El uso de un inhibidor de elastasa en la fabricación de un medicamento para evitar o inhibir la salida de células de la AML desde la médula ósea hasta la sangre en pacientes que padecen AML,

o para evitar o inhibir la proliferación de células de la AML.

Inhibidor de elastasa en leucemia

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere al uso de un inhibidor de elastasa en el tratamiento de la leucemia humana, tal como la 5 leucemia mielógena aguda (abreviadamente en lo sucesivo AML, por la expresión inglesa Acute Myelogeneous Leukemia) con un inhibidor de elastasa.

FUNDAMENTO DE LA INVENCIÓN

Las células madre son capaces de auto-renovación y división, lo que conduce a más células madre y a células diferenciadas. Las células madre hematopoyéticas (abreviadamente HSC, por la expresión inglesa Hematopoietic

Stem Cells) o las células madre progenitoras (HPC, por la expresión inglesa Hematopoietic Progenitor Cells) tienen la propiedad de dar lugar a suficiente actividad hematopoyética para evitar que un receptor irradiado letalmente sufra una insuficiencia hematopoyética (Morrison et al., 1995) .

La médula ósea contiene células madre mesenquimales y hematopoyéticas. Las células madre mesenquimales dan lugar a los linajes adipocíticos, condrocíticos y osteocíticos, incluyendo las células estromales de la médula ósea (Pittenger et al., 1999) . Se ha encontrado que las células madre hematopoyéticas (HSC) dan lugar a los linajes linfoides, mieloides y eritrocíticos.

En el ratón, las HSC representan una escasa población de 0, 01% de la médula ósea completa y han sido aisladas usando una combinación de marcadores: linaje Thylow - Scal+ c-kithigh (KTLS) . En seres humanos las células madre hematopoyéticas CD34+ Thy-1+ Lin- son las equivalentes humanas de las células madre hematopoyéticas KTLS de ratón (Ikuta et al., 1992) .

Los mecanismos que guían a las células progenitoras hematopoyéticas circulantes (HPC o HSC) son clínicamente significativos debido a que el éxito del trasplante de células madre depende de la focalización eficaz de las células injertadas en la médula ósea del receptor (Mazo and von Adrian, 1999) . Debido a esta focalización (migración dirigida) de las células trasplantadas es por lo que los trasplantes de médula ósea pueden ser realizados por una 25 sencilla infusión intravenosa, en lugar de requerir una cirugía invasiva, como sucede en el caso del trasplante de cualquier otro órgano. La migración dirigida de las HPC se puede definir como el conjunto de interacciones moleculares que permiten circular las HPC para reconocer, adherirse y migrar a través de las células endoteliales de la médula ósea, dando como resultado la acumulación de las HPC en el microambiente único promotor de la hematopoyesis de la médula ósea. La migración dirigida de las células progenitoras se puede concebir como un 30 fenómeno de múltiples etapas. Las HPC que llegan a la médula ósea deben interaccionar primeramente con la superficie luminal del endotelio de la médula ósea. Esta interacción debe ocurrir en segundos después de que las HPC hayan entrado en la microvasculatura de la médula ósea y proporcionen suficiente resistencia mecánica para permitir que las células adherentes resistan la fuerza de cizallamiento ejercida por la sangre circulante. Las HPC adherentes deben pasar luego a través de la capa endotelial para entrar en el compartimento hematopoyético.

Después de extravasación, las HPC encuentran células estromales especializadas cuya yuxtaposición soporta el mantenimiento de la mezcla inmadura de células por un proceso de auto-renovación además de diferenciación, proliferación y maduración de las HPC específicas del linaje, que es un proceso que implica citoquinas derivadas del estroma y otras señales de crecimiento.

Se ha descrito que el factor SDF-1, también denominado factor estimulante del crecimiento de los linfocitos pre-B

(PBSF, por la expresión inglesa pre-B-cell growth-stimulating factor) , es un potente agente de atracción química (quimioquina) para linfocitos, monocitos y células CD34+ primarias. El SDF-1 es un factor quimiotáctico que induce la migración de células y la dirección del movimiento celular es determinada por el gradiente de concentración del SDF-1 (Kim and Broxmeyer, 1998) , bajo en la sangre periférica y alto en la médula ósea. Puesto que el SDF-1 es producido por las células estromales de la médula ósea, se estableció la hipótesis de que se forma un gradiente de 45 SDF-1 entre el microambiente de la médula ósea y el sistema sanguíneo. Este gradiente atrae a las HPC y las retiene en el microambiente de la médula ósea, a no ser que este gradiente sea roto en la sangre por moléculas efectoras administradas o inducidas.

