Métodos de utilización de inhibidores del receptor de adenosina para potenciar la respuesta inmunitaria y la inflamación.

Un antagonista del receptor de adenosina A2a para el uso en el tratamiento de un tumor en un sujeto,

tratamiento que comprende la administración al sujeto de una dosis terapéuticamente efectiva de dicho antagonista y un antígeno específico del tumor y una célula asesina T, mejorando así la respuesta inmunitaria y el tratamiento del tumor.

Métodos de utilización de inhibidores del receptor de adenosina para potenciar la respuesta inmunitaria y la inflamación

Campo

La presente solicitud se refiere al uso de inhibidores de la adenosina extracelular y/o de inhibidores de receptores de adenosina, tales como antagonistas de receptores de adenosina y agentes que reduzcan la formación o degraden la adenosina extracelular, a fin de potenciar la respuesta inmunitaria y la inflamación, y en algunos ejemplos modular la actividad NF-kB.

Antecedentes

La respuesta inflamatoria ayuda a eliminar del organismo agentes nocivos, pero la inflamación es también una respuesta inespecífica que puede dañar los tejidos sanos. Existe un amplio espectro de agresiones patógenas que pueden desencadenar una respuesta inflamatoria, incluyendo la infección, alérgenos, estímulos autoinmunes, respuesta inmunitaria a tejidos trasplantados, sustancias químicas nocivas, toxinas, isquemia/reperfusión, hipoxia, trauma mecánico y térmico, así como crecimiento de tumores. Normalmente, la inflamación es una acción localizada que resulta en la expulsión o dilución de un agente patógeno, que a su vez resulta en el aislamiento del agente dañino y del tejido lesionado. Las células implicadas en la inflamación incluyen los leucocitos (esto es, las células del sistema inmunitario: neutrófilos, eosinófilos, linfocitos, monocitos, basófilos, macrófagos, células B, células dendríticas, granulocitos y mastocitos), el endotelio vascular, las células del músculo liso vascular, fibroblastos y miocitos.

La adenosina modula diversas funciones fisiológicas, incluyendo la inducción de la sedación, la vasodilatación, la supresión del ritmo cardiaco y la contractilidad, la inhibición de la agregabilidad plaquetaria, la estimulación de la gluconeogénesis y la inhibición de la lipolisis (véase Stiles, Trends Pharmacol. Sci. 7:486, 1986; Williams, Ann. Rev. Pharmacol. Toxico!. 27:315, 1987; Ramkumar et al, Prog. Drug. Res. 32:195, 1988). Además, la adenosina y algunos análogos de la adenosina que activan de forma no selectiva subtipos de receptores de adenosina reducen la producción de productos oxidativos inflamatorios por parte de los neutrófilos (Cronstein et al, Ann. N.Y. Acad. Sci. 451:291, 1985; Roberts et al., Biochem. J., 227:669, 1985; Schrier et al, J. Immunol. 137:3284, 1986; Cronstein et al., Clinical Immunol. Immunopath. 42:76, 1987).

Sobre la base de criterios bioquímicos y farmacológicos, se han diferenciado cuatro subtipos de receptores de adenosina: A2a, A2b, Al y A3. Al y A3 inhiben la adenilil ciclasa y A2a y A2b la estimulan (Stiles, ibid; Williams, ibid; véase también la Patente estadounidense n.° 5 441 883 para receptores de A3). Se han logrado avances sustanciales con respecto a las propiedades bioquímicas y farmacológicas de estos receptores de adenosina, tales como las características de enlace de ligandos, la glicosilación y la regulación. Además de sus efectos sobre el aldenilato ciclasa, la adenosina abre los canales de potasio, reduce el flujo a través de los canales de calcio e inhibe o estimula el ciclo de los fosfoinosítidospor medio de mecanismos mediados por receptores (Fredholm and Dunwiddie, Trends Pharmacol. Sci. 9:13, 1988; Sebastiao et al, Br. J. Pharmacol. 1:55, 199; Stiles, Clin. Res.38:1, 199; y Nakahata et al, J. Neurochem.57:963, 1991). Los ADNc que codifican los receptores de adenosina Al, A2 y A3 han sido clonados (Libert ef al, Science244:569, 1989; Maenhaet et al, Biochem. Biophys. Res. Commun. 173:1169, 199; Libert et al, EMBOJ. 1:1677, 1991; Mahan et al, Molecular Pharmacol4:1, 1991; Reppert et al, Motee. Endo. 5:137-148, 1991; Patente estadounidense n.° 5 441 883). La clonación molecular de los receptores de adenosina ha revelado que pertenecen a la superfamilia de los receptores acoplados a la proteína G.

