 2. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1. 3. Una célula huésped aislada que comprende el vector de la reivindicación 2. 4. La célula huésped de la reivindicación 3, que es una célula eucariota. 5. La célula huésped de la reivindicación 3, que es una célula procariota. 6. Un procedimiento para producir un polipéptido B7-L que comprende cultivar la célula huésped según la reivindicación 3, cuando la reivindicación 3 hace referencia a la reivindicación 1(a) o 1(b), en condiciones adecuadas para expresar el polipéptido, y aislar opcionalmente el polipéptido del cultivo. 7. El procedimiento según la reivindicación 6, en el que la molécula de ácido nucleico comprende ADN promotor distinto del ADN promotor para el polipéptido B7-L nativo operativamente unido al ADN que codifica el polipéptido B7-L. 8. Un polipéptido B7-L producido mediante el procedimiento de la reivindicación 6 ó 7. 9. Un polipéptido B7-L aislado que comprende la secuencia de aminoácidos tal como se expone en SEQ ID NO: 2. 10. Un polipéptido de fusión que comprende el polipéptido de la reivindicación 8 ó 9 y una secuencia de aminoácidos heteróloga. 11. El polipéptido de fusión de la reivindicación 10, en el que la secuencia de aminoácidos heteróloga es un dominio constante de IgG o fragmento del mismo. 12. El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 8-11, que está covalentemente modificado con un polímero soluble en agua. 13. El polipéptido de la reivindicación 12, en el que el polímero soluble en agua se selecciona del grupo que consiste en polietilenglicol, monometoxipolietilenglicol, dextrano, celulosa, polietilenglicol de poli(Nvinilpirrolidona), homopolímeros de propilenglicol, copolímeros de poli(óxido de propileno/óxido de etileno), polioles polietoxilados y poli(alcohol vinílico). 14. Una composición que comprende un polipéptido B7-L de cualquiera de las reivindicaciones 8-13, y un agente de formulación farmacéuticamente aceptable. 15. Un anticuerpo que se une a un epítopo en un polipéptido B7-L humano de SEQ ID NO: 2. 16. El anticuerpo de la reivindicación 15, seleccionado del grupo que consiste en: (a) un anticuerpo humanizado; (b) un anticuerpo humano o fragmento del mismo; (c) un anticuerpo policlonal o fragmento del mismo; (d) un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo; (e) un anticuerpo quimérico o fragmento del mismo; y (f) un anticuerpo con injerto de CDR o fragmento del mismo. 17. El anticuerpo de la reivindicación 15 ó 16, que es un fragmento de región variable. 18. El fragmento de región variable de la reivindicación 17, que es un fragmento Fab o Fab. 19. Una composición que comprende una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1, y un agente de formulación farmacéuticamente aceptable. 99   20. La composición de la reivindicación 19, en la que dicha molécula de ácido nucleico está contenida en un vector viral. 21. Un vector viral que comprende una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1. 22. Una molécula de ácido nucleico según la reivindicación 1, unida a un soporte sólido. 23. Una matriz de moléculas de ácido nucleico que comprende al menos una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1.   101   102   103   104     106   107   108   109     111   112   113   114     116   117   118   119     121   122   123   124     126   127   128   129     131   132   133   134     136