El receptor de SDF-1, CXCR4, se expresa en muchos tipos de células, incluyendo células de la médula ósea, células de la médula ósea movilizadas, células de la sangre del cordón umbilical, incluyendo las sub-población de las céluas 50 CD34+ de la sangre del cordón umbilical, células CD34+CD38-, que son células precursoras hematopoyéticas pluripotentes. El tratamiento de las HPC humanas, células CD34+, con anticuerpos anti-CXCR4 antes del trasplante da como resultado la inhibición del injerto de médula ósea en ratones NOD/SCID trasplantados (Peled et al., Science 1999) .

Las células CD34+ humanas inmaduras y las células primitivas CD34+/CD38-/low, que no migran hacia un gradiente 55 de SDF-1 in vitro, y no se dirigen a la médula ósea de múridos, ni la repueblan in vivo, pueden llegar a ser células repobladoras funcionales por estimulación in vitro durante un corto plazo de 16 a 48 horas con citoquinas, tales como SLF e IL-6 antes del trasplante (Kollet et al., 2000, Peled et al., 1999 Lapidot, 2001) . Estas citoquinas aumentan la expresión de CXCR4 en la superficie, la migración hacia SDF-1 in vitro, la migración dirigida y la repoblación in vivo.

Se ha descrito que el SDF-1 es también un factor clave en la estimulación de la adherencia de las células madre humanas a las células endoteliales en la microvasculatura de la médula ósea (Peled et al., The Journal of Clinical Investigation, 1999) . Por lo tanto, el SDF-1 está implicado no solamente como factor quimiotáctico de las células madre y progenitoras, sino también como mediador de la adhesión celular dependiente de integrinas y de la migración transendotelial requerida para el injerto en la médula ósea.

En toda la vida adulta, el sistema hematopoyético se mantiene por producción constante de células linfoides, mieloides y eritroides maduras, que son liberadas desde la médula ósea (abreviadamente BM, por la expresión inglesa Bone Marrow) a los órganos periféricos y secundarios. Curiosamente, las células madre hematopoyéticas, que residen principalmente en la BM, se encuentran también circulando en la sangre en concentraciones muy bajas. Esta salida de células maduras e inmaduras adecuadas debe estar muy bien regulada, pero los mecanismos moleculares que controlan la migración y salida de células no están caracterizados ampliamente.

Las HPC pueden ser movilizadas desde la médula ósea hasta la sangre periférica en respuesta a citoquinas inyectadas, tales como el factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GMC-SF) , el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) y el factor de Steel (SLF) [Siena et al., 1989, Duhrsen et al., 1988, Drize et al., 1996]. La movilización de células madre desde la médula ósea del donante hasta la sangre y su recuperación de la sangre, para métodos de trasplante, se está usando cada vez más en todo el mundo, y está reemplazando a la recuperación de estas células madre de la médula ósea del donante usando cirugía invasiva.

La movilización permite la repoblación de la médula ósea con HSC propias, recuperadas y reservadas de los pacientes antes de los tratamientos de irradiación y quimioterapéuticos (trasplante autólogo) . La recuperación de las HSC es mayor a partir de la movilización que de la sangre del cordón umbilical o por cirugía de la médula ósea.

Los estudios dirigidos a descifrar el mecanismo de la salida de células madre y progenitoras de la BM se han enfocado en la leucocitosis inducida por diversos agentes inductores de estrés, tales como LPS, quimioquinas o citoquinas, incluyendo el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) , que se emplea ampliamente para movilizar y recoger las HSC para trasplante clínico [To, 1997] [Thomas, 2002]. En los últimos años, ha llegado a establecerse el mecanismo que gobierna la movilización inducida por el G-CSF: el G-CSF induce la expansión de células mieloides que liberan grandes cantidades de proteasas neutrófilas, tales... [Seguir leyendo]

1. El uso de un inhibidor de elastasa en la fabricación de un medicamento para evitar o inhibir la salida de células de la AML desde la médula ósea hasta la sangre en pacientes que padecen AML, o 5 para evitar o inhibir la proliferación de células de la AML.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, para el tratamiento de leucemia aguda.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 2, para el tratamiento de AML.

4. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el inhibidor es un anticuerpo neutralizante de elastasa o MeOSuc-AAPV-CMK o a1-antitripsina.

10 5. Un inhibidor de elastasa para uso en la prevención o inhibición de la salida de células de AML desde la médula ósea hasta la sangre de pacientes que padecen AML o para el uso en la prevención o inhibición de la proliferación de células de AML.

6. El inhibidor de elastasa de la reivindicación 5, para uso en el tratamiento de la leucemia aguda.

7. El inhibidor de elastasa de la reivindicación 6, para uso en el tratamiento de AML.

15 8. Un inhibidor de elastasa de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en donde el inhibidor es un anticuerpo neutralizante de elastasa o MeOSuc-AAPV-CMK o a1-antitripsina.