Webb et al, Cáncer Research, 1972, 32(9): 1814-1819, describe los efectos antitumorales de la combinación de polinucleótidos con teofillina en ratones BALB/csingénicos.

Braun et al, Journal of Immunology, 1971, 17(4): 136-142, revela que los inhibidores de la fosfodiesterasa, tales como la cafeína y la teofilina, son potenciadores de los efectos de los polinucleótidos sobre la formación de anticuerpos.

Belizario et al, British Journal of Cáncer, 1993, 67(6): 1229-1235 revela que la cafeína potencia la letalidad del factor de necrosis tumoral en células cancerígenas.

Resumen

La invención se define en las reivindicaciones. En la presente se revela que los receptores de adenosina desempeñan un papel no redundante en la reducción de la inflamación in v/'voal actuar como un «TOPE» fisiológico (un mecanismo de terminación) que puede limitar la respuesta inmunitaria y de este modo proteger los tejidos normales contra daños inmunitarios excesivos durante la patogénesis de diversas enfermedades. Se demuestra que los receptores de adenosina, tales como A2a, A2b y A3, reducen la respuesta inmunitaria durante la inflamación y

protegen los tejidos contra daños inmunitarios. La inhibición de la transmisión de señales a través del receptor de adenosina puede utilizarse para intensificar y prolongar la respuesta inmunitaria.

En la presente se reivindican los métodos para incrementar una respuesta inmunitaria. El método aumenta el daño tisular deseable y selectivo de un tumor, por ejemplo cáncer. En la presente se describen métodos para inhibir uno o más procesos que conducen a la producción de adenosina extracelular y a la transmisión de señales estimulada por adenosina a través de los receptores de adenosina. Por ejemplo, la intensificación de una respuesta inmunitaria, la inflamación de tejido local y la destrucción tisular selectiva se consiguen: inhibiendo o reduciendo la hipoxia del tejido local productora de adenosina; degradando (o inactivando) la adenosina extracelular acumulada; previniendo o reduciendo la expresión de receptores de adenosina en células inmunitarias y/o inhibiendo/antagonizando la transmisión de señales por parte de ligandos de adenosina través de receptores de adenosina. Los resultados divulgados en la presente demuestran que la administración in v/'vode agentes que interfieren en la ruta «hipoxia -> acumulación de adenosina -> transmisión de señales inmunosupresoras del receptor de adenosina a las células inmunitarias» en sujetos que padecen diversas enfermedades (p. ej. cáncer y septicemia) puede resultar en el tratamiento in v/'vode tumores o en una mejora de la inmunización.

La invención incluye la administración de uno o más antagonistas del receptor de adenosina A2a. A fin de aumentar la eficacia de una vacuna, se pueden administrar en combinación con la vacuna uno o más inhibidores de receptor de adenosina y/o inhibidores de adenosina extracelular. Se administran uno o más inhibidores de receptor de adenosina para aumentar una respuesta ¡nmunitaria/inflamación. La invención tiene como objetivo el daño tisular para la destrucción de tumores.

Descripción breve de las figuras

FIG. 1A es un gráfico de barras que muestra que los receptores elevadores del nivel de AMPc o los incrementos del nivel de AMPc activados farmacológicamente son capaces de bloquear la inflamación in vivo. Las diferencias entre ratones tratados y no tratados son estadísticamente significativas, tal como se indica mediante el asterisco

(*P<,5).

FIG. 1B es un gráfico de barras que muestra que los receptores de A2a elevadores del nivel de AMPc activados farmacológicamente son capaces de bloquear la inflamación in vivo. Las diferencias entre ratones tratados y no tratados son estadísticamente significativas, tal como se indica mediante el asterisco (*P<,5).

FIGS. 2A y 2B son gráficos de barras que muestran los niveles de AMPc en células linfoides de (A) ratones silvestres (A2aR+/+) o (B) ratones con deficiencia de A2aR (A2aR / ) tratados exclusivamente con CGS2168 o bien con CGS2168 y ZM241385.

FIGS. 2C y 2D son gráficos de barras que muestran los niveles de AMPc en células linfoides de (C) ratones silvestres (A2aR+/+) o (D) ratones con deficiencia de A2aR (A2aR"/_) tratados con FK, isoproterenol o PGE2. Las diferencias entre ratones tratados y no tratados son estadísticamente significativas, tal como se indica mediante el

asterisco (*P<,5).

FIGS. 3A y 3B son diagramas de puntos que muestran los niveles en suero de (A) ALT o (B) TNF-a en ratones A2aR+/+ y Á2aR /' en varios momentos.

FIG. 4A es un gráfico de barras que muestra los niveles de ALT en suero en ratones tratados con diferentes combinaciones de estímulos inflamatorios, (Con-A) y antagonista del receptor de A2 ZM241385. *P<,5 en comparación con ratones A2aR+/+.

FIGS. 4B y 4C son... [Seguir leyendo]

1. Un antagonista del receptor de adenosina A2a para el uso en el tratamiento de un tumor en un sujeto, tratamiento que comprende la administración al sujeto de una dosis terapéuticamente efectiva de dicho antagonista y un antígeno especifico del tumor y una célula asesina T, mejorando así la respuesta inmunitaria y el tratamiento del tumor.

2. El antagonista de la reivindicación 1, donde la mejora de la respuesta inmunitaria conduce a una reducción del volumen de la célula tumoral y/o a una reducción del número de células tumorales en el sujeto.

3. El antagonista de las reivindicaciones 1 o 2, donde el antagonista es ZM241385, 1,3,7-trimetilxantina (cafeína), teofilina, teobromina, SCH58261, KW-62, una ribozima, un oligonucleótido antisentido u otro ácido nucleico catalítico que se une selectivamente a ARNm codificador del receptor de adenosina A2a.

4. El antagonista de la reivindicación 1, donde el tumor tiene un diámetro superior a 2 mm y donde el tumor presenta áreas de hipoxia local.

5. El antagonista de la reivindicación 4, donde el tumor es un tumor de pulmón, mama, piel o hígado.

6. El antagonista de la reivindicación 2, donde el tratamiento comprende además la administración al sujeto de una dosis terapéuticamente efectiva de un agente antineoplásico.

7. El antagonista de la reivindicación 6, donde el agente antineoplásico se dirige selectivamente contra células de la neoplasia.

8. El antagonista de la reivindicación 7, donde el agente antineoplásico es un ácido nucleico que codifica una proteína que promueve la muerte celular.

9. El antagonista de la reivindicación 6, donde el agente antineoplásico es un fármaco alquilante, un antagonista del folato, un antagonista de la purina, un antagonista de la pirimidina, un veneno husillo, una podofilolotoxina, un antibiótico, una nitrosourea, un ion inorgánico, un modificador de la respuesta biológica, una enzima o una hormona.

1. El antagonista de la reivindicación 6, donde dicho sujeto ha sido tratado previamente con radiación o con isótopos radiactivos para incrementar el daño a la neoplasia.